納達合劑對大鼠胃腸動力的影響

錢春美　沈艷婷　闕任燁　林柳兵　陶智會　李　勇

(1 上海中醫藥大學附屬市中醫醫院實驗中心，上海，200071； 2 上海中醫藥大學附屬市中醫醫院脾胃病科，上海，200071； 3 上海市嘉定區中醫醫院腫瘤科，上海，201800)

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納達合劑對大鼠胃腸動力的影響

錢春美1沈艷婷2闕任燁2林柳兵2陶智會3李勇2

(1 上海中醫藥大學附屬市中醫醫院實驗中心，上海，200071； 2 上海中醫藥大學附屬市中醫醫院脾胃病科，上海，200071； 3 上海市嘉定區中醫醫院腫瘤科，上海，201800)

目的：本實驗旨在觀察納達合劑對膽汁反流性大鼠胃腸動力的調節作用。方法：利用大鼠膽汁反流性胃炎模型，將60只大鼠隨機分為對照組、模型組、納達低劑量組、納達中劑量組、納達高劑量組和嗎丁啉組，每組10只。通過ELISA檢測膽汁反流性胃炎大鼠血清胃動素(MTL)、血管活性腸肽(VIP)及胃黏膜P物質(SP)含量變化。通過比色法檢測膽汁反流性胃炎大鼠胃黏膜一氧化氮(NO)含量變化。結果：納達合劑能夠顯著提高膽汁反流性大鼠胃黏膜SP及血清MTL含量(P<0.05)，能顯著降低膽汁反流性大鼠血清VIP及NO含量(P<0.05)。結論：納達合劑具有調節胃腸激素(SP、MTL、VIP、NO)的作用。

納達合劑；膽汁反流性胃炎；胃腸動力

膽汁反流性胃炎(Bile Reflux Gastritis，BRG)，是由于多種原因導致十二指腸胃反流(Duodenogastric Reflux，DGR)現象異常增多，引起胃黏膜損傷的一種疾病[1-2]。臨床上根據發病原因是否與胃腸術相關而分為繼發性和原發性膽汁反流性胃炎[3]。

十二指腸胃反流作為一種存在于機體內的常見生理現象，其發生及反流量與胃十二指腸動力異常以及幽門括約肌功能失常密切相關[4]。胃十二指腸動力異常主要表現在胃竇清除能力下降以及十二指腸逆蠕動的增加，當幽門括約肌存在自身缺陷或遭受內外源性刺激因素導致幽門括約肌功能異常，出現關閉不全情況時，十二指腸胃反流增加，其內容物與胃黏膜長時間接觸，最終導致胃黏膜損傷的發生，隨著病情的持續和進展，引起胃黏膜的慢性炎癥、糜爛，更有甚者可以進展為胃潰瘍[5-6]。

納達合劑方是我院余莉芳老中醫擬定經驗方，本方主要以北沙參、玉竹、麥冬、天花粉組方，功效為養陰清胃、降逆理氣，是治療慢性胃炎的常用方，廣泛應用于慢性胃炎患者，包括慢性淺表性胃炎、膽汁反流性胃炎、非潰瘍性消化不良等疾病。大量的臨床實踐證明具有良好的的作用，能夠明顯緩解慢性胃炎患者胃脹、胃痛、反酸、噯氣、燒心、嘈雜等癥狀。因此，為了進一步驗證納達合劑的療效并深入探討其作用機制，本研究通過正常小鼠、阿托品誘導的胃腸動力障礙模型小鼠以及膽汁反流性胃炎模型大鼠，觀察納達合劑對胃腸動力的調節作用。

1　材料與方法

1.1試劑納達合劑由上海市中醫醫院制劑科提供(滬藥制字Z05190757，批號：14061901)，嗎丁啉(西安楊森制藥有限公司)，牛膽酸鈉(上海源葉生物科技有限公司)，胰酶(國藥集團化學試劑有限公司)，卵磷脂(國藥集團化學試劑有限公司)，大鼠胃動素ELISA測定試劑盒、大鼠血管活性腸肽ELISA測定試劑盒、大鼠P物質ELISA測定試劑盒(上海西唐生物科技有限公司)、一氧化氮試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.2儀器Neofuge 15R型臺式高速冷凍離心機(Heal force公司)，Var10skan Flash熒光酶標儀(Thermo scientific公司)，Wellwash 4mk2型洗板機(Labsystems dragon公司)，JX-FSTPRP-48型電動勻漿機(上海凈信公司)。

1.3動物SD大鼠，清潔級，雄性，體重180～220 g，購自上海實驗動物中心。清潔級動物房飼養，恒溫(25±2)℃恒濕，人工光照12 h，黑暗12 h，自由進食飲水。

