紫杉醇聯合洛鉑治療晚期卵巢癌的效果及其對ERCC1、β—catenin、β—tubulin Ⅲ表達的影響

宋倪媛 陳徐 李霞 何曉紅 張妍

[摘要] 目的 探討紫杉醇聯合洛鉑治療晚期卵巢癌的療效及其對核苷酸切除修復交錯互補基因1（ERCC1）、β-鏈蛋白（β-catenin）和β3-微管蛋白（β-tubulin Ⅲ）表達的影響。 方法 選取2008年1月～2013年5月崇州市人民醫院診治的60例卵巢癌患者為研究對象，根據術后化療方案的不同將患者分為紫杉醇+卡鉑組（PC組）和紫杉醇+洛鉑組（PL組），每組各30例。觀察并比較兩組患者化療后近遠期臨床療效；采用熒光定量PCR和酶聯免疫吸附試驗分別檢測血液ERCC1、β-catenin和β-tubulin Ⅲ的表達水平。 結果 PC組和PL組的總體有效率分別為76.66%和83.33%，疾病控制率為93.33%和96.67%；PL組的治療有效率和疾病控制率均略高于PC組，但差異無統計學意義（P > 0.05）；PL組的不良反應發生率（16.67%）明顯低于PC組（40.00%），差異有統計學意義（P < 0.05）；隨訪結果顯示，兩組1年、2年生存率、局部復發與轉移率、平均生存時間比較差異均無統計學意義（P > 0.05）；PL組患者的ERCC1和β-tubulin Ⅲ的mRNA表達和蛋白含量均顯著低于PC組，差異有高度統計學意義（P < 0.01）；但兩組患者β-catenin的mRNA表達和蛋白含量比較差異無統計學意義（P > 0.05）。 結論 紫杉醇聯合洛鉑對晚期卵巢癌具有較好的臨床療效且不良反應少，ERCC1和β-tubulin Ⅲ表達水平的降低可能是其潛在的作用機制。

[關鍵詞] 紫杉醇；洛鉑；卵巢癌；核苷酸切除修復交錯互補基因1；β-鏈蛋白；β3-微管蛋白

[中圖分類號] R737.31 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2016）02（c）-0115-04

Efficacy of Paclitaxel combined with Lobaplatin in the treatment of the advanced ovarian cancer and its influence on the expression of ERCC1， β-catenin and β-tubulin Ⅲ

SONG Niyuan CHEN Xu LI Xia HE Xiaohong ZHANG Yan

Department of Obstetrics， the People's Hospital of Chongzhou City， Sichuan Province， Chongzhou 611230， China

[Abstract] Objective To explore the efficacy of Paclitaxel combined with Lobaplatin in the treatment of advanced ovarian cancer and its influence on the expression of nucleotide excision repair cross complementing gene 1 （ERCC1）， β-catenin and β-tubulin Ⅲ. Methods Sixty patients with advanced ovarian cancer from January 2008 to May 2013 in the People's Hospital of Chongzhou City were selected as the research objects， and divided into Paclitaxel plus Carboplatin group （PC group） and Paclitaxel plus Lobaplatin group （PL group） according to the different treatment， each group had 30 cases. After treatment， the short and long term clinical curative effects were observed and compared between the two groups. The expressions of β-tubulin Ⅲ， β-catenin and ERCC1 of the blood samples were detected by fluorescence quantitative PCR and ELISA assay. Results The overall efficiency rate of PC group and PL group were 76.66% and 83.33% respectively， and the disease control rate were 93.33% and 96.67% respectively. The overall efficiency rate of PL group was slightly higher than the PC group， no statistically significant difference was observed between two groups （P > 0.05）； the incidence of adverse reactions in the PL group （16.67%） was significantly lower than that in the PC group （40.00%）， the difference was statistically significant （P < 0.05）； the follow-up results showed that， the 1 year and 2 year survival rate， rate of local recurrence and metastasis and average survival time of two groups had no statistically significant difference （P > 0.05）； the mRNA expressions and protein contents of ERCC1 and β-tubulin Ⅲ of the PL group were significantly lower than those of the PC group， the differences were statistically significant （P < 0.01）， but no significant difference was found in the expression of β-catenin （P > 0.05）. Conclusion Paclitaxel combined with Lobaplatin has good clinical efficacy and less adverse reactions in the treatment of advanced ovarian cancer， and the reduced expression of ERCC1 and β-tubulin Ⅲ may be the potential mechanism.

