BRAF基因與結直腸癌預后的關系

葉　薇，陳智偉，林海鳳，陳玉琳，肖　芳，卓立飛，林　晶

莆田學院附屬醫(yī)院病理科，福建莆田　351100

BRAF基因與結直腸癌預后的關系

葉薇，陳智偉，林海鳳，陳玉琳，肖芳，卓立飛，林晶

莆田學院附屬醫(yī)院病理科，福建莆田351100

目的 探討B(tài)RAF基因對結直腸癌預后的影響。方法 整群收集2011年1月—2013年1月期間在莆田學院附屬醫(yī)院確診結直腸癌并行結直腸癌根治術的患者153例，其中BRAF基因突變陽性的患者18例（實驗組），BRAF基因突變陰性患者135例（對照組），所有患者均具有完整的隨訪資料。回顧性分析兩組的隨訪資料，總結BRAF基因突變的突變類型，并分析BRAF基因突變陽性對患者預后的影響。結果 在該研究中，發(fā)現BRAF基因突變型18例（11.8%），其中位于V600E突變15例，占所有突變患者83.3%；位于exon11上的甘氨酸環(huán)的突變?yōu)?例，占所有突變患者14.3%，未見其他位點突變。 BRAF基因突變多見于近端結腸，而遠端結腸及直腸較少見，二者的差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。BRAF基因在腫瘤分化程度、病理浸潤深度、淋巴結轉移等方面的差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。平均隨訪時間為1～60個月，生存時間為3～60個月，平均生存時間為（35.2±21.5）個月。生存分析實驗組的平均生存時間為（19.7±16.8）個月，術后1、2、3、4、5年總生存率分別為61.1%、27.8%、22.2%、5.6%、5.6%。Log-rank檢驗顯示兩組間總生存率的差異有統(tǒng)計學意義（P=0.001）。結論 結直腸癌患者癌組織BRAF基因突變率與患者生存率成負相關，提示患者預后不良。

結直腸癌；BRAF基因突變；生存率；預后

［Abstract］Objective To explore the mutated BRAF gene's influence on the prognosis of colorectal cancer.Methods Group collected in January 2011—January 2013 in putian college affiliated hospital diagnosis of colorectal cancer in parallel，153 cases of patients with colorectal cancer radical，18 patients with the mutated BRAF gene mutation positive（experimental group），mutated BRAF gene mutation negative patients，135 cases（control group），all patients were with complete follow-up data.Two groups of follow-up data were retrospectively analyzed，summarizes the mutated BRAF gene mutation types of mutations，and analyze the mutated BRAF gene mutation positive impact on the prognosis of patients.Results This study，we found the BRAF gene mutation type in 18 cases（11.8%），which is located in the V600E mutation in 15 cases（such as in Figure 2），accounted for all of the mutations were 83.3%；in exon11 glycine loop mutations in 3 cases，accounted for all of the mutations were 14.3%.No other site mutation.BRAF gene mutations were more common in the proximal colon，while the distal colon and rectum were rare，and the differences between the two were statistically significant（P＜0.05）.BRAF gene in tumor differentiation，depth of invasion，lymph node metastasis and other aspects of the difference is statistically significant（P＜0.05）.Mean follow-up time was 1～60 months，the survival time was 3～60 months，the average survival time was（35.2±21.5）months.Survival analysis of the experimental group average survival time was（19.7±16.8）months，1 years，2 years，3 years，4 years，5 years，the overall survival rate was 61.1%，27.8%，22.2%，5.6%，5.6%.Log-rank test showed that there was a significant difference in the overall survival rate between the two groups（P=0.001）.Conclusion Patients with colorectal cancer patients with carcinoma tissue BRAF gene mutation rate and survival rate into negative correlation，the patient prognosis.

［Key words］Colorectal cancer；The mutated BRAF gene mutation；The survival rate；Prognosis

在人類腫瘤中BRAF基因主要見于惡性黑色素瘤、乳頭狀甲狀腺癌、結直腸癌。作為鼠類肉瘤濾過性毒菌致癌同源體B1的家族成員，BRAF基因位于7q34，長約190kb，可編碼一個783個氨基酸組成的BRAF蛋白，該蛋白與KRAS蛋白同為Ras-Raf-MEK-ERK信號通路中上游重要調節(jié)因子，調控 “畸形隱窩灶-增生性息肉-鋸齒狀腺瘤-癌”途徑［1］。現階段對KRAS基因對患者預后的研究已經較為明確，即KRAS基因突變對患者預后沒有影響。而BRAF基因對結直腸癌患者預后是否有影響仍較少有報道。該文擬對收集2011年1月—2013年1月期間在莆田學院附屬醫(yī)院確診結直腸癌并行結直腸癌根治術的患者153例，這些BRAF基因與患者預后進行探討，現報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

