西洋參三七黃芪膠囊提取工藝研究*

王賢英，王鈞，謝香菊，李勝容

（重慶市中藥研究院，重慶400065）

西洋參三七黃芪膠囊提取工藝研究*

王賢英，王鈞，謝香菊，李勝容

（重慶市中藥研究院，重慶400065）

目的優(yōu)選西洋參三七黃芪膠囊中黃芪的提取工藝。方法采用L9（34）正交設(shè)計試驗(yàn)法，分別以黃芪多糖的含量和浸膏得率為指標(biāo)，優(yōu)選黃芪的提取工藝。結(jié)果黃芪的最佳提取工藝為以水為提取溶劑，加10倍藥材量溶劑，加熱回流提取2次，每次1.5 h。結(jié)論該正交試驗(yàn)為確定西洋參三七黃芪膠囊中黃芪的提取工藝提供了試驗(yàn)依據(jù)。

西洋參三七黃芪膠囊；提取工藝；黃芪多糖

黃芪為豆科植物膜夾黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）或蒙古黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.var.mongho-licus（Bge.）Hsiao的干燥根。黃芪味甘，性溫，入脾、肺經(jīng)，具有補(bǔ)中益氣、升陽固表、托毒生肌、利水退腫之功效，主要化學(xué)成分為多糖、皂苷、黃酮、多種氨基酸及微量元素［1-3］。黃芪多糖是黃芪的有效成分之一，是從黃芪根中得到的一類大分子活性物質(zhì)。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明［4-6］，其具有抗過氧化、增強(qiáng)免疫功能、改善心血管功能、抗菌抗病毒和抗腫瘤、預(yù)防衰老及抗輻射、雙向調(diào)節(jié)血糖等作用，能增加機(jī)體的非特異性抵抗能力，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，在保健品中常用作免疫增強(qiáng)劑（如本研究中所用三七黃芪膠囊即為增強(qiáng)免疫功能的制劑）。故對黃芪的提取過程進(jìn)行控制與優(yōu)化非常重要。筆者參照文獻(xiàn)［7-15］，采用傳統(tǒng)的水煎煮提取方式，選取影響水煎煮提取的主要因素，即加水量、提取時間、提取次數(shù)3個因素，各取3個水平進(jìn)行L9（34）正交試驗(yàn)，以主要藥效物質(zhì)黃芪多糖的含量為指標(biāo)，對黃芪的水提取過程工藝條件進(jìn)行研究，以期找到最佳條件。現(xiàn)報道如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器

SK250LH型超聲波清洗儀（上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司）；KW型恒溫水浴鍋（上海必爾得實(shí)業(yè)有限公司）；AB265-S型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）；UV-2006型紫外-可見分光光度計（日本島津儀器有限公司）；LIM-40型低速大容量離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠）。

1.2試藥

黃芪（四川皓博藥業(yè)有限公司，批號為20151101），經(jīng)重慶市中藥研究院中藥生藥研究所舒抒（副高）鑒定，為黃芪的干燥根。葡萄糖對照品（廣東光華科技股份有限公司，批號為20150505）；濃硫酸、苯酚、丙酮、乙醚、無水乙醇等均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1黃芪多糖的含量測定［16-20］

2.1.1溶液制備

稱取苯酚結(jié)晶5.0 g，置100 mL容量瓶中，加水溶解并用水稀釋至刻度，搖勻，避光保存，得5%苯酚溶液。精密稱取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖10 mg，置100 mL容量瓶中，加水溶解并用水稀至刻度，搖勻，備用，即得對照品溶液。

2.1.2方法學(xué)考察

吸收光譜的繪制：取葡萄糖對照品溶液2.0 mL，用苯酚-硫酸法顯色，以試劑空白為參比，在200～600 nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果見圖1。可見，葡萄糖于490 nm波長處有最大吸收峰，故選擇測定波長為490 nm。

線性關(guān)系考察：精密吸取對照品溶液0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00 mL，置10 mL容量瓶中，分別加水1.5 mL，再加5%苯酚溶液1.0 mL，搖勻，加濃硫酸5.0 mL，搖勻，置沸水浴中加熱5 min，取出，自然冷卻放置25 min，加水稀釋至刻度，搖勻。以“0 mL”具塞刻度試管中的溶液為空白，于490 nm波長處測定吸光度，以吸光度（Y）為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=0.017 46 X+0.022 53（r=0.999 5）。結(jié)果顯示，葡萄糖進(jìn)樣量在2.01～10.05 μg范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取葡萄糖對照品溶液6份，依法顯色后測定吸光度。結(jié)果的RSD為1.15%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：對同一批黃芪多糖樣品獨(dú)立測定吸光度6次。結(jié)果的RSD為2.95%（n=6），表明方法重復(fù)性好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取黃芪多糖樣品溶液2 mL，依法顯色后放置，分別在0，15，30，45，60 min測定吸光度。結(jié)果的RSD為2.62%（n=5），表明供試品溶液在顯色后1 h內(nèi)穩(wěn)定。

