榆林市隴薯7號馬鈴薯莖尖脫毒培養(yǎng)基篩選

常勇 楊小琴 張媛媛

摘要 應(yīng)用不同激素配比的培養(yǎng)基對引進(jìn)馬鈴薯品種隴薯7號進(jìn)行莖尖的分化培養(yǎng)，以期獲得脫毒試管苗。試驗結(jié)果表明，誘導(dǎo)隴薯7號莖尖分化成苗的最適培養(yǎng)基配方為MS+0.05 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA，成活率達(dá)92%，成苗率達(dá)24.56%。

關(guān)鍵詞 馬鈴薯；隴薯7號；莖尖脫毒；培養(yǎng)基；篩選；陜西榆林

中圖分類號 S532 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1007-5739（2016）09-0071-02

Abstract Culture medium with different hormone ratio were used for differentiation and culture of stem apex of potato Longshu 7，in order to obtain the virus free test tube seedling.Test results showed that optimum medium formula for inducing stem tips into seedlings was MS+0.05 mg/L 6-BA+0.15 mg/L NAA，the survival rate was 92% and the rate to be plantlet could reach 24.56%.

Key words potato；Longshu 7；virus-free of stem apex；medium；screening；Yulin Shaanxi

隴薯7號是甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院育成品種，晚熟，生育期120 d左右，株型直立，枝葉繁茂，莖、葉綠色，花冠白色，薯塊長橢圓形，黃皮黃肉，芽眼較淺，表皮光滑，淀粉含量13.0%，干物質(zhì)含量23.3%，還原糖含量0.25%，屬于全粉加工及炸條型馬鈴薯[1]，在榆林市引進(jìn)生產(chǎn)試驗特征特性表現(xiàn)突出，具有適應(yīng)性強(qiáng)、產(chǎn)量高、抗性強(qiáng)等特點，推廣應(yīng)用前景較好。但由于馬鈴薯的傳統(tǒng)種植方式是用塊莖作為營養(yǎng)體進(jìn)行繁殖，導(dǎo)致病毒在母體內(nèi)逐漸累積，引起種性退化，對生產(chǎn)造成很大危害[2]。應(yīng)用組織培養(yǎng)方法特別是莖尖組織培養(yǎng)來獲取脫毒苗，已成為當(dāng)前解決馬鈴薯品種退化的主要技術(shù)。目前，榆林市未見有關(guān)隴薯7號莖尖脫毒快繁培養(yǎng)的研究報道，本試驗通過不同激素濃度配比培養(yǎng)基來篩選適合其莖尖分化成苗的配方，進(jìn)而獲得脫毒種苗，恢復(fù)其優(yōu)良種性，改善品質(zhì)，提高產(chǎn)量，對加快其大面積推廣應(yīng)用具有很大的價值。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗在陜西省榆林市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院馬鈴薯研究所組培中心進(jìn)行，以田間長勢良好、無病癥表現(xiàn)的隴薯7號健康植株收獲的薯塊為材料。試驗時間在11月至翌年4月。

1.2 試驗方法

1.2.1 培養(yǎng)基設(shè)計。本試驗以齊恩芳等[3]、仲乃琴[4]、田長恩[5]等的研究結(jié)果為參考依據(jù)，以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入生長調(diào)節(jié)劑6-BA、NAA，共設(shè)計了7種不同濃度激素配比培養(yǎng)基處理，各處理激素濃度設(shè)計見表1。

1.2.2 外植體的制備。將薯塊破休眠后，經(jīng)檢測將不帶馬鈴薯紡錘塊莖類病毒的塊莖置于暗光中進(jìn)行催芽。10 d后待薯塊長出約0.5 cm長的白色簇生芽時，將薯塊置于自然散射光下繼續(xù)萌芽，待芽長到2.0～3.0 cm時，即可取芽作外植體。

1.2.3 外植體的處理。用解剖剪小心取下薯塊上的健壯芽，裝入醫(yī)用紗袋中，置于自來水龍頭下流水沖洗30 min，將其拿到無菌操作臺，先用75%的酒精浸泡30 s，無菌水沖洗2遍，再用10%的NaClO4溶液浸泡6 min，無菌水沖洗3遍，用無菌吸水紙吸干待用。