整群收集在莆田學院附屬醫(yī)院確診結直腸癌并行結直腸癌根治術的患者153例，其中39例行腹腔鏡輔助下R0根治術，102例行傳統(tǒng)開放性R0根治術。所有病例均經術后病理確認（圖1），腫瘤分期采用AJCC分期標準。所有病人的臨床病理資料見表1。

圖1　153例患者病例研究

1.2統(tǒng)計方法

數據采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析。符合正態(tài)分布的計量資料以表示，組間采用獨立樣本t檢驗比較分析；非正態(tài)分布的計量資料以中位數（范圍）［M（R）］表示，組間分析比較方法采用獨立樣本非參數檢驗（秩和檢驗）。計數資料以［n（%）］表示，組間分析采用χ2檢驗進行比較。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1 BRAF基因突變率及突變類型分析

在該研究中，發(fā)現BRAF基因突變型18例（11.8%），其中位于V600E突變15例（如圖2），占所有突變患者83.3%；位于exon11上的甘氨酸環(huán)的突變?yōu)?例，占所有突變患者14.3%，未見其他位點突變。見表2。

表1　所有病人臨床病理資料［n（%）］

圖2　V600E突變

表2　BRAF基因突變類型

2.2 BRAF基因突變與結直腸癌臨床病理特征的關系

BRAF基因突變率與患者年齡、性別、TNM分期等臨床病理特征均差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。BRAF基因突變多見于近端結腸，而遠端結腸及直腸較少見，二者的差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。BRAF基因在腫瘤分化程度、病理浸潤深度、淋巴結轉移等方面的差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。具體見表3。

表3　BRAF基因突變與臨床病理資料的關系

2.3 BRAF基因突變率與結直腸癌患者預后的關系

隨訪信息隨訪于2016年1月30日完成，隨訪1～60個月，生存時間為3～60個月，平均生存時間為（35.2± 21.5）個月。153例患者中11例健在，19例帶瘤生存，124例死亡，未見失訪病例。腫瘤復發(fā)14例，均為局部復發(fā)，復發(fā)率為9.1%。109例發(fā)生腫瘤轉移，其中肝轉移78例，肺轉移 9例，肝肺同時轉移 12例，其他部位轉移10例。125例死亡病例中，腫瘤相關死亡病例106例。

生存分析實驗組的平均生存時間為（19.7±16.8）個月，術后1、2、3、4、5年總生存率分別為61.1%、27.8%、22.2%、5.6%、5.6%。對照組的平均生存時間為（37.3± 21.3）個月，術后1、2、3、4、5年總生存率分別為85.2%、 74.8%、56.3%、44.4%、18.5%。Log-rank檢驗顯示兩組間總生存率的差異有統(tǒng)計學意義（P=0.001）。具體見圖3。

圖3　兩組患者生存時間比較

3　討論

結直腸癌是常見的消化道腫瘤之一，隨著人民生活水平及飲食結構的改善，結直腸癌的發(fā)病率及死亡率逐年上升。應敏剛等［2］研究發(fā)現福建省結直腸癌發(fā)病率及死亡率均居于所有癌癥第5位。結直腸癌的發(fā)病是由環(huán)境及遺傳因素等多因素、多基因相互作用的結果，其主要的發(fā)生機制包括：染色體不穩(wěn)定（chromosome instability，CIN）途徑、微衛(wèi)星不穩(wěn)定（microsatellite instability，MSI）途徑、CpG島甲基化表型（CpG island methylator phenotype，CIMP）途徑、以及“畸形隱窩灶-增生性息肉-鋸齒狀腺瘤-癌”途徑，而BRAF基因作為Ras-Raf-MEK-ERK信號通路中上游重要調節(jié)因子在鋸齒狀途徑中起到了關鍵的作用［3］。其次研究顯示，KRAS基因的突變狀態(tài)與結直腸癌患者接受抗EGFR治療的效率密切相關，只有野生型KRAS患者才能從抗EGFR的治療中獲益，但是仍有一部分野生型患者對抗EGFR治療無效，所有仍需尋找KARS之外的療效預測指標提高預后預測的準確性。BRAF基因作為EGFR下游信號傳導通路的重要分子，其基因狀態(tài)將影響信號通路的傳導，近年來在結直腸癌的靶向治療上已成為了新的研究熱點。由此可見研究BRAF基因與患者預后的關系將有助于為CRC的治療提供新的思路及參考。