2　方法

2.1試劑及中藥合劑配制嗎丁啉的配制：將10 mg嗎丁啉碾磨成粉狀后，溶于10 mL生理鹽水中，配制成1 mg/mL的嗎丁啉混懸液用于灌胃，現用現配。反流液的配制：以牛膽酸鈉5 g，胰酶3 g，卵磷脂0.5 g溶于生理鹽水200 mL中，充分攪拌并混勻，用于大鼠灌胃，現用現配。納達合劑配制：納達合劑以臨床成人用量的5倍、10倍、15倍濃縮成低、中、高劑量用于灌胃，現用現配。

2.2BRG大鼠血清胃動素、血管活性腸肽，胃黏膜P物質、一氧化氮的測定膽汁反流性胃炎模型制備：根據大鼠體重將其隨機分為6組，10只每組，共60只，按下述方法給于灌胃：對照組：生理鹽水15 mL/kg(1～8周)+生理鹽水15 mL/kg(5～8周)；模型組：反流液15 mL/kg(1～8周)+生理鹽水15 mL/kg(5～8周)；納達低劑量組：反流液15 mL/kg(1～8周)+納達低劑量15 mL/kg(5～8周)；納達中劑量組：反流液15 mL/kg(1～8周)+納達中劑量15 mL/kg(5～8周)；納達高劑量組：反流液15 mL/kg(1～8周)+納達高劑量15 mL/kg(5～8周)；嗎丁啉組：反流液15 mL/kg(1～8周)+嗎丁啉10 mg/kg(5～8周)。

大鼠給藥完畢后，禁食不禁水24 h，烏拉坦腹腔麻醉后開腹，于腹主動脈采血并摘取全胃，用生理鹽水漂洗后濾紙吸干剩余血液，并沿胃大彎側將胃剪開，去除胃內容物后，做常規標本取材，按照試劑盒說明(大鼠胃動素、血管活性腸肽、一氧化氮、P物質檢測試劑盒)，用ELISA法測定大鼠血清中胃動素、血管活性腸肽，胃黏膜P物質；用比色法測定一氧化氮的含量。

3　結果

3.1納達合劑對BRG大鼠胃腸激素的影響胃腸激素是機體調節胃腸動力的另一種方式，因此，我們通過檢測膽汁反流性胃炎大鼠血清與胃黏膜中胃動素與P物質的含量，觀察納達合劑對胃腸激素的調節作用。結果顯示，模型組較之于對照組，大鼠胃動素與P物質顯著降低，差異有統計學意義(P<0.01)。納達合劑具有提高大鼠胃動素與P物質的作用，且呈劑量依賴性(P<0.01)。結果表明，納達合劑的促胃腸動力效應可能與調節體內胃動素與P物質水平密切相關。(表1)

表1　納達合劑對膽汁反流性胃炎大鼠血清胃動素、胃黏膜P物質的影響

注：**與對照組比較具有顯著差異(P<0.01)；##與模型組比較具有顯著差異(P<0.01)。

表2　納達合劑對膽汁反流性胃炎大鼠血清血管活性腸肽、一氧化氮的影響

注：**與對照組比較具有顯著差異(P<0.01)；##與模型組比較具有顯著差異(P<0.01)。

3.2納達合劑對BRG大鼠胃腸激素(VIP、NO)的影血管活性腸肽是一種重要的抑制性胃腸激素，而NO的產生可增強VIP的釋放。因此，我們通過檢測膽汁反流性胃炎大鼠血清與胃黏膜中VIP與NO的含量，觀察納達合劑對胃腸激素的調節作用。結果顯示，模型組較之于對照組，大鼠VIP與NO顯著升高，差異有統計學意義(P<0.01)。納達合劑具有降低大鼠VIP與NO的作用，且呈劑量依賴性(P<0.01)。結果表明，納達合劑的促胃腸動力效應可能與降低大鼠VIP與NO水平密切相關。(表2)

4　討論

膽汁反流性胃炎是由于十二指腸內容物反流至胃，且未得到立即清除，造成胃黏膜損傷、炎性反應發生的一種疾病。因此，十二指腸逆行蠕動的增加、幽門功能下降，胃竇清除能力降低都提高了膽汁反流的可能性[7-8]。另外，胃排空延遲增加了膽汁與胃黏膜的接觸時間，從而引起BRG的發生。

胃腸激素是機體調節胃腸動力的另一種方式。而MTL、P物質、VIP作為重要的胃腸道激素，其作用于胃腸組織，其通過相互影響及協同作用，從而完成胃腸道分泌及運動功能[9]。

