兩種不同方法檢測降鈣素原結果的比較

董慧芳，薛海華

內蒙古包鋼醫院，內蒙古包頭014010

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兩種不同方法檢測降鈣素原結果的比較

董慧芳，薛海華

內蒙古包鋼醫院，內蒙古包頭014010

目的比較ELISA法檢測降鈣素原和免疫熒光層析法檢測降鈣素原結果的一致性，為合理選擇降鈣素原檢測方法提供實驗依據。方法應用ELISA法檢測降鈣素原和免疫熒光層析法檢測降鈣素對87例臨床標本進行檢測，通過直接比較和計算結果判斷檢測結果的一致性。結果87例標本中兩種方法結果的符合率89.3%。結論兩種不同檢測降鈣素原的方法具有一定的可比性，可以根據臨床需要選擇不同的檢測方法。

降鈣素原；ELISA法；免疫熒光層析法；符合率

降鈣素原（PCT）是一種誘導膿毒蛋白，隨著細菌、寄生蟲感染和膿毒癥等因素的影響，導致其在血漿中的水平不斷升高。但是機體自身進行免疫和病毒感染時并不會對PCT造成變化。磁瓦，機體局部小范圍細菌感染及慢性炎癥等也不會對其造成影響。PCT還可以反映出機體全身炎癥的實際變化。相關研究發現，感染器官的程度、細菌類型、炎癥程度等均會對PCT水平產生影響。另外，PCT可以在部分患者進行大型外科術后檢測到。

PCT水平的升高會產生很多并發癥狀，給患者的日常生活造成了很大影響，嚴重時將發生休克及多器官功能紊亂綜合征等，同時還會受到細菌感染。但是，從當前PCT水平發展變化情況來看，細菌性病灶在PCT發展中較低，使用腸道釋放細胞因子與細菌移位都會引起誘導。

所以PCT的主要作用是對早期敗血癥進行檢測，同時可以對其嚴重程度進行評定［1-3］。現階段，檢測PCT的實驗室方法有很多，不僅可以定性，亦可以定量。該研究選用ELISA法檢測降鈣素原和免疫熒光層析法檢測降鈣素原，對比研究其檢測結果的一致性。

1　材料與方法

1.1儀器、試劑

1.1.1ELISA法檢測降鈣素原酶標儀的型號MK3；試劑盒購自長沙三濟有限公司（批號：F68100801188）；免疫熒光層析法檢測降鈣素原：廣州萬孚生物技術有限公司生產的免疫熒光定量分析儀.試劑盒購廣州萬孚（批號：2400615）。

1.1.2標本的來源收集該院2014年10—12月實驗室接收的臨床送檢標本，有MICU病房、兒科、呼吸科、外科等相關臨床科室的87例檢測標本，其中男性48例，女性39例，年齡在5～79歲之間。87份標本用兩種方法同時檢測.

1.2方法

1.2.1ELISA法檢測降鈣素原采用雙抗體夾心法測定標本中人降鈣素原（PCT）水平。反應板用純化的人降鈣素原抗體包被，同時將待測標本加入等待完全孵育后，再將辣根過氧化物酶標記的PCT抗體加入到內部。標本中如果含有降鈣素元，就會和包被在反應板上的降鈣素原抗體結合在一起，進而與HRP標記的降鈣素原抗體結合形成復合物，洗滌后加入一定的TMB底物，注意TMB加入后，會在HRP酶催化作用下變為藍色；加入適量酸作后會轉化成黃色。使用酶標儀在450 nm波長下對吸光度進行測定，實驗發現，（OD值）和標本中降鈣素原加入量呈線性關系。使用加樣槍將取出的樣品進行5倍稀釋，然后在待測樣本孔中加入40 μL的樣品稀釋液，最后加待測樣本10 μL，標準品倍比稀釋后準確加樣50 μL，輕輕晃動混勻，封板置37℃恒溫箱中孵育30 min。洗滌：充分洗滌每孔，在每個孔中加入立即可用的酶標抗體50 μL，37℃恒溫箱中再孵育30 min。洗板.每孔加A、B顯色劑各50 μL，輕輕震蕩混勻，同時在37℃下避光顯色15 min。每孔加入50 μL終止液，在450 nm下讀OD值。測定必須在加入終止液之后的15 min內完成。結果：通過繪制標準曲線可以計算出標本中PCT的含量。

