血清TK1水平檢測在非小細胞肺癌診斷中的應用

王　彬，李國鋒，王　健，王光鎖，譚禮萍，岳化葵，湯倩華

(廣東省深圳市人民醫院：1.檢驗科；2.胸外科；3.科教科　518020)

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·論著·

血清TK1水平檢測在非小細胞肺癌診斷中的應用

王彬1，李國鋒2，王健2，王光鎖2，譚禮萍3，岳化葵1，湯倩華1

(廣東省深圳市人民醫院：1.檢驗科；2.胸外科；3.科教科518020)

目的研究血清胸苷激酶1(TK1)水平變化對小細胞肺癌(NSCLC)患者臨床診斷價值。方法采用免疫印跡-增強化學發光法檢測129例非小細胞肺癌(NSCLC)住院患者及90例健康查體者血清TK1水平，并對76例NSCLC患者手術前后血清TK1水平變化狀況進行比較。結果NSCLC患者血清TK1水平明顯高于健康對照組(P<0.05)，差異有統計學意義；NSCLC血清TK1水平 Ⅲ>Ⅳ>Ⅰ+Ⅱ>Tis,兩兩比較差異有統計學意義(P<0.05)；手術后30 d NSCLC患者血清TK1水平明顯低于手術前，差異有統計學意義(P=0.001)；血清TK1水平與NSCLC患者是否發生淋巴結轉移相關(P<0.01)，與病理類型、年齡、性別、是否吸煙均無相關性(P>0.05)；NSCLC患者TK1檢測具有較高敏感度與特異性。結論血清TK1水平檢測對NSCLC患者病情診斷有重要臨床意義。

胸苷激酶1；非小細胞肺癌；診斷

原發性支氣管肺癌簡稱肺癌，是起源于支氣管黏膜或腺體的惡性腫瘤。肺癌新發病人數1.6萬/年，死亡人數140萬/年，發病率與病死率均高居全世界癌癥首位[1]。肺癌按組織病理學類型分為非小細胞肺癌(NSCLC)與小細胞肺癌，其中NSCLC占總肺癌病例數的近85%,嚴重威脅人類的幸福健康[2]。在我國，據統計,既往30年內記錄在案(不包括眾多未登記失聯病例)肺癌死亡病例已增加了464.8%，目前人數還在逐年增長[3]。究其原因，早期診斷困難致使預后較差等值得廣泛關注，而NSCLC一旦發現并開始治療時，常已達晚期，錯過最佳治療時期，故雖再經多學科治療，仍然預后較差。而腫瘤標志物胸苷激酶1(TK1)水平在腫瘤組織中或血清中的增加和腫瘤細胞DNA的合成相一致，故其在臨床上NSCLC的輔助診斷中引起了廣泛興趣[4]。本文主要通過檢測在NSCLC患者不同臨床特點下的外周血TK1水平并相互對比，研究TK1在NSCLC患者臨床診斷中的應用，并對手術療效等方面做一定的評估，現將研究結果報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料NSCLC組129例，為2014年6月至2015年6月本院胸外科住院患者，均結合影像學特征、組織活檢或胸腔積液細胞學檢查等明確診斷為NSCLC，病理標本取材方法不一，有通過手術、穿刺、纖維支氣管鏡夾取等。其中NSCLC組男78例，女51例，年齡27～83歲，中位年齡61歲；并按國際抗癌聯盟(ULCC)制定的肺癌最新分期標準進行分期，其中屬于Ⅳ期的有39例，Ⅲ期的有42例，Ⅱ期的有20例，Ⅰ期的有14例，Tis期的有14例；NSCLC患者中尚伴有81例淋巴結轉移者；按病理類型分，其中68例為腺癌，40例為鱗癌，21例為大細胞肺癌；129例NSCLC患者中76例選擇了手術治療。對照組90例為本院健康查體者，其中52例是男性，其余均為女性，其年齡跨度大，25～90歲不等，中位年齡59歲，均無白血病、淋巴瘤等血液病，無嚴重心腦血管疾病及糖尿病等病史，肝功能、腎功能等檢測大致正常。

1.2方法

1.2.1標本采集晨起空腹時抽取靜脈血2 mL，3 h內以3 000 r/min離心8 min，分離血清，分裝入2個離心管(分別用于初次檢測和復檢)，放入-20 ℃凍存備用。