胃動素的產生與小腸黏膜隱窩以及絨毛中的Mo細胞周期性分泌作用有關[10]，其具有推動消化道運動的作用[11]。MTL通過結合胃動素受體，使胃腸平滑肌收縮加強，從而加速胃內容物的排空，而且可以縮短食物在小腸內的停留時間。MTL促使胃腸發生MMC Ⅲ相活動，加速胃的排空，使消化道內殘留物、病菌以及組織碎片等被排除，此作用即所謂的“清道夫”效應。

P物質是一種神經肽，其廣泛分布于神經纖維內，屬于速激肽家族，主要具有收縮胃腸道平滑肌，促進胃腸運動的作用。外周P物質存在于整個消化道中，主要由黏膜下神經叢以及肌間神經叢釋放，通過兩種不同的機制促進消化道平滑肌收縮。其一，P物質和消化道平滑肌質膜上的P物質受體相結合后升高胞質中第二信使cAMP的水平，使胃腸道收縮。其二，P物質通過擬膽堿樣作用，促使平滑肌收縮。

血管活性腸肽是神經遞質的一種，主要存在于中樞神經和腸神經系統中，其具有抑制胃蠕動和胃酸分泌、促進胰島素分泌等作用。在胃腸道中，VIP主要以神經遞質的方式發揮局部作用，它通過促進靶細胞合成NO而使胃腸平滑肌和胃腸括約肌舒張，從而維持正常的胃腸下行蠕動；并且其能促進分泌和吸收功能，可促進腸道水及電解質的分泌[12]，刺激胰液以及小腸液的產生。

一氧化氮在胃腸平滑肌中是ATP、VIP等公認NANC神經遞質引起松弛的最終遞質[13]。NO的產生可增加VIP的釋放，而NO的釋放又是通過VIP的作用實現的，兩者協同促使胃腸平滑肌和胃腸括約肌的舒張[14]。

當前，西醫學治療BRG的常用藥物[15-16]有質子泵抑制劑、H2受體拮抗劑、促動力藥、胃黏膜保護劑等。臨床上，應用以上這幾類藥物，可以在一定程度上緩解癥狀，但療效單一，往往需要配合使用，增加了出現藥物毒副作用的可能性。而中醫藥在治療BRG上具有其特有的優勢及療效。

膽汁反流性胃炎本病歸屬于中醫學之“胃脘痛”“嘈雜”“嘔吐”“膽癉”等范疇。本病病因主要與外感邪氣、飲食失調、七情失和、久病體虛等因素有關，氣機不利、胃失和降是發病的基本病機。納達合劑其主要成分為：北沙參，麥冬，黃連，天花粉，黃芩，元胡，甘草，制半夏，廣木香，玉竹，海螵蛸，枳殼，蒲公英，芙蓉葉，代赭石等。本方功效為養陰清胃、降逆理氣，是治療慢性胃炎的常用方，廣泛應用于慢性胃炎患者，包括慢性淺表性胃炎、膽汁反流性胃炎、非潰瘍性消化不良等疾病。本科室自1993年起對該方進行臨床研究發現納達合劑治療非潰瘍性消化不良62例總有效率達到95.2%，并且發現加味納達合劑對膽汁反流性胃炎合并黃疸亦具有良好的臨床療效[17-18]。因此，本實驗通過檢測BRG大鼠血清胃動素、血管活性腸肽，胃黏膜P物質及一氧化氮含量變化。進一步探討納達合劑的促胃腸動力機制。實驗結果研究發現，納達合劑能夠顯著提高BRG大鼠血清胃動素及胃黏膜P物質含量，且能夠顯著降低膽汁反流性大鼠血清VIP及NO含量。

綜上所述，納達合劑具有調節胃腸激素分泌，促進胃腸動力的作用。這為臨床上納達合劑治療BRG提供了現代藥效學基礎，為我們進一步擴大納達合劑臨床適應癥、加速納達合劑的臨床推廣提供了實驗依據，為現代中藥復方的發展提供了技術方法學的支撐。

[1]Nakamura M,Haruma K,Kamada T,et al.Duodenogastric reflux isassociated with antral metaplastic gastritis[J].Gastrointest Endosc,2001,53(1):53-59.

[2]Chan DC,FanYM,Lin CK,et al.Rouxen-Y reconstruction after distalgastrectomy to reduceenterogastricrefluxand Helicobacterpy-loriinfection[J].JGastrointestSurg,2007,11(12):1732-1740.

[3]Girelli CM,Cuvello P,Limido E,et al.Duodenogastric reflux:an update[J].Am J Gastroenterol,1996,91(4):648-653.

[4]Dai F，Gong J，Zhang R，et al.Assessment of duodenogastric reflux by combined continuous intragastric pH and bilirubin monitoring[J].World J Gastroenterol,2002,8(2):382-384.