1.2.2免疫熒光層析法檢測降鈣素原免疫熒光層析法主要利用利用高度特異性發生的抗原抗體反應，對標本中的PCT和預先包被在聚酯膜進行標記，讓降鈣素原單克隆抗體結合，在毛細效應下結合物會向上層析，隨后會被在膜上固定的降鈣素原單克隆抗體捕獲，降鈣素原的濃度就是利用標本中的降鈣素原含量與內置標準曲線完成信號轉換實現的。該次研究發現，所選試劑使用免疫熒光雙抗體夾心法與被捕獲的結合物含量呈正相關，利用免疫定量分析儀掃描檢測區后可獲得光學信號，然后再對人體中的血液、血漿及血清中的降鈣素濃度進行檢測。完成操作后，將待測樣本緩慢加入到溶液中攪拌混勻，當樣本中的降鈣素原抗原與緩沖液中的熒光標記降鈣素原單克隆抗體結合后就會產生反應復合物。使用滴加法將混合樣本加入到測試卡的加樣孔中，在利用層析作用下，反應復合物會順著沿著硝酸纖維膜不斷向前擴散，被固定在硝酸纖維膜檢測線上包被的降鈣素最終被原單克隆抗體所捕獲。經過分析發現，樣本中含有的降鈣素原越多，則檢測線上的復合物就越多。熒光抗體信號的強度可以反應被捕獲的PCT量。經廣州萬孚生物技術股份有限公司生產的免疫熒光檢測儀，可檢測出樣本中降鈣素原的濃度。

方法：取50 μL血清或血漿加入反應液中混勻1 min，取75 μL加入反應板中，置室溫15 min后，免疫熒光定量分析儀檢測。

2　結果

該文共收集了87例標本進行了兩種方法的檢測，結果符合率為89.3%，見表1。

表187　例標本兩種方法結果的比較

3　討論

現階段，怎樣正確合理的使用抗生素已經成為醫學界研究的主要課題。如果使用抗生素時有一個指標可以清楚地反映出抗生素的治療療效，就可以給醫生提供參考，幫助醫生及時找到適合患者的抗生素藥物，控制好抗生素使用劑量和療程，進而控制患者的病情，同時還縮短了住院天數，節省病人資金花費，提高了治療效果。PCT是降鈣素前體，進行表達時，主要由神經內分泌細胞、肺組織完成C細胞表達，但是在生理情況下很難在血液中檢測到該種物質。它是一種誘導蛋白的膿毒，是驗證診斷的新指標，現在，已經廣泛應用到病情檢測，感染疾病診斷中，也是目前檢測抗生素使用的一個指標。其濃度變化會隨著患者細菌感染的病情的發展不斷變化，并且不受其他治療藥物（如糖皮質激素）的影響，此外，PCT水平還能用于評估病人的預后，不同的PCT濃度提示感染的嚴重程度，伴發器官功能不全的可能，死亡率。經過十多年的臨床驗證，PCT已經成為許多醫院的重癥患者的常規檢查項目之一，國內也有越來越多的醫生認識到PCT的重要性。臨床上檢測PCT的主要方法是半定量法和定量法，兩種檢測方法都是加注抗原抗體的特異性免疫反應完成的。

PCT定量檢測是一種非常有效的方法，尤其對于需要定期觀測治療效果的患者，具有非常大的意義。在該次研究中，主要對兩種不同檢測方法的檢測效果進行了比較。研究方法的選擇也會對試驗檢測結果產生影響，該次研究使用的兩種分析方法都可以檢測結果產生影響，從數值方面分析，該次所選用的兩種方法檢測結果一致。

免疫層析法的主要原理是使用高度特異性的抗原抗體反應，將標本中的降鈣素元和在聚酯模上包被的金標記降鈣素元進行結合，結合物首先記住毛細效應向上層析，之后會被固定在模上的降鈣素元單克隆抗體捕獲，試驗實現標本中降鈣素元與鋪貨的集合物含量呈現正相關，降鈣素原的濃度就是利用標本中的降鈣素原含量與內置標準曲線完成信號轉換實現的。免疫定量分析儀融合了膠體金免疫層析技術定量檢測方法，具有操作方便、重復性好、線性范圍廣的特點，可以將其應用到各種實驗室中，但會出現假陰性及假陽性結果，需要引起重視。