1.2.2檢測方法血清TK1檢測方法為免疫印跡增強化學發光法，檢測儀器為CIS-1化學發光數字成像分析儀，試劑盒與儀器均由深圳華瑞同康生物技術有限公司提供。試驗步驟由專人嚴格按說明書進行操作。具體步驟如下：(1)吸取標準品及待測血清各2 mL點樣到硝酸纖維素膜上，室溫下自然晾干；(2)用配置的TBS振蕩洗膜3次，用Tris緩沖液配制的6%脫脂奶粉封閉1 h后去除封閉液；(3)加入適量的TK1抗體，室溫振蕩反應2 h；(4)用TBS振蕩漂洗3次，加入生物素化二抗，室溫振蕩反應40 min，洗滌同前；(5)加入鏈霉親和素辣根過氧化物酶復合物，室溫下振蕩反應1 h；(6)洗滌，加ECL發光試劑，過膜浸濕，精確反應1 min，將膜片用吸水紙吸干；(7)將膜放入CIS 1型化學發光數字成像分析系統內進行分析。以標準品的TK1水平為橫坐標，測量數據為縱坐標作標準曲線，根據標準曲線可計算出待測血清的TK1水平。 健康對照組以及NSCLC組于治療前檢測血清TK1水平，其中76例NSCLC手術患者分別于手術后(7±1)和(30±2)d再次檢測血清TK1水平。

1.2.3觀察指標TK1>2.0 pmol/L判定為陽性[5]。

2　結　　果

2.1各病期NSCLC患者血清TK1水平與健康對照組的比較研究結果表明，129例NSCLC患者血清TK1水平顯著高于健康對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。其中Ⅰ+Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期血清TK1水平高于健康對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，Tis期血清TK1水平與健康對照組相比差異無統計學意義(P>0.05)。血清中TK1水平Ⅲ>Ⅳ>Ⅰ+Ⅱ>Tis，各病期之間比較，Tis和Ⅰ+Ⅱ、Ⅰ+Ⅱ和Ⅲ、Ⅲ和Ⅳ差異有統計學意義(P<0.05)，結果表明NSCLC患者血清TK1水平與TNM分期密切相關，結果見表1。

表1　　各病期NSCLC患者血清TK1水平與健康對照組的比較

注：與健康對照組比較,*P<0.05,#P>0.05;與Ⅰ+Ⅱ比較，△P<0.05;與Ⅲ比較，▲P<0.05;與Ⅳ比較，○P<0.05。

2.2NSCLC患者血清中TK1水平與淋巴結轉移和病理類型的關系淋巴結轉移組患者血清TK1水平明顯大于淋巴結無轉移組患者，差異有統計學意義(F=0.872，t=-7.989,P=0.000)。鱗癌、腺癌、大細胞癌NSCLC患者之間血清TK1水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)，說明NSCLC患者血清TK1水平同淋巴結是否轉移有關，同病理類型無關。結果見表2。

2.376例NSCLC組術前、術后7 d與術后30 d血清中TK1水平比較129例NSCLC組患者中有76例患者進行了手術治療，本研究隨訪該76例患者手術后7和30 d的血清TK1水平，詳見圖1。

表2　　NSCLC患者血清中TK1水平與淋巴結轉移和病理類型的關系

注：與淋巴結轉移組比較，*P<0.01；與腺癌組比較，△P>0.05；與大細胞癌組比較，▲P>0.05；與鱗癌組比較，○P>0.05。

圖1　76例NSCLC患者術前、術后7 d與術后30 d血清中TK1水平比較

從圖1中看出，術后1周血清TK1水平[(2.798±0.678)pmol/L]比術前[(2.268±0.356)pmol/L]略高，差異無統計學意義(P>0.05)；術后30 d血清中TK1明顯下降[(1.023±0.489)pmol/L]，與術前相比，差異有統計學意義(F=7.287,t=-4.851,P=0.001)。結果表明外周血TK1水平對術后療效監測具有重要價值。

2.4NSCLC患者血清腫瘤標志物TK1水平的敏感度與特異度NSCLC患者外周血TK1檢測的敏感度與特異度顯示，靈敏度=99/(99+30)=76.7%,假陰性率=30/(99+30)=23.3%;特異度=78/(12+18)=86.7%;假陽性率=12/(12+78)=13.3%。提示NSCLC患者血清TK1水平監測具有較高的靈敏度與特異度，在一定程度上可輔助臨床診斷NSCLC。

