Ki-67抗原與CDK8在宮頸癌及宮頸上皮內瘤變中的表達及臨床意義

胡利霞　涂雪松　陳玉環#　李楓

孝感市中心醫院1婦產科，2藥學部，湖北　孝感　432000

Ki-67抗原與CDK8在宮頸癌及宮頸上皮內瘤變中的表達及臨床意義

胡利霞1涂雪松2陳玉環1#李楓1

孝感市中心醫院1婦產科，2藥學部，湖北孝感432000

目的探究Ki-67抗原與細胞周期依賴性蛋白激酶8（CDK 8）在宮頸癌和宮頸上皮內瘤變中的表達和臨床意義。方法選取宮頸癌患者64例，宮頸上皮內瘤變（CIN）患者138例，并對其進行分級分期，同時選取正常婦女宮頸組織50例，運用免疫組化方法檢測所納入研究病例宮頸組織Ki-67抗原與CDK8的表達水平。結果Ki-67與CDK8在正常宮頸、宮頸癌、CIN中的陽性率比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）；Ki-67與CDK8在宮頸癌各分化程度間，各臨床分期間的陽性率比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）；Ki-67與CDK8在鱗癌中的陽性率與腺癌比較，及在有無淋巴結轉移宮頸癌中的陽性率比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）。結論Ki-67抗原及CDK8與宮頸癌、CIN的病變程度存在一定的關系，檢測其表達水平和強弱可能有助于預測宮頸高度病變的轉歸。

宮頸癌；宮頸上皮內瘤變；Ki-67抗原；CDK8

Oncol Prog，2016，14（4）

宮頸癌是全球范圍內具有高度危害性的女性生殖系統惡性腫瘤之一，其發病率僅次于乳腺癌，且隨著時代發展，宮頸癌患病年齡愈趨低齡化，且每年因宮頸癌死亡的患者數量也在逐年上升。宮頸上皮內瘤變（cervical intraepithelial neoplasias，CIN）是一組與宮頸浸潤癌聯系緊密的癌前疾病的統稱，其包含了宮頸不典型增生和宮頸原位癌，根據細胞增生異常的程度可分為高度CIN和低度CIN，臨床上可分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期［1］。細胞周期依賴性蛋白激酶8（CDK8）在上皮組織的腫瘤中分布較廣，其表達與宮頸上皮細胞分化程度有關，而增殖細胞核抗原Ki-67是一種與細胞周期相關的蛋白質，并且是一種與DNA結合的蛋白，參與細胞的有絲分裂，是區別正常細胞和腫瘤細胞增殖狀況極為重要的一項指標［2］。本研究應用免疫組化方法檢測CDK8和Ki-67的表達水平和強度，探討這兩種物質的表達與宮頸癌、CIN的關系及臨床意義，具體結果報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

病例來源于孝感市中心醫院2011年10月至2014年8月收治的宮頸癌患者64例及CIN患者138例。納入標準：①宮頸癌的診斷、臨床分期及病理分型均符合《2012NCCN子宮腫瘤臨床實踐指南（第二版）》［3］中的標準；②CIN的診斷及分級符合2013年美國陰道鏡及宮頸病理協會對CIN的診斷分級標準［4］；③全部患者進行宮頸部位病理取材前都未施行放、化療及生物與免疫治療；④相關操作均獲得患者知情同意，并簽署知情同意書。同時選取婦產科因子宮肌瘤等良性疾病行子宮完全切除術，且病理檢查證實無其他宮頸疾病婦女的正常宮頸上皮組織50例作為對照。CIN患者中病變程度為Ⅰ期34例，Ⅱ期48例，Ⅲ期56例。宮頸癌患者中發生淋巴結轉移18例，未發生淋巴結轉移者46例（64排CT下行全盆腔增強掃描判定淋巴結是否轉移）；鱗狀細胞癌49例，腺癌15例；Ⅰ期17例，Ⅱ期22例，Ⅲ期13例，Ⅳ期12例；低分化20例，中分化29例，高分化15例。

1.2試劑

采用SP免疫組化試劑盒（通用）（北京北瑞達醫藥科技有限公司，型號規格：w i83516），Ki-67鼠抗人單克隆抗體（上海研生實業有限公司），CDK8鼠抗人單克隆抗體（北京萬域美瀾科技有限公司），兔抗人β-actin多克隆抗體（上海科興生物科技有限公司）進行實驗。