該研究中，從結直腸癌組織檢測得到的結果是BRAF基因的突變率是11.8%，其中的主要突變位點是V600E位點（83.3%）。國內學者高靜等對915例結直腸癌患者進行BRAF基因分析，發(fā)現其BRAF突變的發(fā)生率為4.4%（40/915），突變類型以V600E常見，且BRAF基因多數發(fā)生在腫瘤分化程度低和右半結腸（P＜0.05）。可能是樣本大小不同或檢測方法的差異，Zlobec等［4］相關研究結果顯示BRAF基因的突變率在4%～13%，與該研究相符。其次該研究BRAF基因突變多見于近端結腸，而遠端結腸及直腸較少見。BRAF基因突變型在腫瘤低分化、病理浸潤深度程度深、淋巴結轉移多的患者中比較常見，具有差異有統(tǒng)計學意義。而在年齡、性別、TNM分期等臨床病理特征上均無顯著相關性。伍潔［5］對166例結直腸癌患者癌組織進行BRAF基因分析顯示在腫瘤分化、病理浸潤深度、淋巴結轉移方面存在與該研究相似的結果。朱曉麗等人［6］的研究結果顯示BRAF基因突變最長發(fā)生于V600E位點，結腸癌的BRAF基因突變率高于直腸癌，右半結腸癌高于左半結腸癌，與該研究結果大致相符；同時該項研究表明BRAF基因突變與患者的性別相關，且女性的發(fā)病率高于男性患者。曹祥龍等［7］提出BRAF基因突變更常見于老年患者，而該研究未見此結果。對于該研究與該研究不符的情況考慮是樣本的選擇、樣本的大小及檢測方法的差異造成的。BRAF基因突變型與野生型二者的患者術后生存率的差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），隨著生存時間的延長，突變型患者的生存率顯著下降，但是在5年生存率上差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），這可能患者死亡病例增多，樣本縮小有關。Ogino S等［8］也表示攜帶BRAF基因突變的結直腸癌患者的預后較差。而造成BRAF基因突變型患者生存率下降的可能原因是BRAF基因在結直腸癌的“畸形隱窩灶-增生性息肉-鋸齒狀腺瘤-癌”途徑過程中扮演著催化者的角色，其突變導致了MAPK通路的激活，協助細胞內信號的傳遞，促進癌細胞增值、永生化，限制了癌細胞的分化，增加了癌細胞的侵襲性生長有關［9］。

綜上所述，結直腸癌的發(fā)病是受到復雜的網絡系統(tǒng)調控，是一個多基因、多途徑的的過程。隨著BRAF基因突變預后不良的預測性相關研究的深入，出于對目前基因檢測方法及靶向藥物昂貴等現狀的考慮，我們呼吁結直腸癌患者在選擇治療方案前先進行相關基因的檢測了解腫瘤的復發(fā)轉移風險，同時做好藥敏實驗，有助于更加準確的用藥，降低治療成本，提高治療療效，實現個體化資料。

［1］Chan TL，Zhao W，Leung SY，et al.braf and kras mutations in colorectal hyperplastic polyps and serrated adenomas［J］. Cancer Res，2003，63（16）：4878-4881.

［2］應敏剛.2014年福建省惡性腫瘤報告［M］.福州：福建科學技術出版社，2014：92-105.

［3］陳慧.結直腸癌發(fā)生機制研究進展［J］.胃腸病學，2013，18（3）：188-190.

［4］Zlobec I，Bihl MP，Schwarb，H et al.clinicopathological and protein characterization of braf-and k-ras-mutated colorectal cancer and implications for prognosis［J］.Int J Cancer，2010，127（2）：367-380.

［5］伍潔.結直腸腺癌BRAF基因突變對臨床治療和預后的意義［J］.中外醫(yī)療，2015（21）：55-56.

［6］朱曉麗，蔡旭，張玲，等.中國結直腸癌患者中KRAS與BRAF基因突變特征及其臨床病理相關性［J］.中華病理學雜志，2012，41（9）：584-589.

［7］曹祥龍，汪欣.結直腸癌KRAS和BRAF基因突變的實驗研究與臨床意義［J］.中國醫(yī)刊，2013，48（7）：23-26.

［8］Ogino S，Nosho K，Kirkner GJ，et al.cpg island methylator phenotype，microsatellite instability，braf mutation and clinical outcome in colon cancer［J］.Gut，2009，58（1）：90-96.

［9］Lee S，Cho NY，Choi M，et al.clinicopathological features of cpg island methylator phenotype-positive colorectal cancer and its adverse prognosis in relation to kras/braf mutation［J］. Pathol Int，2008，58（2）：104-113.

Mutated BRAF Gene Relationship with the Prognosis of Colorectal Cancer

YE Wei，CHEN Zhi-wei，LIN Hai-feng，CHEN Yu-lin，XIAO Fang，ZHUO Li-fei，LIN Ding
Affiliated Hospital of PutianUniversity，Department of Pathology，Putian，Fujian Province，351100 China

R735

A

1674-0742（2016）08（c）－0023-04

10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.24.023

2016-05-25）

葉薇（1981.6-），女，江西上饒人，碩士研究生，主治醫(yī)師，研究方向：腸道腫瘤。

陳智偉（1979.11-），男，福建莆田人，本科，副主任醫(yī)師，研究方向：腫瘤病理診斷，E-mail：drchenzw@sohu.com。