2.5NSCLC患者血清TK1水平與NSCLC患者年齡、性別及是否吸煙的關系見表3。

表3　　NSCLC患者血清TK1水平與NSCLC患者基本情況的關系

注：與≥60歲年齡組比較，#P>0.05；與女性組比較，△P>0.05；與吸煙組比較，○P>0.05。

結果表明，血清TK1水平與NSCLC患者年齡、性別及是否吸煙均無相關性(P>0.05)，具有一定可信度。

3　討　　論

腫瘤標志物是由惡性增殖細胞的細胞DNA轉錄、翻譯并合成分泌的，部分已被人們研究利用的具有惡性腫瘤診斷與療效監測作用的1種特殊的外周血物質。全世界已發現的惡性腫瘤數不勝數，而肺癌是當中最常見的死亡原因。臨床上意欲提高肺癌患者生存率，則必須依賴于早期診斷與早期治療。當前綜合運用多種可行性的措施，包括了實驗室顯微鏡下病理診斷、特征性的影像學診斷，再結合其臨床典型癥狀與體征等，期待能盡早分辨良、惡性腫瘤并及時制訂下一步治療方案。但是對于部分復雜肺癌，影像學表現特異性不足，而病理學取材不易或取材陽性率有限。外周血腫瘤標志物檢測具有快速、準確、不良反應小、經濟等優點。故其作為一類基本無創而有效的檢查，可以輔助肺癌的精確、全面診斷。本研究NSCLC患者血清中TK1水平明顯高于健康對照組，其差異具有統計學意義(P<0.05)，提示其在NSCLC的臨床診斷中具有重要參考意義。這一研究結果與許多其他學者的研究結果基本一致[6-8]。血清中TK1水平Ⅲ>Ⅳ>Ⅰ+Ⅱ>Tis，各病期之間比較，Tis和Ⅰ+Ⅱ、Ⅰ+Ⅱ和Ⅲ、Ⅲ和Ⅳ差異有統計學意義(P<0.05)。淋巴結轉移組患者血清TK1水平明顯大于淋巴結無轉移組患者，差異有統計學意義(F=0.872,t=-7.989,P=0.000)；結果表明NSCLC患者血清TK1水平與TNM分期、淋巴結是否轉移密切相關。對于本研究中，TK1在Ⅰ+Ⅱ、Ⅲ期逐漸升高，在Ⅳ期反而降低，究其原因可能為腫瘤Ⅰ～Ⅲ期，增殖惡性程度升高，TK1升高，但到達Ⅳ期，由于能量供養不足造成的增殖放緩，及癌巢內釋放蛋白水解等因素，造成TK1反而降低，張國慶等[9]也有相似的報道。

若腫瘤切除較為徹底或者完全清除，則腫瘤標志物水平多下降，提示治療效果佳；若治療后腫瘤尚有殘留較多或腫瘤為多發性腫瘤難以清除完全，則腫瘤標志物水平多維持較高水平。TK1是惡性增殖細胞DNA合成的關鍵酶，其作為1種高度特異性與敏感性的腫瘤標志物，可檢測NSCLC癌細胞活性，故亦可借其判定NSCLC癌細胞的增殖度及該病的治療療效[10-11]。本研究76例NSCLC患者術后7 d血清中TK1比術前略高，差異無統計學意義；而術后30 d血清中TK1明顯下降，與術前相比，差異有統計學意義(F=7.287,t=-4.851,P=0.001)。可能原因是:術后1周并發感染未完全恢復;手術促使癌細胞釋放入血，導致術后血清TK1水平短暫升高；腫瘤切除后，隨著腫瘤細胞增殖活動停止，血清中TK1水平逐漸恢復正常。這提示NSCLC患者血清TK1水平檢測對于手術療效監測方面有重要參考價值。

TK1與細胞活躍度有關，在多種人類常見的初發癌癥中,TK1在患者外周血中的水平均明顯升高，有著較高的陽性檢出率，有學者做過研究，其陽性率65%～95%[12]。本文研究結果顯示，TK1真陽性率為76.7%，具有較高可信度；TK1真陰性率為86.7%，說明其為1項具有高度特性的腫瘤標志物，與部分學者研究結果類似[6,13]。

肺癌有腺癌、鱗狀細胞癌、小細胞癌、大細胞癌、腺鱗癌、類癌、支氣管腺體癌等。我國近年來肺腺癌發病率漸漸超過鱗癌，躍居最常見的病理分類[14]。本文中鱗癌、腺癌、大細胞癌NSCLC患者之間血清TK1水平比較，差異無統計學意義(P>0.05)，說明NSCLC患者血清TK1水平同病理類型無關。

綜上可知，血清TK1表達水平與NSCLC患者臨床表現、病理分期等相關，血清TK1檢測對NSCLC早期診斷、指導治療、療效監測等有重要的臨床意義。

[1]Spiro SG,Tanner NT,Silvestri GA,et al.Lung cancer:progress in diagnosis,staging and therapy[J].Respirology,2010,15(1):44-50.

