濱海白首烏活性成分及其免疫活性研究進展

方希修 畢可波 方圓

摘要 濱海白首烏是一種傳統中藥材，為蘿藦科鵝絨藤屬植物耳葉牛皮消的塊根，具有對癌細胞的直接殺傷作用、調節免疫、誘導腫瘤細胞凋亡等多種免疫活性。分析了其活性成分及其免疫活性，提出了其研究與開發利用方向。

關鍵詞 濱海白首烏；活性成分；C21甾體；免疫活性

中圖分類號 R285 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2016）09-0080-02

Abstract Cynanchum bungei is a famous traditional tonic in the oriental system of medicine as Cynanchum auriculatum Royle ex Wight roots. It have killing cancer cells，immunomodulatory，induction apoptosis of tumor cells and other activities. The active ingredient and immune activity of Cynanchum auriculatum Royle ex Wight was analyzed，research and development direction of Cynanchum auriculatum Royle ex Wight in the future were summarized.

Key words Binhai Cynanchum bungei；active ingredients；C21 steroidal glycosides；pharmacological activities；Binhai Jiangsu

首烏分為赤、白2個品種，赤首烏國內外都有生長，濱海白首烏又名耳葉牛皮消（Cynanchum auriculatum Royle ex Wight），是僅生長在中國的首烏物種，是中國傳統的食、藥、美容兼用植物。全國耳葉牛皮消95%出產在江蘇省濱海縣，當地農民種植白首烏的歷史悠久，是我國著名的首烏之鄉。耳葉牛皮消味甘、苦，性微溫，含有C21甾苷等生物活性物質，并含有多種營養成分及生物活性物質，具有補肝腎、強筋骨、益精血、健脾消食、解毒療瘡等功效。

研究表明，濱海白首烏（耳葉牛皮消）有效部分和生理成分具有多種保健功效，如提高特異以及非特異性免疫效果、降低膽固醇含量、清除人體內自由基、抑制腫瘤生長擴散，有效降低心肌耗氧量等作用。近年來，隨著對耳葉牛皮消開發利用的不斷深入，耳葉牛皮消和耳葉牛皮消制品的需求量呈猛增趨勢。

1 濱海白首烏的活性成分

1.1 多糖類

濱海白首烏（耳葉牛皮消）中含有雙糖Methylgaucobioside 和Wilforibiose。并含3種雜多糖AC-A，AC-B，AC-C，該3種雜多糖均由葡萄糖、木糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、甘露糖6種單糖構成[1]。

1.2 苯酮類

濱海白首烏（耳葉牛皮消）存在苯酮類物質，主要為白首烏二苯酮。苯酮類物質主要存在于戟葉牛皮消、隔山消和耳葉牛皮消根中，前者中存在Bunge-isideA、B、C、D，4﹣羥基苯乙酮、2，4-二羥基苯乙酮[2]，后兩者均存在白首烏二苯酮[3-4]，而隔山消中還存在Cynanchone A、Cynandione A。

1.3 C21甾體酯苷化合物

研究表明，C21甾體苷類化合物具備抗多種腫瘤功效，治療腫瘤有效，該化合物制劑已成為用于治療多種腫瘤的臨床藥物。研究C21甾體苷類化合物的藥理作用、分離及作用機制成為熱點。

C21甾體酯苷是目前從濱海白首烏中發現的量最多、最主要的活性成分。印 敏等分別從新鮮藥材、塊根、黑鰻藤藤莖中分離出C21甾體苷類化合物。從白首烏新鮮藥材中分離并鑒定化合物7類，其中C21甾體苷類化合物3類，占42.86%，從塊根中分離出新C21甾體苷類化合物4個，從黑鰻藤藤莖中分離C21甾體苷類化合物3個[5-7]。

白首烏分子內含孕甾烯衍生物，主要存在于 C21甾體類骨架內，而目前未發現變型孕甾烷骨架，可推測白首烏分子結構中不含有與之相關的衍生物。在白首烏分子內，C3位β-羥基易結合4類糖合成苷，糖之間以1→4相連[8]，如2-去氧洋地黃糖、2，6-去氧糖、夾竹桃糖、葡萄糖、磁麻糖。C12、C20位β-羥基可結合有機酸生成C21羥基成酯。

1.4 磷脂類

濱海白首烏（耳葉牛皮消）含有磷脂類物質，采用鉬藍比色法測定耳葉牛皮消中的磷脂類成分，含量為0.030%[9]。從耳葉牛皮消中提取總磷脂，通過鑒定，證明有5種磷脂：磷脂酰甘油（PG）、磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰膽堿（PC）、磷脂酸（PA）、磷脂酰乙醇胺（PE）、雙磷脂酰甘油（DPG）[10]。

2 濱海白首烏藥理活性

2.1 抗腫瘤

研究表明，濱海白首烏中含有的獨特的白首烏甾體總苷，具有廣泛的抗腫瘤效果，對常見的4種實體瘤細胞如大腸癌細胞、前列腺癌細胞、宮頸癌細胞、肺癌細胞均有明顯的抑制作用，且與單位時間內的高濃度有關，呈現出濃度依賴性。研究表明，濱海白首烏（耳葉牛皮消）含有白首烏總苷，可明顯抑制S180瘤株在體內的發，抑制作用效果與給藥途徑和藥物劑量密切相關[11]。濱海白首烏（耳葉牛皮消）中的白首烏總苷抗腫瘤作用機制主要是2種，一是直接殺傷癌細胞的，二是誘導腫瘤細胞凋亡。