[Key words] Paclitaxel； Lobaplatin； Ovarian cancer； ERCC1； β-catenin； β-tubulin Ⅲ

卵巢癌是臨床上常見的婦科惡性腫瘤之一，病死率高居各類婦科腫瘤的首位[1]，治療上以腫瘤細胞減滅術聯合鉑類藥物化療為主[2]。紫杉醇是紅豆杉屬植物中復雜的次生代謝物，對多種腫瘤均具有良好療效[3]，洛鉑則是一種穩定的水溶性鉑類烷化劑，屬于第3代鉑類抗腫瘤藥物[4]，本研究擬探討紫杉醇與洛鉑聯合化療策略的臨床療效和安全性及核苷酸切除修復交錯互補基因1（excision repair cross complementing，ERCC1）、β-鏈蛋白（β-catenin）和β3-微管蛋白（β-tubulin Ⅲ）的表達水平變化。現總結報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2008年1月～2013年5月四川省崇州市人民醫院（以下簡稱“我院”）診治的60例卵巢癌患者為研究對象，年齡32～71歲，平均（40.54±7.36）歲；國際婦產科聯盟分期[5]Ⅲ期42例，Ⅳ期18例；Karnofsky評分70～85分，平均（75.86±6.04）分；漿液型29例，黏液型21例，混合性漿液黏液型8例，透明細胞癌2例；低分化45例，中分化12例，高分化3例。納入標準：①經組織病理學檢查確診卵巢癌，且CT或MRI檢測均未發現明顯的淋巴結轉移；②肝腎功能、心電圖檢查及骨髓功能檢查無明顯異常；③未接受任何放療或化療，且無腹部或盆腔手術史；④Karnofsky評分均≥70分，可耐受全程的治療；⑤預計生存時間>6個月。本研究經我院醫學倫理委員會批準，所有患者及家屬均知情同意并簽署知情同意書。所有患者均經腫瘤細胞減滅術治療，并根據術后化療方案的不同將患者分為紫杉醇+卡鉑組（PC組）和紫杉醇+洛鉑組（PL組），每組各30例，兩組患者一般資料比較，差異無統計學意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2 治療方案

PL組患者給予靜脈滴注紫杉醇（辰欣藥業股份有限公司，批準文號H20057404）135～175 mg/m2，靜脈滴注洛鉑（海南長安國際制藥有限公司，批準文號H20080359）50 mg/m2，每21天為1個療程；PC組患者則予以135～175 mg/m2紫杉醇靜脈滴注；卡鉑（齊魯制藥有限公司生產，批準文號H20020181）血藥濃度-時間曲線下面積（area under the curve，AUC） = 5.0靜脈滴注，每21天為1個療程。治療過程中詳細觀察患者不良反應發生的情況，計算不良反應發生率[6]。

1.3 實時熒光定量PCR法測定ERCC1、β-tubulin Ⅲ和β-catenin表達

分別采集化療前后患者的血液，離心后提取RNA，行熒光定量PCR檢測。PCR引物的合成均由上海Invitrogen公司承擔完成，引物序列參考文獻[7-8]。ERCC1：上游5'-TTGGCGACGTAATTCCCGA-3'，下游5'-CAGGTTGTGGTAGCGGAGG-3'；β-tubulin Ⅲ：上游5'-GTTCTGGGAA GTCATCAGTGATGA-3'，下游5'-GTCCGAGTCGCCCACGTA-3'；β-catenin：上游5'-GCCACAGGATTACAAGAAGC-3'，下游5'-CCACCAGAGTGAAAAGAACG-3'；GAPDH：上游5'-CCTCAAGATCATCAGCAAT-3'，下游5'-CCATCCACAG TCTTCTGGGT-3'。SYBR Green熒光PCR反應參數條件均為95℃，預變性5 min，1個循環；95℃變性10 s、退火延伸（ERCC1和β-tubulin Ⅲ，60℃；β-catenin，58℃）15 s，72℃ 20 s，持續40個循環；以2-ΔΔCt方法分別計算各樣本各個基因的Ct值，并用GAPDH的Ct值進行校正。

1.4 酶聯免疫吸附試驗檢測ERCC1、β-tubulin Ⅲ和β-catenin表達

分別采集化療前后患者血液，采用酶聯免疫吸附試驗測定ERCC1、β-tubulin Ⅲ和β-catenin表達水平。其中，ERCC1、β-tubulin Ⅲ檢測試劑盒購于上海朗頓生物科技有限公司；β-catenin檢測試劑盒由上海拜力生物科技有限公司提供。檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書執行。