[2]黃銳,葉元滋.細胞質胸苷激酶在肺癌中的表達及其臨床意義[J].臨床肺科雜志，2015,20(3):402-403.

[3]葛均波，徐永健．內科學[M].北京：人民衛生出版社，2015：75-76．

[4]Wu C,Yang R，Zhou J，et al．Production and characterization of a novel chicken IgY antibody raised against C terminal peptide from human thymidine kinasel[J].J Immunol Met hods，2003，277(1/2)：157-169.

[5]Chen ZH,Huang SQ,Wang Y,et al.Serological thymidine kinase 1 is a biomarker for early detection of tumours-a health screening study on 35 365 people,using a sensitive chemiluminescent dot blot assay[J].Sensors(Basel),2011,11(12):11064-11080.

[6]劉佳琪.血清TK1檢測在非小細胞肺癌診斷中的臨床意義[J].實用腫瘤雜志,2013,28(1):62-63.

[7]杜黎黎，盧忠心，李艷，等．血清CEA、SCC、CA125聯合檢測診斷肺癌的臨床意義[J]．臨床和實驗醫學雜志，2012，11(12)：930-931．

[8]袁航，朱寶，吳翼偉，等．肺癌患者血清TK1檢測的臨床意義[J]．放射免疫學雜志，2011，24(3)：301-302．

[9]張國慶,焦順昌.新型腫瘤增殖指標——血清胸苷激酶 1的臨床應用[J].現代腫瘤醫學，2012，20(8):1743-1745.

[10]Chen Z,Zhou H,Li S,et al.Seroloocal thymidine kinase 1(STK1)indicates an elevated risk for the development of malignant turnouts[J].Anticaner Rea,2008,28(6b):3897-3907.

[11]He E,Xu XH,Guan H,et al.Thymidine kinase 1 is a potential marker for prognosis and monitoring the response to treatment of patients with breast,lung,and esophageal cancer and non-Hodgkin′s lymphoma[J].Nucleosides Nucleic Acids,2010,29(4/6):352-358.

[12]He Q,Zou L,Zhang PA,et al.Concentration of thymidine kinase 1 in serum(S-TKI) is a more sensitive proliferation marker in human solid tumors than its activity[J].Oncol Rep,2005，14(4):1013-1019．

[13]Kuroiwa N,Nakayama M,Fukuda T,et al.Specific recognition of cytosolic thymidine kinase in the human lung tumor bymonoclonal antibodies raised against recombinant human thymidine kinase[J].Immunol Methods,2001,253(1/2)：1-11．

[14]石遠凱．肺癌診斷治療學[M].北京:人民衛生出版社,2008：9．

Application of serum TK1 levels in diagnosis of non small cell lung cancer

WANGBin1,LIGuofeng2,WANGJian2,WANGGuangsuo2,TANLiping3,YUEHuakui1,TANGQianhua1

(1.DepartmentofLaboratory,ShengzhenPeople′sHospital,Shengzhen,Guangdong,518020,China;2.DepartmentofThoracicSurgery,ShengzhenPeople′sHospital,Shengzhen,Guangdong,518020,China;3.DepartmentofScienceandEducation，ShengzhenPeople′sHospital,Shengzhen,Guangdong,518020,China)

ObjectiveTo investigate the variation of serum Thymidine Kinase 1(TK1) in patients with non-small cell lung cancer(NSCLC) and its clinical value．MethodsSerum TK1 level of 129 patients with NSCLC and 90 healthy volunteers were measured by sensitive chemiluminescence dot-blot assay.The serum TK1 level variation of 76 patients with NSCLC were compared before and after operation.ResultsSerum TK1 level of NSCLC patients were significantly higher than the level of healthy control group(P<0.05).Serum TK1 level in Stage Ⅲ>Stage Ⅳ>Stage Ⅰ+Ⅱ>Stage Tis,comparison between each other was of statistical difference(P<0.05).The serum TK1 level of NSCLC patients at 30th day after surgery was remarkably lower than which before surgery(P=0.001,P<0.01).The serum TKl level was correlated with lymphatic metastasis(P<0．01),but not with other factors such as pathology types,age,sex and smoking.The serum TK1 measurement was high sensitivity and specificity to the diagnosis of NSCLC.ConclusionThe serum TK1 level detection has important clinical significance in diagnosis and evaluation of NSCLC patients．

thymidine kinase 1；non-small cell lung cancer；diagnosis

王彬，女，主管技師，主要從事臨床醫學檢驗及免疫學檢驗方面的研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.18.022

A

1673-4130(2016)18-2563-03

2016-04-17

2016-06-23)