463株血培養陽性病原菌分布及耐藥分析

劉德華 秦海燕 胡大春 盧贊 任寶軍 王霞 尹麗民 錢凈

（昆明市第一人民醫院檢驗科，云南 昆明 650211）

463株血培養陽性病原菌分布及耐藥分析

劉德華 秦海燕 胡大春 盧贊 任寶軍 王霞 尹麗民 錢凈

（昆明市第一人民醫院檢驗科，云南 昆明 650211）

目的：分析我院2014年檢出的463株血培養陽性菌的分布及耐藥狀況。方法：回顧經BD 9240和Bact/A l ert 3D 240血培養系統進行培養，使用V i t ec2 com pact對分離菌株鑒定及藥敏試驗。數據分析采用W honet 5.6軟件。結果：463株非重復分離菌中革蘭陰性菌286株（61.77%）；革蘭陽性菌156株（33.69%）；真菌21株（4.54%）。本研究共檢出金黃色葡萄球菌29株，其中耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（M RSA）7株（24.14%）；甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（M SSA）22株（75.86%）；凝固酶陰性葡萄球菌（CN S）92株，其中耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌（M RCN S）81株（88.04%），甲氧西林敏感凝固酶陰性葡萄球菌（M SCN S）11株（11.96%）。M SSA與M RSA在慶大霉素、利福平、萬古霉素、利奈唑胺、替考拉寧、環丙沙星、左氧氟沙星耐藥率方面有差異（P＜ 0.05）。M RCN S與M SCN S在萬古霉素、利奈唑胺、替考拉寧、慶大霉素、環丙沙星、左氧氟沙星、復方磺胺甲唑耐藥率方面有差異（P＜ 0.05）。屎腸球菌對青霉素耐藥率為90.9%，未檢出對萬古霉素耐藥的屎腸球菌。產超廣譜β內酰胺酶（ESBLs）大腸埃希菌占比52.59%。產ESBLs肺炎克雷伯菌占比40.32%。產ESBLs大腸埃希菌菌株與非產ESBLs菌株在氨曲南、頭孢他啶、氯霉素、環丙沙星、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢吡肟、頭孢唑林及左氧氟沙星耐藥率方面有差異（P＜ 0.05）。產ESBLs肺炎克雷伯菌菌株與非產ESBLs菌株在氨曲南、頭孢他啶、氯霉素、環丙沙星、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢吡肟、頭孢唑林、左氧氟沙星、頭孢西丁及氨芐西林-舒巴坦耐藥率方面有差異（P＜ 0.05）。銅綠假單胞菌檢出3株泛耐藥菌株（15.78%），鮑曼不動桿菌泛耐藥菌株4株（22.22%），沙門氏菌耐藥率均低于6.5%。結論：血培養陽性分離菌分布廣泛，不同病原菌間耐藥性亦不相同。應加強對血培養病原菌分布和耐藥性的監測。

血培養；病原菌分布；耐藥性

血流感染包括菌血癥和敗血癥，是致病菌或條件致病菌侵入血液中生長繁殖并釋放毒素和代謝產物而引起的急性重癥感染性疾病，其發病率和致死率都較高。隨著各種血管留置導管技術的快速發展，各種侵襲性操作的推行、移植手術的開展以及臨床抗菌藥物的廣泛應用和大量免疫受損宿主的出現，條件致病菌所致的血流感染有增長的趨勢，對抗菌藥物的耐藥性也發生了變化。為此回顧我院2014年血培養陽性菌株分布及耐藥資料，旨在為臨床治療血流感染提供數據參考。

1 材料和方法

1.1 標本來源

昆明市第一人民醫院2014年全年住院及門診患者送檢的血培養標本中連續分離的不重復病原菌463株。

1.2 標本采集與培養方法

參照《血培養檢測規范化操作》[1]進行標本的正確采集，并將其快速置于BD 9240或Bact/A l ert 3D 240血培養儀中進行連續震蕩培養和檢測，儀器報警有陽性瓶時，取出后無菌操作抽取培養液立即革蘭染色作初級報告，并快速轉種血平板、巧克力平板、麥康凱平板等進行五區劃線方式培養，待其菌落生長良好備用。如7天儀器未報陽性，則盲種后觀察有無細菌生長，若有細菌生長，則進一步做菌株鑒定。

