銅綠假單胞菌耐藥性分析及金屬β-內酰胺酶檢測

內蒙古婦幼保健院（010020）史今凡

銅綠假單胞菌是一種條件致病菌，隨著抗菌藥物的廣泛應用，銅綠假單胞菌表現出多種抗菌藥物的天然或獲得性耐藥[1]。及時了解銅綠假單胞菌的耐藥及金屬β-內酰胺酶的檢測情況，對指導臨床抗生素的合理使用尤為重要，因此我們擬對2015年1月～2015年10月我院檢驗科分離出的200株銅綠假單胞菌進行分析，將銅綠假單胞菌耐藥性情況及金屬β-內酰胺酶檢測結果報道如下。

1 方法

1.1 細菌選擇 收集2015年1月～2015年10月我院檢驗科分離出的銅綠假單胞菌，采取法國梅里埃公司的VITEK2 COMPACT全自動細菌鑒定儀及配套的藥敏卡。以銅綠假單胞菌ATCC 27853為標準質控菌株，藥敏試驗采用Kirby-Bauer紙片擴散法，藥敏結果參照美國臨床和實驗室標準化委員會頒布的標準判定。金屬β-內酰胺酶采用紙片協同法進行測定。將待測菌涂布于瓊脂平板，將2張亞胺培南紙片貼在平皿上，其中一張亞胺培南紙片上加入EDTA，抑菌圈直徑較亞胺培南紙片增加6cm為陽性。

1.2 質控菌株 大腸埃希菌ATCC25922、VIM-2型金屬β-內酰胺酶陽性的PA。

1.3 質量控制 要求參與本次研究的臨床微生物室工作人員有扎實的理論基礎，參加國家臨床實驗室質控考核并合格，并進行統一技術培訓。

1.4 觀察指標 根據金屬β-內酰胺酶檢測結果，將銅綠假單胞菌分為金屬β-內酰胺酶陽性組（100株）與金屬β-內酰胺酶陰性組（100株）。①分析200株銅綠假單胞菌的標本來源。②對比金屬β-內酰胺酶陽性銅綠假單胞菌與金屬β-內酰胺酶陰性銅綠假單胞菌的藥敏結果。

1.5 統計學 研究數據錄入 SPSS18.0分析系統，計數資料采用（n，%）表示，用χ2檢驗法，當P＜0.05，判斷有統計學意義。

2 結果

2.1 200株銅綠假單胞菌標本來源 200株銅綠假單胞菌標本來源中以呼吸道標本來源最多、其次為尿液、引流管。其中呼吸道標本75株，黏液標本42株，引流管標本31株，血液標本28株，其他標本24株。

2.2 金屬β-內酰胺酶陽性銅綠假單胞菌與金屬β-內酰胺酶陰性銅綠假單胞菌藥敏結果 金屬β-內酰胺酶陽性銅綠假單胞菌與金屬β-內酰胺酶陰性銅綠假單胞菌的藥敏結果結果比較有差異（P＜0.05），見附表。

附表 金屬β-內酰胺酶陽性銅綠假單胞菌與金屬β-內酰胺酶陰性銅綠假單胞菌藥敏結果

3 討論

銅綠假單胞菌是人體最重要的條件致病之一，可引起機體多系統、多臟器、多部位感染。有研究顯示ICU為銅綠假單胞菌感染的高危科室，主要與ICU患者抵抗力低，基礎疾病多、病情危重有關。

銅綠假單胞菌的耐藥復雜，與以下途徑有關：①產生抗菌活性酶，如β-內酰胺酶、氨基糖苷鈍化酶、頭孢菌素酶、超光譜β-內酰胺酶、金屬β-內酰胺酶等；②通過改變DNA回旋酶和DNA拓撲異構酶IV，使喹諾酮類抗菌藥物作用的靶目標發生改變。③通過改變整合酶基因編碼的整合酶不斷地從周圍環境中捕獲和積累耐藥基因盒，形成巨大的耐藥基因多基因座。④改變細胞壁的內膜和外膜，使膜通透性降低，尤其是造成外膜微孔蛋白 OprD2的缺乏，可引發對亞胺培南耐藥[2]。⑤定植的細菌經繁殖增多后，使生物被膜結構成熟，促進細菌黏附到物體表面并維持細菌的群落狀態；⑥主動外排系統形成，以MexAB-OprM、MexCD-OprJ、MexEFOprN、MexXY-OprM最為多見，隨時將抗菌藥物泵出和排出體外。

金屬β-內酰胺酶的產生是引起銅綠假單胞菌耐藥的重要機制。同樣本次研究發現金屬β-內酰胺酶陽性銅綠假單胞菌與金屬β-內酰胺酶陰性銅綠假單胞菌的藥敏結果結果比較有差異（P＜0.05）。金屬β-內酰胺酶分為4類：①ESBLs 我國銅綠假單胞的ESBLs基因型以TEM-10、TEM-12、CTX-M型較多見，能水解臨床上大部分第三代頭孢菌素。②MBLs，有IMP、VIM、GIM、SPM、GIM、AIM型，能水解除單環類以外的所有β-內酰胺類藥物的能力，常對氨基糖苷類協同耐受。③AmpC酶，能水解第一到第三代頭孢菌素、單環類抗生素，且不能被克拉維酸、他唑巴坦、舒巴坦等酶抑制劑所抑制。④OXA型酶，可以水解青霉素G，氨芐西林、阿莫西林、氯唑西林、亞胺培南等，但不能水解氨基噻吩、頭孢菌素和單環β-內酰胺類抗生素。

綜上所述，本次研究認為金屬β-內酰胺酶陽性的銅綠假單胞菌耐藥性強，耐藥機制復雜，臨床中醫生應該及時根據細菌藥敏結果調整抗菌藥物。