1.2.4 芽莖尖的剝離和培養(yǎng)。將消毒好的芽放在40倍雙目解剖鏡下進(jìn)行剝離，剝離的莖尖為帶有1～2個葉原基（直徑0.2～0.3 mm）的分生組織。將剝離好的莖尖接種于上述7個處理的培養(yǎng)基試管中，每處理接種60個，并注明接種的品種名稱、處理代號和接種日期。暗培養(yǎng)1周后再進(jìn)行光照培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度20～25 ℃，濕度70%～80%，光照14～16 h/d，光照強(qiáng)度2 000～3 000 lx。待長成一株帶有2～3片葉的植株后轉(zhuǎn)入MS培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)。

1.2.5 統(tǒng)計成活率及成苗率。莖尖接種培養(yǎng)2～5個月后進(jìn)行調(diào)查，統(tǒng)計成苗率（成活莖尖長出帶有2個以上葉片的小植株視為成苗）和莖尖成活率（莖尖分生組織發(fā)育為可見的綠色小點視為成活）。成苗率為成苗個數(shù)與成活莖尖個數(shù)之比，成活率為成活莖尖個數(shù)與接種莖尖個數(shù)之比[6]。

2 結(jié)果與分析

在莖尖培養(yǎng)過程中，同一大小的莖尖，其成活率和成苗率與培養(yǎng)基中添加的激素種類和濃度有關(guān)。從表2可以看出，處理1即在不含任何生長調(diào)節(jié)劑的情況下，莖尖的成活率較低，有些莖尖雖然能形成小綠點，但生長速度極慢，最終不能再生成苗；處理4的成活率（92%）和成苗率（24.56%）均達(dá)到了相對較好的效果。

細(xì)胞分裂素和生長素在馬鈴薯莖尖分生組織培養(yǎng)過程中起著重要的作用[7]。從本試驗結(jié)果可看出，6-BA對莖尖培養(yǎng)成苗率影響較大，隨著6-BA和NAA濃度逐漸升高，莖尖成苗率先升高后降低。當(dāng)6-BA和NAA濃度分別達(dá)到0.1 mg/L和0.2 mg/L時，成苗率明顯下降，此外發(fā)現(xiàn)單獨(dú)使用0.2 mg/L的NAA要比單獨(dú)使用0.05 mg/L的NAA效果顯著。在試驗的7個培養(yǎng)基中，以處理4對隴薯7號的培養(yǎng)效果較好。由此說明同一品種的馬鈴薯對不同濃度激素配比的反應(yīng)是有差異的，原因可能是馬鈴薯品種莖尖所含內(nèi)源激素種類和濃度不同，因而在莖尖分生組織培養(yǎng)時也需要不同的外源激素來打破內(nèi)源激素間的平衡，使莖尖培養(yǎng)朝著成苗率高的方向發(fā)展。

3 結(jié)論與討論

試驗結(jié)果表明，在NAA濃度固定的情況下，6-BA的濃度在一定范圍內(nèi)能夠提高莖尖的成活率和成苗率，而針對隴薯7號的最適6-BA濃度為0.05 mg/L。當(dāng)濃度達(dá)到0.1 mg/L時，對莖尖發(fā)育會產(chǎn)生抑制作用，這與前人結(jié)果一致[8]。此外，有研究表明在馬鈴薯莖尖培養(yǎng)中添加適量玉米素代替6-BA能夠顯著提高莖尖的成苗率[9]，此配方有待進(jìn)一步試驗證實。

影響馬鈴薯莖尖培養(yǎng)生產(chǎn)脫毒種苗的因素除了培養(yǎng)基類型外，還有種薯質(zhì)量、莖尖大小、培養(yǎng)條件和病毒種類[10]。因此，篩選不同濃度激素配比的培養(yǎng)基，對提高馬鈴薯莖尖分化成苗尤為重要。利用莖尖分生組織培養(yǎng)獲得脫毒苗，是預(yù)防馬鈴薯病毒病的根本方法，但大田生產(chǎn)繁殖應(yīng)注意防治蚜蟲等害蟲[11-13]。

4 參考文獻(xiàn)

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