1.3 儀器與試劑

血培養使用BD 9240和 Bact/A l ert 3D 240血培養儀，細菌鑒定及藥敏試驗使用V i t ec2 com pact。試劑使用與儀器配套的相應培養基、鑒定卡。

1.4 質控菌株

金黃色葡萄球菌A TCC25923，糞腸球菌A TCC 29212，大腸埃希菌 A TCC25922，肺炎克雷伯菌A TCC700603，銅綠假單胞菌 A TCC27853和白色念珠菌A TCC66027等由國家衛生計生委臨床檢驗中心提供。

1.5 統計學處理

判斷標準依據CLSI M 100-S24[2]，細菌菌譜及耐藥性分析采用W honet 5.6軟件和SPSS l 6.0軟件。針對抗菌藥的耐藥率差異，采用χ2檢驗進行統計學分析（當檢出菌株數小于40時用確切概率法計算概率），P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血培養陽性標本菌株的分布及構成

11 423份血培養標本中陽性標本 925份，陽性率8.10%，剔除重復菌株（雙瓶或多瓶培養出同一細菌），共檢出病原菌463株，其中革蘭陰性菌286株（61.77%）；革蘭陽性菌156株（33.69%）；真菌21株（4.54%）。463份陽性菌株數量排序依次為大腸埃希菌（135株，29.16%）、凝固酶陰性葡萄球菌（92株，19.87%）、肺炎克雷伯菌（62株，13.39%）、沙門氏菌（34株，7.34%）、金黃色葡萄球菌（29株，6.26%）、銅綠假單胞菌（19株，4.10%）、鮑曼不動桿菌（18株，3.89%）、屎腸球菌（11株，2.38%）等。

2.2 革蘭陽性球菌藥敏試驗結果分析

本研究共檢出金黃色葡萄球菌29株，其中耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（M RSA）7株，占24.14%；甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（M SSA）22株，占75.86%；凝固酶陰性葡萄球菌（CN S）92株，其中耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌（M RCN S）81株，占 88.04%；甲氧西林敏感凝固酶陰性葡萄球菌（M SCN S）11株，占11.96%。M SSA與M RSA在慶大霉素、利福平、環丙沙星、左氧氟沙星耐藥率方面有差異（P＜0.05）。M RCN S與M SCN S在慶大霉素、環丙沙星、左氧氟沙星、復方磺胺甲耐藥率方面有差異（P＜0.05）。屎腸球菌對青霉素耐藥率為90.9%，未檢出對萬古霉素耐藥的屎腸球菌。詳見表1。

2.3 革蘭陰性桿菌耐藥率分析

大腸埃希菌共檢出135株，其中產超廣譜β內酰胺酶（ESBLs）大腸埃希菌為 71株，占比52.59%。肺炎克雷伯菌共檢出62株，其中產ESBLs肺炎克雷伯菌25株，占比40.32%。產ESBLs大腸埃希菌菌株與非產ESBLs大腸埃希菌菌株在氨曲南、頭孢他啶、氯霉素、環丙沙星、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢吡肟、頭孢唑林及左氧氟沙星耐藥率方面有差異（P＜0.05）。產ESBLs肺炎克雷伯菌菌株與非產ESBLs肺炎克雷伯菌菌株在氨曲南、頭孢他啶、氯霉素、環丙沙星、頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢吡肟、頭孢唑林、左氧氟沙星、頭孢西丁及氨芐西林-舒巴坦耐藥率方面有差異 （P＜0.05）。銅綠假單胞菌檢出3株泛耐藥菌株，占比15.78%。鮑曼不動桿菌泛耐藥菌株4株，占比22.22%。詳見表2。沙門氏菌檢出34株，對常規檢測藥物耐藥率如下：氨芐青霉素3.2%，頭孢曲松3.2%，左氧氟沙星0.3%，復方磺胺甲6.5%，氯霉素6.5%。

表1 革蘭陽性球菌對抗菌藥物的耐藥率 （%）

表2 革蘭陰性桿菌對抗菌藥物的耐藥率 （%）

3 討論

本研究顯示，血培養陽性檢出菌中革蘭陰性菌占 61.77%，革蘭陽性菌占 33.69%，真菌 4.54%。張凱等[3]報道的四川地區也是革蘭陰性菌檢出數量占優，然而凌華志等[4]研究顯示檢出數量上陽性菌占優。菌株檢出前幾位也與張凱等[3]的報道接近，只是本研究中陰溝腸桿菌檢出數量較少。說明病原菌的分布具有地域性特征。國外G al es A C等[5]報道血流感染中最常見的病原菌與本文基本一致。