電化學發光法檢測PCT主要利用PCT雙抗原夾心二步法進行。主要原理是利用待測樣本和生物素化的單克隆PCT抗體以及標記的復合物PCT同時進行孵育，然后形成抗原抗體夾心復合物。此種方法的主要特點是干擾因素較少、比較快速而且與國外很多先進一起具有很多相關性優點。

該文共收集了87例標本進行了兩種方法的檢測，結果符合率為89.3%。該研究主要對ELISA法檢測和免疫熒光層析法檢測兩種檢測方法的效果進行了比較，經過檢測發現，這兩種檢測結果不存在相關性，所以該文做了符合率的統計，判斷二者檢測結果是否一致。

ELISA法檢測PCT需要做出標準曲線和質控品，同時還要從實驗室效益角度進行分析，可以應用到臨床標本較多的實驗室檢測。免疫熒光層析法具有操作簡便、精確度高、檢測范圍寬及重復性好等優勢已經廣泛用于實驗室檢測中，但由于檢測方法的局限性，會產生假陰性和假陽性兩種結果，比較適合急診科、ICU等重癥監護患者的病情檢測。通過比較，兩種不同檢測降鈣素原的方法具有一定的可比性，可以根據臨床需要選擇不同的檢測方法。ELISA法檢測降鈣素原適用于批量檢測，免疫熒光層析法檢測降鈣素可用于急診隨時檢測。

在該次研究中，兩種檢測的檢測結果相同，實驗證實這兩種檢測方法均是臨床上實用性較大的檢測方法，由于每個實驗室情況不同，在實際檢測中，可以根據實驗室的實際情況針對性選擇測方法，為臨床提供可靠的實驗數據。

綜上所述，兩種檢測降鈣素元的方法各有優勢，但是由于實際檢測實驗室不同，在實際檢測中應該針對性進行選擇，提高檢測結果的準確度。通常情況下，急診檢測中通常應用免疫熒光層析法，對臨川疾病診斷及抗生素的合理應用具有很大作用；如果進行PCT高濃度檢測時，可以使用電化學發光法或經電化學發光法，對免疫熒光層析法進行校正。

［1］Sudhir U，Venkatachalniah RK，Kumar TA，et al.Significance of senm Procalcitionin in sepsis［J］.Indian J Cnl Care Med，2011，15（1）：1-5.

［2］陳自武.降鈣素原、超敏C反應蛋白與外周血堿性磷酸酶幾份在細菌感染中應用探討［J］.臨床和實驗醫學雜志，2010，9（8）：572-573.

［3］杜冀暉，蘇卓娃，等.血清降鈣素原測定在兒科感染性疾病診斷中的應用［J］.臨床和實驗室醫學雜志，2006，5（9）：1320-1321.

［4］高紅軍，鄭敏，等.兩種降鈣素原檢測方法的比較研究［J］.醫學檢驗雜志，2011（8）：32.

Comparison of Results of Two Different Methods in Testing Procalcitonin

DONG Hui-fang，XUE Hai-hua
Inner Mongolia Steel Hospital，Baotou，Inner Mongolia，014010 China

Objective To compare the result consistency of ELISA method andimmunofluorescence chromatography in testing procalcitonin and provide the experimental basis for rational choice of procalcitonin test methods.Methods The procalcitonin of 87 cases of clinical specimens were detected by the ELISA method andimmunofluorescence chromatography，and the consistency of test results was determined by the direct comparison and result calculation.Results The coincidence rate of two methods of 87 cases of specimens was 89.3%.Conclusion The two different methods of testing procalcitonin have a certain comparability，and we can select the different test methods according to the clinical needs.

Procalcitonin；ELISA method；Immunofluorescence chromatography；Coincidence rate

R446.6

A

1672-5654（2016）09（a）-0111-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.25.111

2016-06-06）

董慧芳（1964.1-），女，山東肥城人，本科，主管檢驗師，主要從事免疫檢驗工作及分子生物學實驗的檢測工作。