兩種染色法在肺結核診斷中的對比性研究

陳國麗

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兩種染色法在肺結核診斷中的對比性研究

陳國麗

目的：研究熒光染色法和抗酸染色法在診斷結核病中的靈敏度與陽性率。方法：收集100例疑似肺結核患者的痰液標本，對抗酸染色法及熒光染色法檢測痰液中結核桿菌的陽性檢出率進行比較。結果：熒光染色法檢測±～4+ 為35例，陽性率（35.0％）顯著高于抗酸染色法±～4+為20例，陽性率（20.0％）。結論：熒光染色法操作簡便快捷，低倍物鏡觀察，陽性檢測率高，有效減少漏檢誤檢，適合在肺結核病診斷中運用。

肺結核診斷 熒光染色法 抗酸染色法 痰涂片

對于結核疾病的診斷，主要通過結核桿菌的檢查和病理分析來進行的。對肺結核的早診斷、早治療，對于疾病的治療與預后，減少耐多藥結核產生有著重要意義［1］。為了進一步研究結核病患者診斷中不同檢測方式的靈敏度與陽性率，提高結核診斷準確率，對來我中心進行結核病診斷的100例疑似患者痰標本研究分析如下：

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2010年1月-2011年12月來我院進行結核病診斷的100例患者痰液標本，其中，男64例，女36例，平均年齡為57.8歲。6例原發性結核，78例繼發性結核，16例結核性胸膜炎。對上述100例患者痰標本均進行抗酸染色法及熒光染色法染色鏡檢查痰液中的結核桿菌陽性率，并進行比較。

1.2 材料與方法 收集結核病患者的痰液標本100份放置在無菌密閉的痰盒中，嚴格按照《結核病診斷細菌學規程》操作挑取痰標本中干酪樣、膿樣痰標本，在玻片右側2/3處均勻涂抹成10cm×20cm大小的卵圓形痰膜，同一份標本制備2張痰玻片，待涂片自然干燥后，分別放置在染色架上，火焰固定，將固定好的痰片按下列步驟進行熒光染色和抗酸染色。

1.2.1 熒光染色法 ①在痰膜上滴加0.1％的金胺0染液，30分鐘，流水沖洗。②滴加3％鹽酸乙醇，脫色3分鐘或至無色，流水沖洗。③滴加0.5％高錳酸鉀復染液，染色1分鐘，流水沖洗。④將染色后的玻片置于玻片架上，自然干燥，在熒光染顯微鏡（Primo Star EX30）下進行形態學檢測。

1.2.2 抗酸染色法 ①在痰膜上滴加0.8％的石碳酸復紅染液，加熱至出現蒸汽，保持5min，流水沖洗。②滴加5％的鹽酸乙醇，脫色1min，流水沖洗。③滴加0.06％的亞甲藍復染液，染色30s，流水沖洗。④將染色后的玻片置于玻片架上，自然干燥后，進行抗酸染色普通光學顯微鏡（Nikon ECLIPSE E200）下進行形態學檢測。結合顯微鏡檢測進行數據分析。

1.2.3 試劑 熒光染色法和抗酸染色法試劑均由貴陽市疾控中心提供。

1.3 統計學方法 采用SPSS15.0數據處理軟件進行綜合處理，計數資料行χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

熒光染色法檢測陽性±～4+為35例，陽性率（35.0％），抗酸染色法±～4+為20例，陽性率（20.0％），差異具有統計學意義（P＜0.05）。提示熒光染色法檢出率靈敏度明顯高于抗酸染色法。見表1。

表1　兩種方法檢測結果分析 （例）

3 討 論

結核是一種由結核分枝桿菌入侵機體內部導致感染的常見疾病，是經常發生于青壯年的緩發慢性傳染病，經由呼吸系統進行疾病傳播，疾病潛伏期為4～8周［2］。約80％以上的結核病變發生在肺部，少部分病變發生在骨骼、皮膚、淋巴等部位。隨著人們生活水平的不斷提升，人群的大面積流動，給結核病的防控和規范性治療增加了難度。早期結核癥狀不顯著，且表現多樣化，很容易造成誤診。近幾年，隨著艾滋病的不斷傳播以及環境污染加劇，結核病的發病趨勢呈現逐年上升趨勢。實驗室進行結核病診斷，主要通過細菌學培養以及痰涂片檢測，細菌培養所需要時間比較長，約2～8周，尤其是針對無痰的結核患者更難以確診。X線健康檢查，對于初次感染未出現結核病灶患者，沒有實際指導意義。因此，及時、準確的診斷出結核病，對于患者治療預后有很好的療效，并且對控制耐多藥結核的產生起到阻止作用。痰涂片實驗常用于結核分枝桿菌的初篩檢測，該檢測方式價格便宜、操作簡便［3］。