本研究中M RSA檢出率24.14%；比呂媛等[6]報道的54.5%要低。M RCN S檢出率與呂媛等[6]報道相當。表明我院在金黃色葡萄球菌菌血癥治療上選擇β-內酰胺類抗菌藥壓力相對較小。據報道[7-8]在美國、日本等已發現耐萬古霉素的葡萄球菌，我國目前雖未檢出對萬古霉素耐藥的金黃色葡萄球菌，但此項感染防控工作依然應得到重視。本研究中屎腸球菌對青霉素耐藥率高達90.9%，對萬古霉素未發現耐藥，與李曉琴等[9]的研究結論相似。

本研究中產ESBLs大腸埃希菌菌株檢出率為52.59%；產 ESBLs肺炎克雷伯菌菌株檢出率為40.32%；上述兩菌未發現有耐碳青霉烯酶的情況。董海新等[10]也有相同研究結論。K ai ser RM[11]認為耐碳青霉烯酶的腸桿菌特別是肺炎克雷伯菌逐年快速上升，本文雖未檢出此類細菌，但可能由于數據有限未揭示出規律，還應加強數據監測。泛耐藥銅綠假單胞菌及鮑曼不動桿菌發生率分別為15.78%及22.22%，泛耐藥菌株的出現造成臨床治療困難，多黏菌素單劑及其聯合治療可能成為新的解決手段[12]。

[1] 徐英春，倪語星，王金良.血培養檢測規范化操作[M].上海：上海科學技術出版社，2012.

[2] Cl i ni cal and Laborat ory St andards Inst i t ut e．Perform ance St andards for A nt i m i crobi alSuscept i bi l i t y Test i ng[S].CLSI docum ent M 100-S24，2014.

[3] 張凱，喻華，黃湘寧，等.8548例血流感染病原菌分布及耐藥性分析[J].中國執業藥師，2014，11（9）：3-8.

[4] 凌華志，沈繼錄，王中新，等.血培養陽性分離菌的分布和耐藥性分析[J].中國感染與化療雜志，2014，14（5）：420-424.

[5] G al es A C，Cast anei ra M，Jones RN，et al.A nt i m i crobi al resisance am ong G ram-negat i ve baci l l ii sol at ed from l at i n A m eri ca：resul t s from Sent ry A nt i m i crobi al Survei l l ance Program.Lat i n A m eri ca，2008-2010[J].D i agn M i crobi ol Infect D i s，2013，73（4）：354-360.

[6] 呂媛，李耘，薛峰，等.衛生部全國細菌耐藥監測網（M ohnari n）2011-2012年度血流感染細菌耐藥監測報告[J].中國臨床藥理學雜志，2014，30（3）：278-288.

[7] Rahkonen M，Lut t i nen S，K oskel a M，et al.True bact erem i as aused by coagul ase negat i ve St aphyl ococcus are di ffi cul t t o di st i ngui sh from bl ood cul t ure cont am i nant s[J].Eur J Cl i n M i crobi olInfectD i s，2012，31（10）：2639-2644.

[8] H eal y CM，Baker CJ，Pal azzi D L，et al.D i st i ngui shi ng t rue coagul ase-negat i ve St aphyl ococcus i nfect i ons from cont am i nant s i n t he neonat ali nt ensi ve care uni t[J].J Peri nat ol m，2013，114（11）：113-121.

[9] 李曉琴，王焱，覃珊.醫院獲得性血流感染患者病原菌分布及耐藥性分析[J].中華醫院感染學雜志，2014，24（11）：2629-2631.

[10] 董海新，胡小行，金呈強.血流感染病原菌種類及耐藥性分析[J].中華醫院感染學雜志，2014，24（9）：2104-2106.

[11] K ai ser RM，Cast anhei ra M，Jones RN，et al.Trends i n K l ebsi el l a Pneum oni a carbapenem ase-posi t i ve K.pneum oni ae i n U S hospi t al s：reportfrom t he 2007-2009 SEN TRY A nt i m i crobi al Survei l l ance Program [J].D i agn M i crobi ol Infect D i s，2013，76（4）：356-360.