1.3實驗方法與陽性結果判定

對全部研究對象的宮頸上皮組織進行病理標本采集，并送病理科封蠟切片，嚴格依照試劑盒說明書所述步驟進行免疫組化實驗。

Ki-67抗原以細胞核出現紅褐色著色時判定為陽性細胞；CDK8以細胞核中呈現棕黃色著色時判定為陽性細胞。片中陽性細胞判定方法：每張切片在400倍光學顯微鏡下隨機選取5個視野，視野中出現陽性細胞的數量未超過總細胞數的25%者為0分，視野中出現陽性細胞的數量超過總細胞數的25%且小于50%者為2分；視野中出現陽性細胞的數量超過總細胞數的75%為3分。細胞核著色度的判定：未發現染色者為0分，出現淡黃（CDK8）或淡紅色（Ki-67）者為1分，出現棕黃色與黃色（CDK8）或紅褐色（Ki-67）者為3分，著色深淺介于1分與3分之間者判定為2分。總陽性評分=陽性細胞出現率評分×著色度評分。≤1分者為陰性，2分或3分者為低陽性，4分或5分者為中陽性，6分者為強陽性。評分≥2分者視為該病理切片陽性表達，陽性表達率等于出現陽性表達的病例數與總受試對象數比值的百分率［5］。

1.4觀察指標

比較分析Ki-67與CDK8分別在宮頸癌、CIN及健康宮頸組織中的表達情況，并比較分析Ki-67與CDK8分別在宮頸癌不同病理類型、是否存在淋巴結轉移、不同分化程度及各臨床分期中的表達情況。

1.5統計學方法

使用SPSS1-8.0對數據進行分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，采用t檢驗；計數資料以百分率（%）表示，采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1Ki-67與CDK8分別在各組織中的陽性表達情況比較

Ki-67與CDK8分別在正常宮頸、宮頸癌、CINⅠ期、CINⅡ期、CINⅢ期中的細胞陽性率不同，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表1）

表1　Ki-67與CDK8分別在各組織中的陽性表達情況比較［n（%）］

2.2Ki-67與CDK8分別在不同宮頸癌分化程度中的表達情況比較

Ki-67與CDK8分別在低、中、高各分化程度的宮頸癌中的表達不同，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表2）

表2　Ki-67與CDK8分別在不同宮頸癌分化程度中的表達情況比較［n（%）］

2.3Ki-67與CDK8分別在不同宮頸癌臨床分期中的表達情況比較

Ki-67與CDK8分別在宮頸癌的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各臨床分期中的細胞陽性率依次上升，且各期差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表3）

表3　Ki-67與CDK8分別在不同宮頸癌臨床分期中的表達情況比較［n（%）］

2.4Ki-67與CDK8在不同病理類型及淋巴結轉移與否宮頸癌中的表達比較

Ki-67在鱗癌中陽性率為89.80%（44/49），腺癌中陽性率為66.67%（10/15），差異有統計學意義（χ2= 4.66，P＜0.05）；CDK8在鱗癌中陽性率為87.76%（43/49），腺癌中陽性率為60.00%（9/15），差異有統計學意義（χ2=5.81，P＜0.05）。Ki-67在淋巴結轉移宮頸癌中的陽性率為94.44%（17/18），在不存在淋巴結轉移宮頸癌中的陽性率為71.74%（33/46），差異有統計學意義（χ2=3.90，P＜0.05）；CDK8在淋巴結轉移宮頸癌中的陽性率為94.44%（17/18），在不存在淋巴結轉移宮頸癌中的陽性率為69.57%（37/46），差異有統計學意義（χ2=4.46，P＜0.05）。