在本研究中，對100例同一份痰液標本同時制備2張玻片進行抗酸染色及熒光染色，結果熒光染色法檢測±～4+為35例，陽性率（35.0％）顯著高于抗酸染色法檢測±～4+為20例，陽性率（20.0％），差異具有統計學意義（P＜0.05）。在結果比較中發現，熒光染色法用低倍物鏡（40X）觀察靈敏度更高，縮短觀察同樣多視野所用的時間，不易漏檢，減輕檢測技術人員工作強度。抗酸染色法用普通光學顯微鏡（100X）油鏡觀察具有一定的局限性，染色過程需要很好地掌握加熱時間和溫度。標本中含菌量的多少會直接影響檢測結果的準確性。熒光染色方法在熒光顯微鏡下觀察，背景為黑色，分枝桿菌菌體呈現亮黃色，這就在結核桿菌辨識上更加準確、清晰，不容易發生誤檢或漏檢的情況［4］。抗酸染色法在顯微鏡環境下背景是藍色的，分枝桿菌菌體為紅色，相對來說辨析度不高，缺乏的一定的清晰性。在具體的檢測過程中，熒光染色方法不需要進行加熱，而且，在顯微鏡環境下有100個左右視野，能夠較全面的檢查。與此同時，該操作方式比較簡便，很容易控制整個實驗過程，提高工作效率。抗酸染色法在進行檢測的過程中，需要進行加熱，如果加熱時間掌握不合理，有可能導致染液干涸，菌膜起層易被水沖掉，導致菌體不著色或著色不均，影響鏡檢結果判斷，在耗費了大量人力、時間的基礎上，工作效率無法保障，檢測的及時性與準確性也無法保障。本文研究中的陽性比例以及分布情況來看，如果痰液標本中的分支桿菌數量比較少，那么，抗酸染色法檢測的準確率不高，需要進行重復性檢查。熒光檢測法就能夠有效避免這一問題，操作相對簡單染色過程穩定。

綜上所述，結核病患者臨床診斷中，熒光染色法應用效果顯著，操作方便、快捷，陽性檢測率高，有效減少漏檢、誤檢率，具有推廣使用價值，尤其是基層實驗室。

［1］趙平，張淑芳，高文慧，等.北京市朝陽區肺結核病患者細菌學檢驗結果分析［J］.中國衛生檢驗雜志，2008，18（9）∶1821～1822.

［2］中國防癆協會基礎專業委員會.結核病診斷實驗室檢驗規程［M］.北京∶中國教育文化出版社，2006∶13～29.

［3］Horne DJ，Johnson CO，Oren E，et al. NaritaM. How soon should patients with smear-positivetuberculosis be released from inpa-tient isolation Infect Control［J］. Hosp Epidemiol，2010，31（1）∶78～84.

［4］周步全，朱建峰，王迎春，等.結核分枝桿菌標本的不同處理方法對 PCR 擴增敏感性的影響［J］.現代醫學檢驗雜志，2010，20（6）∶60～63.

Two kinds of staining in the diagnosis of tuberculosis comparative study

Guiyang huaxi district center for disease control and prevention，Guiyang 550025，Guizhou
CHEN Guo-li

Objective：To study the fluorescent dyes and acid dyes in the diagnosis of sensitivity and the positive rate of tuberculosis （TB）.Methods：collected 100 cases of patients with suspected tuberculosis sputum specimens，against acid staining method and fluorescent staining detection of mycobacterium tuberculosis in sputum positive detection rate.Results：the fluorescent staining detection ±～ 4 + for 35 cases， positive rate （35.0％） is significantly higher than acid staining method ± ～ 4 + 20 cases， positive rate （20.0％）.Conclusion：the fluorescent staining method is simple and quick，low-power objective observation， positive detection rate is high， effectively reduce the residual error checking， suitable for use in tuberculosis diagnosis.

Tuberculosis diagnosis；Fluorescent staining；Anti-acid staining；Sputum smear /（編審：陳 強）

R521

A

1671-8054（2016）03-0165-02

貴陽市花溪區疾病預防控制中心 貴州 550025
2016-02-01收稿，2016-04-01修回