銅綠假單胞菌耐藥性分析及金屬β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)

內(nèi)蒙古婦幼保健院（010020）史今凡

銅綠假單胞菌是一種條件致病菌，隨著抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，銅綠假單胞菌表現(xiàn)出多種抗菌藥物的天然或獲得性耐藥[1]。及時(shí)了解銅綠假單胞菌的耐藥及金屬β-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)情況，對(duì)指導(dǎo)臨床抗生素的合理使用尤為重要，因此我們擬對(duì)2015年1月～2015年10月我院檢驗(yàn)科分離出的200株銅綠假單胞菌進(jìn)行分析，將銅綠假單胞菌耐藥性情況及金屬β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)結(jié)果報(bào)道如下。

1 方法

1.1 細(xì)菌選擇 收集2015年1月～2015年10月我院檢驗(yàn)科分離出的銅綠假單胞菌，采取法國梅里埃公司的VITEK2 COMPACT全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀及配套的藥敏卡。以銅綠假單胞菌ATCC 27853為標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株，藥敏試驗(yàn)采用Kirby-Bauer紙片擴(kuò)散法，藥敏結(jié)果參照美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)頒布的標(biāo)準(zhǔn)判定。金屬β-內(nèi)酰胺酶采用紙片協(xié)同法進(jìn)行測(cè)定。將待測(cè)菌涂布于瓊脂平板，將2張亞胺培南紙片貼在平皿上，其中一張亞胺培南紙片上加入EDTA，抑菌圈直徑較亞胺培南紙片增加6cm為陽性。

1.2 質(zhì)控菌株 大腸埃希菌ATCC25922、VIM-2型金屬β-內(nèi)酰胺酶陽性的PA。

1.3 質(zhì)量控制 要求參與本次研究的臨床微生物室工作人員有扎實(shí)的理論基礎(chǔ)，參加國家臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控考核并合格，并進(jìn)行統(tǒng)一技術(shù)培訓(xùn)。

1.4 觀察指標(biāo) 根據(jù)金屬β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)結(jié)果，將銅綠假單胞菌分為金屬β-內(nèi)酰胺酶陽性組（100株）與金屬β-內(nèi)酰胺酶陰性組（100株）。①分析200株銅綠假單胞菌的標(biāo)本來源。②對(duì)比金屬β-內(nèi)酰胺酶陽性銅綠假單胞菌與金屬β-內(nèi)酰胺酶陰性銅綠假單胞菌的藥敏結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué) 研究數(shù)據(jù)錄入 SPSS18.0分析系統(tǒng)，計(jì)數(shù)資料采用（n，%）表示，用χ2檢驗(yàn)法，當(dāng)P＜0.05，判斷有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 200株銅綠假單胞菌標(biāo)本來源 200株銅綠假單胞菌標(biāo)本來源中以呼吸道標(biāo)本來源最多、其次為尿液、引流管。其中呼吸道標(biāo)本75株，黏液標(biāo)本42株，引流管標(biāo)本31株，血液標(biāo)本28株，其他標(biāo)本24株。

2.2 金屬β-內(nèi)酰胺酶陽性銅綠假單胞菌與金屬β-內(nèi)酰胺酶陰性銅綠假單胞菌藥敏結(jié)果 金屬β-內(nèi)酰胺酶陽性銅綠假單胞菌與金屬β-內(nèi)酰胺酶陰性銅綠假單胞菌的藥敏結(jié)果結(jié)果比較有差異（P＜0.05），見附表。

附表 金屬β-內(nèi)酰胺酶陽性銅綠假單胞菌與金屬β-內(nèi)酰胺酶陰性銅綠假單胞菌藥敏結(jié)果

3 討論

銅綠假單胞菌是人體最重要的條件致病之一，可引起機(jī)體多系統(tǒng)、多臟器、多部位感染。有研究顯示ICU為銅綠假單胞菌感染的高?？剖?，主要與ICU患者抵抗力低，基礎(chǔ)疾病多、病情危重有關(guān)。

銅綠假單胞菌的耐藥復(fù)雜，與以下途徑有關(guān)：①產(chǎn)生抗菌活性酶，如β-內(nèi)酰胺酶、氨基糖苷鈍化酶、頭孢菌素酶、超光譜β-內(nèi)酰胺酶、金屬β-內(nèi)酰胺酶等；②通過改變DNA回旋酶和DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶IV，使喹諾酮類抗菌藥物作用的靶目標(biāo)發(fā)生改變。③通過改變整合酶基因編碼的整合酶不斷地從周圍環(huán)境中捕獲和積累耐藥基因盒，形成巨大的耐藥基因多基因座。④改變細(xì)胞壁的內(nèi)膜和外膜，使膜通透性降低，尤其是造成外膜微孔蛋白 OprD2的缺乏，可引發(fā)對(duì)亞胺培南耐藥[2]。⑤定植的細(xì)菌經(jīng)繁殖增多后，使生物被膜結(jié)構(gòu)成熟，促進(jìn)細(xì)菌黏附到物體表面并維持細(xì)菌的群落狀態(tài)；⑥主動(dòng)外排系統(tǒng)形成，以MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEFOprN、MexXY-OprM最為多見，隨時(shí)將抗菌藥物泵出和排出體外。

金屬β-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生是引起銅綠假單胞菌耐藥的重要機(jī)制。同樣本次研究發(fā)現(xiàn)金屬β-內(nèi)酰胺酶陽性銅綠假單胞菌與金屬β-內(nèi)酰胺酶陰性銅綠假單胞菌的藥敏結(jié)果結(jié)果比較有差異（P＜0.05）。金屬β-內(nèi)酰胺酶分為4類：①ESBLs 我國銅綠假單胞的ESBLs基因型以TEM-10、TEM-12、CTX-M型較多見，能水解臨床上大部分第三代頭孢菌素。②MBLs，有IMP、VIM、GIM、SPM、GIM、AIM型，能水解除單環(huán)類以外的所有β-內(nèi)酰胺類藥物的能力，常對(duì)氨基糖苷類協(xié)同耐受。③AmpC酶，能水解第一到第三代頭孢菌素、單環(huán)類抗生素，且不能被克拉維酸、他唑巴坦、舒巴坦等酶抑制劑所抑制。④OXA型酶，可以水解青霉素G，氨芐西林、阿莫西林、氯唑西林、亞胺培南等，但不能水解氨基噻吩、頭孢菌素和單環(huán)β-內(nèi)酰胺類抗生素。

綜上所述，本次研究認(rèn)為金屬β-內(nèi)酰胺酶陽性的銅綠假單胞菌耐藥性強(qiáng)，耐藥機(jī)制復(fù)雜，臨床中醫(yī)生應(yīng)該及時(shí)根據(jù)細(xì)菌藥敏結(jié)果調(diào)整抗菌藥物。