[12] 劉立凡，陳佰義.多粘菌素B與美羅培南聯合用藥對泛耐藥銅綠假單胞菌體外抗菌活性的研究[J].中國生化藥物雜志，2014，34（2）：40-41.（收稿日期：2014-12-12）

Analysis of Pathogen Distribution and Drug Resistance of 463 Strains of Blood Culture Positive

Li u D ehua，Q i n H ai yan，H u D achun，Lu Zan，Ren Baoj un，W ang X i a，Y i n Li m i n，Q i an Ji ng（D epart m ent of Cl i ni cal Laborat ory of t he Fi rst Peopl e’s H ospi t al of K unm i ng Ci t y，Y unnan K unm i ng 650211，Chi na）

Objective：To i nvest i gat e and anal yze t he pat hogen di st ri but i on and drug resi st ance of 463 st rai ns of bl ood cul t ure posi t i ve det ect ed i n our hospi t al i n 2014.Methods：BD 9240 and Bact/A l ert 3D 240 bl ood cul t ure syst em s w ere used.Ident i fi cat i on and drug sensi t i ve t est of t he i sol at ed bact eri al st rai ns w ere conduct ed usi ng V i t ec2 com pact.D at a w as anal yzed by W honet 5.6 soft w are.Results：In t he st udy 286 st rai ns（61.77%）w ere det ect ed as t he G ram-negat i ve bact eri a，156 st rai ns （33.69%）w ere G ram-posi t i ve，and 21 st rai ns （4.54%）w ere fungi. A bout 29 st rai ns w ere det ect ed as Staphylococcus aureus，i ncl udi ng 7 M RSA st rai ns （24.14%），22 M SSA st rai ns（75.86%）and 92 st rai ns of coagulase-negative staphylococcus，w i t h 81 M RCN S st rai ns（88.04%）and 11 M SCN S st rai ns（11.96%）.Si gni fi cant di fference of resi st ant rat es（P＜ 0.05）of M RSA and M SSA w ere show ed t o gent am yci n，ri fam pi n and vancom yci n，l i nezol i d，t ei copl ani n，ci profl oxaci n and l evofl oxaci n and si gni fi cant di fference ofresi st antrat es ofM RCN S and M SCN S （P＜0.05）w ere found i n vancom yci n，l i nezol i d，t ei copl ani n，gent am yci n，ci profl oxaci n，l evofl oxaci n and com pound sul fam et hoxazol e.The resi st ant rat e of Enterococcus faecium t o peni ci l l i n w as 90.9%butno resi st ance w as det ect ed t o vancom yci n.The st rai ns of ESBLs i n E.coli w ere account ed for 52.59% and 40.32% w as ESBLs i n Klebsiella pneumoniae.There w ere di fferent resi st ant rat es（P＜ 0.05）of E.coli（ESBLs+）and E.coli（ESBLs-）i n azt reonam，ceft azi di m e，chl oram pheni col，ci profl oxaci n，ceft ri axone，cefot axi m e，cefepi m e，l evofl oxaci n and cefazol i n.The di fferentresi st antrat es （P＜0.05）of Klebsiella pneumoniae （ESBLs+）and Klebsiella pneumoniae（ESBLs-）w ere show ed i n azt reonam，ceft azi di m e，chl oram pheni col，ci profl oxaci n，ceft ri axone，cefot axi m e，cefepi m e，cefoxi t i n，am pi ci l l i n/sul bact am，l evofl oxaci n and cefazol i n.Three st rai ns （15.78%）of pan-drug resi st ant Pseudomonas aeruginosa and 4 st rai ns （22.22%）of pan-drug resi st ant Acinetobacter baumannii w ere det ect ed.The resi st ant rat e of salmonella w as l ess t han 6.5%.Conclusion：There i s a w i de di st ri but i on of posi t i ve i sol at es from bl ood cul t ure and t he resi st ance rat es of di fferent bact eri a vari ed.The m oni t ori ng of pat hogeni c di st ri but i on of bl ood cul t ure and drug resi st ance shoul d be st rengt hened.

Bl ood Cul t ure；Pat hogen D i st ri but i on；D rug Resi st ance

10.3969/j.i ssn.1672-5433.2015.04.003

衛生部公益性行業科研基金（201002021）；云南省教育廳科學研究基金項目（2010C097）

劉德華，男，碩士，主治醫師。研究方向：細菌耐藥機制及流行病學研究。E-m ai l：l i udehua12340244@si na. com.cn