3　討論

目前，隨著現代社會生活節奏的不斷變快與女性在工作中的競爭壓力逐漸增大，女性發生宮頸癌概率正在緩慢上升，我國是宮頸癌的高發區，每年新出現的宮頸癌患者超過10萬人，占女性每年新出現惡性生殖系統腫瘤近80%［6］。宮頸癌發病原因可能與多個性伴侶、過早進行性生活、早育及人類乳頭瘤病毒（papillomavirus，HPV）感染等有關，病理分型以鱗狀細胞癌為主，其次為腺癌［7］。由宮頸疾病發展到宮頸癌是一個漸進性、持續性過程，其從癌前病變進展至宮頸浸潤癌需要近十年時間，其中CIN存在較大概率進展為宮頸癌，而CINⅢ期在臨床上被視為宮頸癌的癌前病變，臨床上常根據陰道出血癥狀或子宮頸病理切片異常發現及確診［8］。CIN的致病因素較為廣泛，最為常見的是HPV感染，其中CINⅠ期主要由HPV6感染所致，而CINⅢ期主要由HPV16及HPV18感染所致，還有一些易增加HPV易感性的微生物感染、免疫缺陷等因素［9］。因宮頸癌的危害性極大，嚴重影響了患者的生存質量，且由于CIN的發生發展與宮頸癌的發生發展及浸潤轉移存在較大的關聯，故研究觀察與二者起因、發展有密切聯系的指標，對于宮頸癌的早期防控、診斷、治療及其預后情況具有重要臨床意義。

CDK8是細胞周期依賴性蛋白激酶（CDK）家族中的一員，其在宮頸上皮組織中的表達情況與CIN及宮頸癌的發生發展密切相關，觀察CDK8在宮頸上皮組織的表達水平能夠較好地預防與指導宮頸癌的臨床治療，進而使宮頸癌的發病率大幅降低［10］。Ki-67是人細胞核于細胞周期增殖期分泌的一種特異性抗原，其能夠有效地反映組織細胞群的增殖活性，且在CIN及宮頸癌中表達水平與病情的進展相一致，現今已被廣泛應用于臨床對宮頸癌及其癌前病變的篩查，并常用于評價腫瘤的分化程度及癌癥放療與化療的治療效果［11］。

本研究結果顯示，Ki-67與CDK8在正常宮頸、CIN、宮頸癌組織中的陽性率差異均有統計學意義（P＜0.05）；CDK8與Ki-67在宮頸癌中的陽性率隨著分化程度的降低，陽性率也依次下降，各分化程度間比較差異均有統計學意義（P＜0.05）；Ki-67與CDK8在鱗癌或已發生淋巴結轉移宮頸癌中的陽性率高于腺癌和未發生淋巴結轉移者，差異均有統計學意義（P＜0.05）。這與劉安麗和賀生［12］對Ki-67在宮頸鱗癌及CIN組織中表達的研究結果及李貞等［13］對CDK8在宮頸癌及CIN中表達的研究結果相一致。Gurda等［14］報道，Ki-67在低分期I型子宮內膜癌與內膜分化較好的子宮內膜癌患者中陽性表達率比較，差異有統計學意義。本研究結果顯示，Ki-67在宮頸癌中的陽性率隨著分化程度的降低而降低，與其報道相似。Seo等［15］對結腸癌患者CDK8表達情況分析發現，CKD8表達率與患者的預后程度相關，其表達越高預后越差。因此，我們可以推斷CDK8也可以作為評價宮頸癌預后的指標之一。結合本研究及國內外學者的觀點可以推測，在宮頸上皮表達的Ki-67和CDK8與CIN和宮頸癌的發生及病變嚴重程度由淺至深逐漸發展的過程有一定的關聯，但仍尚需研究證實。

綜上所述，宮頸癌發展過程是一個有多級因子作用的復雜過程，但本研究屬于小樣本研究，且根據各因素分組后各組病例數較少，從而有可能造成統計學上有所偏差，因此尚需要大樣本量研究證實。

［1］Ocal I，Avci A，Cakalagaoglu F，et al.Lack of correlations among histopathological parameters，Ki-67 proliferation index and prognosis in pheochromocytoma patients［J］.Asian Pac J Cancer Prev，2014，15（4）:1751-1755.

［2］Suren D，Isiksacan OO.CDC25B，Ki-67，and p53 expressions in reactive gliosis and astrocytomas［J］.J BUON，2013，18（4）:1006-1011.

［3］林仲秋，陸曉楣，李晶，等.《2012NCCN子宮腫瘤臨床實踐指南（第二版）》解讀［J］.國際婦產科學雜志，2012，39（4）:341-343，347.