1.5 近期臨床療效評價

依據實體瘤療效評價標準[9]評估臨床療效：①完全緩解（CR）：腫瘤完全消失且無新病灶出現，持續大于1個月；②部分緩解（PR）：腫瘤最大直徑和最大垂直直徑乘積縮小≥50%并持續1個月以上，其他病變無明顯進行性加重；③穩定（SD）：腫瘤最大直徑和最大垂直直徑乘積縮小<50%且增大≤25%；④進展（PD）：腫瘤最大直徑和最大垂直直徑乘積增大>25%。總體治療有效率 = （CR+PR）/總例數×100%；疾病控制率=（CR+PR+SD）/總例數×100%。

1.6 遠期隨訪觀察

追蹤隨訪觀察2年，分別計算兩組患者的平均生存時間、1、2年生存率及腫瘤復發或轉移的發生率。

1.7 統計學方法

采用SPSS 19.0統計學軟件進行數據分析，計量資料數據用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本的Student-t檢驗；計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗；應用Kaplan-Meier法計算兩組患者的總體生存時間，Log-rank檢驗分析兩組間生存時間的差異；以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者近期臨床療效比較

PL組的治療總體有效率和疾病控制率均略高于PC組，兩組比較差異均無統計學意義（χ2 = 0.417、0.351，均P > 0.05）。見表1。

表1 兩組患者總體有效率和疾病控制率比較（例）

注：CR：完全緩解；PR：部分緩解；SD：進展；PD：進展

2.2 兩組患者不良反應發生情況比較

PL組患者的總不良反應發生率明顯低于PC組，差異有統計學意義（χ2 = 4.022，P < 0.05）。見表2。

表2 兩組患者不良反應發生狀況比較（例）

注：與PC組比較，*P < 0.05

2.3 兩組患者遠期臨床療效比較

兩組患者1年生存率、2年生存率、局部復發與轉移率和平均生存時間比較，差異均無統計學意義（P > 0.05）。見表3、圖1。

表3 兩組患者隨訪生存分析結果比較

圖1 兩組患者生存時間比較

2.4 兩組患者ERCC1、β-catenin和β-tubulin Ⅲ的表達水平比較

PL組患者的ERCC1和β-tubulin Ⅲ的mRNA表達和蛋白含量均顯著低于PC組，差異有高度統計學意義（P < 0.01）；但兩組患者β-catenin的mRNA表達和蛋白含量比較差異無統計學意義（P > 0.05）。見表4。

3 討論

紫杉醇聯合卡鉑的治療方案是晚期卵巢癌術后化療的標準方案，但有高達50%左右的患者在治療結束后出現疾病的復發或對藥物產生嚴重的耐受性，導致治療失敗[10-12]。而且，紫杉醇與卡鉑的聯合化療方案也極易誘發外周神經毒性、骨髓抑制、消化道反應等諸多副作用[13-14]。本研究采用紫杉醇配合洛鉑靜脈滴注的方式治療晚期卵巢癌患者，結果顯示PL的總體治療有效率、1年和2年生存率、平均生存時間均略高于PC組，但兩組比較差異無統計學意義；PL組患者的不良反應發生率顯著低于PC組，表明紫杉醇聯合洛鉑對患者機體的損傷較小，治療效果相對更優，且在一定程度上可延長患者的生存時間。

研究顯示，ERCC1的表達水平不僅與腫瘤細胞DNA損傷修復密切相關，還是導致鉑類抗腫瘤藥物耐藥的關鍵基因[15-17]。本研究結果發現，PL組患者的ERCC1表達水平顯著低于PC組，提示了紫杉醇聯合洛鉑對卵巢癌患者高表達的ERCC1水平有更為顯著的抑制作用。β-tubulin Ⅲ即3型β微管蛋白，是抗微管藥物作用的主要靶點，高表達的β-tubulin Ⅲ同樣可以導致抗微管化療藥物的耐藥[18-19]。本研究結果顯示，PL組患者β-tubulin Ⅲ表達水平明顯低于PC組，該結果充分表明紫杉醇配合洛鉑的應用可顯著增強抗微管藥物紫杉醇對腫瘤細胞的殺傷效果。β-catenin是一種介導細胞黏附、增殖與凋亡的多功能蛋白，也是鉑類藥物耐藥的關鍵因子[20-23]，但本研究結果發現，兩組患者β-catenin的表達水平無明顯差別，提示PL和PC用藥策略對β-catenin的影響無明顯差別，但β-catenin是否可作為卵巢癌療效判定的指標尚需要大樣本臨床試驗加以證實。

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（收稿日期：2015-11-20 本文編輯：任 念）