食用菌液體菌種發酵罐專用母種制作方法

白胡木吉力圖　白福林　哈斯圖力古爾　刁雅娟　錢丹珠

摘 要：本文介紹了液體專用母種的制作過程、培養終點及質量好壞的判斷、液體專用母種生產中應注意的問題等內容。

關鍵詞：液體菌種；培養器；母種

中圖分類號：S646 文獻標識碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20160432006

在液體菌種培養器的使用越來越普及時種植戶遇到了不會制作液體菌種培養器專用母種的難題，影響了種植戶使用液體菌種培養器這種先進設備的積極性。本文介紹其制作方法如下：

1 液體專用母種的制作過程

1.1 試管斜面種的制作

采用PDA綜合培養基。另外，根據不同需要可以采用營養加富培養基，即在上述配方外加入20g麩皮或0.5g蛋白胨；用漏斗將培養基分裝至試管1/5～1/4處，試管口壁不粘培養基；梳棉制作大小合適的棉塞，松緊適度，塞入試管內1.5 ～2.0cm，外露0.5 ～1.0cm7支或10支捆成1捆，管口用牛皮紙包好，直立于滅菌鍋內，準備滅菌；121～126℃（0.11 ～0.15MPa）的條件下滅菌30min，將培養基冷卻至60～70℃時將滅好菌的培養擺成斜面，冷卻備用；當培養基溫度降至30℃以下時，無菌室內將菌種用接種鉤接入空白培養基上，動作迅速、準確；根據不同的品種選擇其適宜的溫度避光培養，常規品種22～26℃，高溫品種29～31℃，一般7～11d即可長好，菌絲生長健壯、潔白、均勻、無任何雜菌污染的菌種為優良菌種。

1.2 搖瓶種的制作

按液體培養基的配料辦法按一定的配比制作培養基（土豆20%、麩皮45%～5%、紅糖1.2%～5%、葡萄糖1.5%、KH2PO40.2%、MgSO40.1%、蛋白胨0.3%、VB120mg/L）；每瓶裝料系數為20%～40%，即1000mL的錐形瓶裝料約200～400mL；棉塞外包1層紗布，大小要合適，上面加蓋1層牛皮紙，用線繩綁好。

121～126℃（0.11MPa～0.15MPa）的條件下滅菌30min；每瓶接入2～3塊0.5cm2～1cm2的菌塊，使菌塊盡量漂浮在液面上；把接好種的錐形瓶置搖床上（或靜置24h后），在23～25℃的條件下振蕩培養，一般7～10d即可長好。可以看見，瓶里有大量基本均勻、活力旺盛的菌球；菌球形態應大小均勻、活力旺盛、毛刺明顯，靜置5min后菌球占菌液濃度的80%以上或不分層。菌液由前期的微渾濁變得澄清透明，多數是淺黃色或橙黃色；若變得渾濁不清，則很可能是染菌。到培養后期菌液的糖香味會逐漸消失，取而代之的是或有或無的菌種特有的清香味；若有臭味、酸味、霉味，則可能是染菌。若以上指標還不能判斷菌種的質量，還可以將菌種放在20～25℃的條件下靜置48h左右。若表層菌種萌發明顯且無其它顏色的孢子，則多為正常；若有其它特殊顏色，則可能是染菌。

1.3 固體顆粒培養基的制作

配方有木腐類，硬雜木屑73%～78%、麩皮20%～25%、

紅糖1%、KH2PO40.2%、MgSO40.1%、石膏1%、含水量60%～63%；草腐類，谷粒40%～50%、麩皮20%～25%、紅糖1%、木屑20%～25%、KH2PO40.2%、MgSO40.1%、石膏1%～2%、含水量60%～63%。注：其中雜木屑和麩皮用20～40目的篩子過篩，用篩子中間的細小顆粒；用500mL錐形瓶盛裝，用壓子壓平至刻度450mL左右（每瓶約裝干料150g）；塞上大小合適外包紗布的棉塞，蓋上1層牛皮紙；在121～126℃的條件下滅菌90min；在無菌條件下用滅過菌的吸管將經過測生長正常的搖瓶種接到滅好菌的固體培養基上，每瓶接入10mL；把接好種的菌瓶置24～26℃下培養，待菌絲長滿后可以使用；用肉眼觀察將菌絲生長弱、慢及有其它異常情況的菌種瓶挑出不用，生長良好的菌種一般菌絲短、密、齊，菌絲顏色潔白一致，無任何雜菌。

2 液體專用母種生產中應注意的問題

2.1 制定好生產計劃、嚴格執行生產操作程序

制定好生產計劃，合理安排各級菌種的生產時間，保持其生產的連續性，保證菌種在最佳狀態時得到應用。嚴格執行菌種的生產操作程序，保證菌種的純度、質量和合格率。

2.2 保證菌種的可靠性

能及時準確地判斷出作為各類種源的菌種是否染菌，特別是搖瓶種，更應該通過各種途徑保證其可靠性。

2.3 保存好母種

液體專用母種長好后應在1～5℃條件下避光保存，在1個月之內使用效果最好。

2.4 熟練生產工藝操作

在生產初期，如果自己不會制作母種，可以從專業制作廠家購買專用母種進行生產或用搖瓶種生產，以便于熟練生產工藝操作，及時準確判斷操作中可能出現的問題。

參考文獻

[1] 王德芝，張水成，王賢香等.食用菌生產技術[M].北京：中國輕工業出版社，2007：167-183.

作者簡介：白胡木吉力圖（1973-），男，通遼職業學院副教授、農學碩士，從事食用菌育種與栽培研究。