［4］馬丁，李雙.2013年美國陰道鏡及宮頸病理協會宮頸癌篩查新指南解讀和啟示［J］.中華婦幼臨床醫學雜志（電子版），2014，10（5）:4-7.

［5］楊歡，陳曉耕，陳新，等.乳腺浸潤性導管癌組織Ki-67表達及其分子分型的意義［J］.中華腫瘤防治雜志，2012，19（3）:212-216.

［6］陳文學，張焜和，鄒學森，等.導流雜交檢測人乳頭狀瘤病毒感染與宮頸癌臨床分期及病理分型關系［J］.中華醫院感染學雜志，2014，24（12）:2882-2884.

［7］劇永樂，張金棟，朱達堅，等.穩定沉默細胞周期素依賴性激酶-8基因抑制結腸癌細胞SW 480生長的研究［J］.中華實驗外科雜志，2013，30（11）:2308-2310.

［8］熊娟.CDK8、KAI1蛋白在宮頸癌及宮頸上皮內瘤變中表達對患者預后的影響［J］.安徽醫藥，2015，19（4）:682-685.

［9］黃柏麗，酈秀芳.陰道鏡下多點活檢結合PTEN和Ki-67表達在宮頸癌早期診斷中的意義［J］.中國內鏡雜志，2013，19（5）:476-479.

［10］Quek SC，Lim BK，Dom ingo E，et al.Human papillomavirus type distribution in invasive cervical cancer and highgrade cervical intraepithelial neoplasia across 5 countries in Asia［J］.Int J Gynecol Cancer，2013，23（1）:148-156.

［11］馬莉娟，何金彩，柴澤英.細胞分化抑制因子-1與細胞增殖核抗原Ki-67在宮頸癌中的表達及相關性研究［J］.中國臨床藥理學雜志，2015，31（8）:627-630.

［12］劉安麗，賀生.高危型HPV原位雜交檢測和P53、Ki-67在宮頸鱗癌及子宮頸上皮內瘤變組織中的表達及意義［J］.中國婦幼保健，2012，27（29）:4611-4614.

［13］李貞，孫小麗，吳坤河，等.CDK8在宮頸癌及宮頸上皮內瘤變中表達及意義的初步研究［J］.實用婦產科雜志，2013，29（11）:848-852.

［14］Gurda GT，Baras AS，Kurman RJ.Ki-67 index as an ancillary tool in the differential diagnosis of proliferative endometrial lesions w ith secretory change［J］.Int J Gynecol Pathol，2014，33（2）:114-119.

［15］Seo JO，Han SI，Lim SC.Role of CDK8 and β-catenin in colorectal adenocarcinoma［J］.Oncol Rep，2010，24（1）: 285-291.

The expression and clinical significance of Ki-67 antigen and CDK8 in cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia

HU Li-xia1TU Xue-song2CHEN Yu-huan1#LI Feng1
1Department of Obstetrics and Gynecology，2Department of Pharmacy，Central Hospital of Xiaogan，Xiaogan 432000，Hubei，China

Objective To explore the expression and clinical significance of Ki-67 antigen and CDK8 in cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia.Method A total of 64 cases of cervical cancer，and 138 cases of cervical intraepithelial neoplasia，were enrolled in this study，of which the differentiation and stage were determined；meanwhile，50 cases of normal cervical tissues were included as control，and immunohistochem ical method was applied to detect the expression level of Ki-67 antigen and CDK8 in these tissues.Result The positive rates of Ki-67 and CDK8 in normal cervix，cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia were significantly different（P＜0.05）；the positive rates of Ki-67 and CDK8 varied significantly w ith the differentiation，and clinical stages of cervical cancer（P＜0.05）；And the positive rates in squamous carcinoma vs adenocarcinoma，and in the presence of lymph node metastasis vs no metastasis were of statistically significant difference（P＜0.05）.Conclusion Ki-67 antigen and CDK8 are generally associated w ith the stage of cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia，besides，the expression level and potential m ight be useful in predicting the outcome of cervical cancer in advanced stage.

cervical cancer；cervical intraepithelial neoplasia；Ki-67 antigen；CDK8

R737.33

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.04.16

2015-06-29）

（corresponding author），郵箱：chenyuhuanhubei@163.com