膿毒血癥患者血小板膜糖蛋白的表達及臨床意義

黃君華，鄧杰

膿毒血癥患者血小板膜糖蛋白的表達及臨床意義

黃君華，鄧杰

目的研究膿毒血癥患者的血小板膜糖蛋白的表達和變化的臨床意義。方法選取膿毒血癥患者40例，將23例器官功能正常患者設為A組，17例器官功能不全患者設為B組，另選40例正常人作為對照組，比較3組外周血中血小板膜糖蛋白CD62P、CD63、血漿血栓素B（2TXB2）和6-酮-前列腺素F1（6-keto-PGF1）。結果膿毒血癥患者外周血中血小板膜糖蛋白CD62P、CD63及TXB2均高于正常組（均＜0.05），但6-keto-PGF1低于正常組（＜0.05）；器官功能不全患者在血小板膜糖蛋白CD62P、CD63及TXB2均高于器官功能正常患者（均＜0.05），但6-keto-PGF1低于器官功能正常患（＜0.05）。結論膿毒血癥患者外周血中血小板明顯處于高度活化狀態，其活化程度與患者病情呈正相關。血小板激活指標可以作為患者臟器損傷程度的有效指標之一。

膿毒血癥；血小板膜糖蛋白；表達

膿毒血癥是由于感染引起的全身性嚴重反應綜合征［1］，是燒傷、創傷、休克等嚴重疾病患者的高發并發癥之一，患病后容易引發全身性多器官功能障礙。全球現階段感染膿毒血癥患者超過1 800萬人，并且該病發病率還在以每年2％～7％的速度上升，該病發病后病情兇險，病死率較高［2-3］。流行病學研究發現，膿毒血癥患者的病死率已超過心肌梗死，成為重癥監護病房（ICU）中非心臟病死亡的主要原因之一。該病的發病機制目前還沒有準確的定論，涉及到復雜的全身性病變，主要有全身炎癥網絡效應、基因多態性、免疫功能障礙及凝血功能異常等。凝血系統的活化加重膿毒血癥患者病情的發展，而血小板在炎癥和凝血間占據著最主要的作用。本文研究膿毒血癥患者的血小板膜糖蛋白CD62P、CD63表達及變化，并與正常人進行對比，報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取浙江省舟山醫院2014年6月至2015年6月收治的膿毒血癥患者40例，均符合美國胸科醫師學會（ACCP）/危重病醫學會（SCCM）中關于膿毒血癥的新診斷標準［4］，且自愿參加；排除：（1）患病前有血栓性疾病及可引起血小板變化的疾病，（2）入院前10 d內接受過血小板抗凝藥物治療或是3 d內有過肝素抗凝病史。根據患者的發病程度將器官功能正常患者和器官功能不全患者分為A組和B組，A組23例，滿足嚴重膿毒血癥的診斷標準，其中男12例，女11例，平均年齡（46.7±8.9）歲；B組患者17例，均未達到嚴重膿毒血癥的診斷標準，其中男10例，女7例，平均年齡（46.1±9.2）歲；正常對照組40例，其中男23例，女17例，平均年齡（44.9±8.8）歲。3組性別、年齡差異均無統計學意義（均＞0.05），具可比性。

1.2方法抽取患者肘靜脈血5 ml，將其分別加入2 ml、3 ml的兩只抗凝試管中，分別在試管中注入1％依地酸鈉，去抗凝血2 ml進行離心，800 r/min速度離心5min后取上層富含血小板血漿（PRP）［5］，在3 500 r/min速度離心15 min后去上清液，加入磷酸鹽緩沖液（PRP），再通過3 000 r/min速度離心10 min后洗滌2次，加入1％的多聚甲醛固定30 min后制成血小板懸液，放入4℃的冰箱中待測。剩余3 ml的抗凝血在低溫下以速度3 000 r/min的速度離心20min后，將血漿分離出保存于-20℃的冰箱中待測。將固定后的血小板懸液通過1 500 r/min的速度離心10 min后去除上清液，在其中加入抗血小板膜受體的熒光標記抗體，在常溫下放置30 min后加入PBS離心10 min，除去上清液，再加入1 ml PBS將血小板懸浮，采用美國Becton-Dickinson公司生產的Calibur型流式細胞分析儀進行檢測［6］。采用雙抗夾心免疫放射分析法檢測血漿血栓素B（2TXB2）和6-酮-前列腺素F1（6-keto-PGF1）。