2.1.1 直接殺傷癌細胞。濱海白首烏（耳葉牛皮消）中含有的甾體酯苷，其分子結構較為特殊，既含有甾核，具有親脂性；又含有基團，具有親水性。將甾體酯苷藥物作用于癌細胞膜表面，競爭K+的結合部位，抑制Na+/K+泵，引起癌細胞膜表性質變，可初步判定與白首烏甾體酯苷親脂基團和親水基團有關[12]。經FCM快速測定細胞DNA的相對含量，部分癌細胞膜存在破裂現象[13]，說明甾體酯苷對癌細胞S期有阻滯作用，在形態學上支持白首烏甾體酯苷的直接殺傷作用。

2.1.2 誘導腫瘤細胞凋亡。研究結果表明，應用MTT法可證實白首烏苷（AK）對KB細胞（口腔表皮樣癌細胞）有殺傷作用，其機理可能與誘導腫瘤細胞凋亡有關。白首烏苷（AK）是從白首烏總苷（CA）分離純化獲得的單體，MTT法主要是將白首烏苷（AK）作用于KB細胞（口腔表皮樣癌細胞），使用50 μg/mL濃度的白首烏苷（AK）作用于KB細胞（口腔表皮樣癌細胞）72 h，可誘導核縮等早期調亡。經流式細胞儀測定，白首烏苷（AK）作用72 h可出現核縮調亡高峰，達41.9%，還可將KB細胞（口腔表皮樣癌細胞）周期阻滯于G0/G1期[14]。

研究表明，白首烏C21甾體苷類化合物抗癌作用熱點明顯，一是對肝癌細胞有誘導凋亡作用；二是化合物的濃度與抑制率相關，即可能具有量—效關系；三是C21甾體類化合物對腫瘤細胞抑制具有選擇性。

王冬艷等[14]研究發現，不同濃度的C21甾體苷類化合物對小鼠移植性Heps具有抑制作用，10 mg/kg劑量組的抑制腫瘤率為34.79%，20 mg/kg劑量組的抑制腫瘤率為47.08%，40 mg/kg劑量組的抑制腫瘤率為50.23%。

林紅梅等[15]通過9種C21甾體苷類化合物作用，對SMMC-7721人肝癌細胞系和A549肺腺癌細胞株的抑制作用有程度上的差異，單株細胞增殖的抑制率伴隨與化合物濃度呈正相關。鄭 威等[16]發現，通過丫啶橙染色法染色熒光顯微鏡，白首烏中甾體苷誘導PC-3（前列腺癌細胞）產生的提取物，可誘發顯著的核斷裂和核固縮，形成凋亡小體。同時，還發現PC-3（前列腺癌細胞）凋亡進程與C21甾體苷類化合物存在量—效關系，可提高細胞阻滯在 G2/M期比例，呈顯著濃度依賴性。

另外，純化C21甾體類化合物作用于BGC-823、BEL-7402、KB和PC-3、SGC-7901細胞株，發現純化C21甾體類化合物對三者未表現明顯抗腫瘤作用，而對后二者抗腫瘤作用明顯，這表明C21甾體苷類化合物對于腫瘤細胞抑制作用具有選擇性[16]。

2.2 免疫調節

曾郁敏等[17]研究表明，白首烏總苷對機體具有顯著的調節免疫功能。顧立剛等[18]認為，白首烏總甙的不同濃度對于某些細胞的作用不同。高濃度白首烏總甙對小鼠脾臟Ti淋巴細胞增殖反應有抑制作用，對于白細胞介素-2（IL-2）的活性也產生抑制效應，而在低濃度白首烏總甙對于上述試驗對象促進效應明顯。宋俊梅等[19]認為，白首烏總甙能激活小鼠腹腔M5，提高M5抗原的能力，增強吞噬消化，從而提升小鼠機體的特異性免疫功能[19]。

研究表明，C21甾苷可降低移植性肝癌實體瘤后異常增高的脾指數，提升胸腺指數，巨噬細胞吞噬能力增強，T、B淋巴細胞增殖反應明顯增強。脾細胞顯著提高分泌白細胞介素-2（IL-2），腹腔巨噬細胞分泌TNF-α能力明顯提高[20]。高麗君用家兔、小鼠做樣本，采用白首烏中的白首烏多糖類進行靶擊，發現后者能增強小鼠遲發型超敏反應，顯著提高家兔T 淋巴細胞的增殖能力，從而提高機體的免疫效應[21]。

白首烏還可通過影響淋巴細胞在形態和數量上提升機體免疫。在形態上，白首烏提取物促進動物T淋巴細胞的依賴區大范圍增生，促使B淋巴細胞依賴區增大[22]。在數量上，白首烏總磷脂可顯著提高外周血ANAE（+）淋巴細胞比值和絕對數，防止倒置現象，為T細胞比值保持正常打下基礎[23]。

3 結語

今后以及相當長的一段時間，科研工作者應加強對濱海白首烏（耳葉牛皮消）的系統研究以及商業開發。一方面，積極開展其藥理活性研究；另一方面，利用白首烏的獨特的區域資源優勢，運用現代制備技術，生產提取物單味藥劑或中藥復方藥物。從濱海白首烏（耳葉牛皮消）的分子結構及現有的理論研究結果來看，其含有的甾體酯苷可開發成為新的抗腫瘤藥物，如苯酮類、磷脂類可分別開發為保肝類藥物和生發產品，實現其廣闊的醫藥價值[24]。

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