[5]Maev IV，Samsonov AA，Vorobev LP，et al.Motorand secretion function of stomach and duodenum，duodenogastricrefluxin patients with duodenal ulcer[J].Klin Med(Mosk),2000,78(6):39-42.

[6]Mason RJ,DeMeester TR.Importance of duodenogastric reflux in the surgical outpa-tientpractice[J].Hepatogastroenterology,1999,46(25):48-53.

[7]杜立峰,展淑琴,郭新奎.P物質、血管活性腸肽與異常胃腸通過的關系[J].西安交通大學學報：醫學版,2003,24(4):363-364.

[8]楊名友,陳幼祥,謝勇,等.胃腸動力學與胃腸激素關系的研究進展[J].實用臨床醫學,2005,6(4):140-142.

[9]Camilleri M.Review article：tegaserod[J].Alimentary Pharmacology&Therapeutics,2001,15(3):277-289.

[10]Polak JM,Pearse AG,Heath CM.Complete identification of endocrine cells in the gastrointestinal tract using semithin-thin sections to identify motilin cells in human and animal intestine[J].Gut 1975，16(3):225-229.

[11]譚康聯,陳志強.胃動素用于胃腸功能評價的研究進展[J].世界華人消化雜志,2011(2):156-160.

[12]Evangelisla S.Involvement of tachykinins in intestinal inflammation[J].Cure Phanll Des,2001,7(1)：19-30.

[13]張經濟,連至誠,許冠蓀,等.消化道生理及病理生理學——基礎與臨床[M].廣州:廣東科技出版社,1997:50-56.

[14]馬淑穎,朱生梁,程艷梅,等.疏肝和胃方對混合反流性食管炎大鼠一氧化氮合酶和血管活性腸肽的影響[J].山西中醫,2006,22(1):48-50.

[15]張萬岱,曾錦章.膽汁反流性胃炎的病因病機和診治進展[J].現代消化及介入診療,2004,9(1):31-34.

[16]童桂法.膽汁反流性胃炎的診斷與治療探討[J].浙江臨床醫學,2002,4(1):27-27.

[17]余莉芳.納達合劑治療非潰瘍性消化不良62例臨床觀察[J].中國中西醫結合消化雜志,1995,3(2):92-93.

[18]劉晏,吳堅炯,李瓊,等.加味納達合劑治療膽汁反流性胃炎合并黃疸的臨床觀察[J].中成藥,2012,34(12)：2462-2464.

(2015-10-09收稿責任編輯：張文婷)

Effects of Nada Mixture on Rat's Gastrointestinal Motility

Qian Chunmei1，Shen Yanting2，Que Renye2，Lin Liubing2，Tao Zhihui2，Li Yong2

(1 Department of Central Laboratory，Shanghai Municipal Hospital of Traditional Chinese Medicine Affiliated to Shanghai UniversityofTraditionalChineseMedicine，Shanghai200071，China； 2DepartmentofGastroenterology，ShanghaiMunicipalHospitalofTraditionalChineseMedicineAffiliatedtoShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Shanghai200071，China； 3DepartmentofOncology,JiadingHospitalofTraditionalChineseMedicine,Shanghai201800，China)

Objective:To observe the regulative effect of Nada Mixture on gastrointestinal motility of bile reflux gastritis(BRG) rats.Methods:SD rats were randomly divided into control group, model group, low-dose Nada Mixture group, middle-dose Nada Mixture group, high-dose Nada Mixture group and Domperidone group. Each group has 10 rats. ELISA was used to detect SP content in gastric mucosa tissue and MTL, VIP in serum. Colorimetry was used to detect NO's content in gastric mucosa tissue.Results:Nada Mixture significantly increased the content of SP in gastric mucosa tissue and MTL in serum of BRG rats. And it significantly decreased the content of NO in gastric mucosa tissue and VIP in serum of BRG rats.Conclusion:Nada Mixture has the effect of regulating gastrointestinal hormones (SP, MTL, VIP, NO).

Nada Mixture; Bile reflux gastritis; Gastrointestinal motility

上海市衛生局資助項目(編號：2011ZJ006)；第二批上海市衛生系統優秀學科帶頭人和優秀青年人才培養計劃基金資助項目(編號：滬衛計委科教[2013]9號-50)

錢春美(1988—)，女，碩士，中藥師，研究方向：中藥新藥開發，E-mail：qcm_work@126.com

李勇(1968—)，男，博士，主任醫師，研究方向：消化疾病的臨床與基礎研究，E-mail：liyong8256@126.com

R285.5

A doi：10.3969/j.issn.1673-7202.2016.01.031