1.3統計方法采用SPSS21.0統計軟件進行處理，計量資料以均數±標準差表示，組間比較采用檢驗；計數資料比較采用2檢驗。＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1兩組外周血中各項檢測指標比較

膿毒血癥患者中死亡13例，病死率為32.5％。膿毒血癥患者外周血中血小板膜糖蛋白CD62P、CD63及TXB2均高于正常組（均＜0.05），6-keto-PGF1濃度低于正常組（＜0.05），見表1。

2.2器官功能正常與不全患者外周血中各項檢測指標比較B組在血小板膜糖蛋白CD62P、CD63及TXB2均高于A組（均＜0.05），6-keto-PGF1低于A組（＜0.05），見表2。

3　討論

膿毒血癥是危害人類健康疾病之一，該病的發生是由于各種病危患者所發生的并發癥［6］。研究發現，進入21世紀以來，膿毒血癥高病死率并未得到有效解決，相反該病的發病率在逐年上升，已成為了ICU病房中非心臟病死亡的主要疾病［7-8］。本文顯示，膿毒血癥患者病死率為32.5％。

表1　膿毒血癥患者與正常組外周血中各項檢測指標比較

表2　器官功能正常與不全患者外周血中各項檢測指標比較

血小板中CD62P又稱GMP140或PADGM蛋白，在靜止血小板中定位于顆粒，活化的血小板中定位于質膜上。在靜止的血小板中平均每個血小板表面僅能表達900～1120個CD62P分子；當凝血酶活化時，此時血小板中顆粒與質膜會發生融合，在短時間內會使血小板質膜上表達的CD62P分子增至（10～13）×103個［9-10］。它介導血小板在血管內皮細胞上滾動及黏附作用，增強血小板與單核細胞間的作用［11］，血小板活化后CD62P分子大量表達于表面，并與pSGL-1d的受體結合參與血小板黏附白細胞反應，血小板活化后CD62P分子大量表達于表面，并與pSGL-1d的受體結合參與血小板黏附白細胞反應。TXB2和6-酮-前列腺素F1降低見于各種原因所致血管內皮細胞及其下層組織損傷時導致PGI2合成酶減少。Vardi等［12］研究發現，在膿毒血癥患者外周血中CD62P分子表達增加，同時該病的嚴重程度與CD62P分子表達呈正相關。本文顯示膿毒血癥患者外周血中血小板膜糖蛋白CD62P明顯高于正常人，同時器官功能不全患者也明顯高于器官功能正常患者（＜0.05）。CD63是血小板內溶酶體顆粒的膜蛋白，在機體處于正常狀態下時，血液中血小板表面僅有少量表達，當血小板處于活化狀態時，CD63會跟隨顆粒反應而在血小板表面大量表達，同時能夠介導中性粒細胞對活化內皮的黏附，也是一種理想的檢測血小板活化程度的指標。本文也證明CD63的表達與膿毒血癥的發生有關，也與病情嚴重程度呈正相關。

綜上所示，膿毒血癥患者外周血中血小板膜糖蛋白CD62P、CD63的檢測，可以直觀顯示膜糖蛋白CD62P、CD63水平與膿毒血癥的關系，為該病的治療和預后提供了一個有效的依據。

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10.3969/j.issn.1671-0800.2016.08.006

R692

A

1671-0800（2016）08-0991-03

2016-02-25

（本文編輯：孫海兒）

316000浙江省舟山，舟山醫院

黃君華，Email：46571466@qq.com