圖1　吸收光譜圖

加樣回收試驗(yàn)：取6份已知含量的黃芪浸膏粉約1 g，精密稱定，精密加入適量葡萄糖對照品，依法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液2 mL置10 mL容量瓶中，依法測定吸光度，結(jié)果見表1。

表1　黃芪多糖加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.2正交試驗(yàn)設(shè)計

2.2.1正交試驗(yàn)因素水平考察

根據(jù)黃芪多糖理化性質(zhì)和預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，確定加水量（因素A）、提取時間（因素B）、提取次數(shù)（因素C）作為考察因素，以多糖測得值為評價指標(biāo)，根據(jù)因素水平表，不考慮因素間的交互作用，應(yīng)用L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計進(jìn)行試驗(yàn)，確定最佳工藝。詳見表2。

表2　正交試驗(yàn)因素水平表

2.2.2正交試驗(yàn)考察提取工藝

取本品約1 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加水80 mL，超聲30 min，再用水定容至100 mL，搖勻，放置。精密吸取樣品上清液2 mL，置15 mL離心管中，加無水乙醇10 mL，搖勻放置2 h。置離心機(jī)以3 000 r/min的速率離心20 min。棄去上清液，沉淀物用水溶解并洗入25 mL容量瓶中定容至刻度，作為供試品溶液。精密量取樣品溶液0.5 mL置10 mL容量瓶中，加水1.5 mL，加5%苯酚溶液1.0 mL、硫酸5.0 mL，在沸水浴中加熱5 min，取出，自然冷卻放置25 min，加水稀釋至刻度，搖勻，依法測定吸光度，計算樣品中多糖的含量。稱取藥材，共9份，各100 g，按正交試驗(yàn)表進(jìn)行試驗(yàn)，以每100 g樣品中黃芪多糖測得值為考察指標(biāo)。結(jié)果見表3。

表3　正交試驗(yàn)結(jié)果

2.2.3方差分析

以黃芪多糖測得值為評價指標(biāo)，在考察的影響因素中，重要性依次為A＞B＞C。A因素中A2＞A3＞A1，B因素中B2＞B3＞B1，C因素中C2＞C1＞C3。因此，確定黃芪最佳提取工藝為A2B2C2，即加10倍量水，提取2次，每次提取1.5 h。方差分析見表4。

表4　方差分析結(jié)果

2.3驗(yàn)證試驗(yàn)

按優(yōu)化的工藝條件A2B2C2提取3批樣品，測定黃芪多糖含量。結(jié)果黃芪多糖平均含量為49.15 g/100 g，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果與正交試驗(yàn)基本一致，從而證明這一工藝條件合理可行。

3　討論

3.1提取溶劑選擇

曾選用50%乙醇、80%乙醇、水作為提取溶劑，乙醇與水提取黃芪多糖的含量相比，差異不明顯。考慮到大生產(chǎn)的經(jīng)濟(jì)性與安全性，故選用水作為提取溶劑。

3.2提取單因素試驗(yàn)

采用加水量、提取次數(shù)、提取時間等單因素水提的考察試驗(yàn)，是為了更好地確定各因素的最佳提取條件，為正交設(shè)計試驗(yàn)提供合理的因素范圍，避免提取最佳條件產(chǎn)生誤差。

3.3正交設(shè)計試驗(yàn)

采用正交試驗(yàn)考察加水量、提取次數(shù)、提取時間等提取工藝，采用苯酚-硫酸法考察對黃芪多糖含量的影響并優(yōu)選提取工藝。根據(jù)提取次數(shù)考察結(jié)果，前2次提取中已把黃芪多糖提取完全，故提取次數(shù)確定為2次。由直觀分析和方差分析可見，以黃芪多糖測得值為評價指標(biāo)，主要因素依次為加水量、提取次數(shù)、提取時間，最佳工藝為A2B2C2，即加10倍量水，提取2次，每次提取1.5 h。由驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果可知，該方法工藝合理，穩(wěn)定可行，可用于黃芪中多糖的提取并用于工業(yè)化生產(chǎn)。

3.4苯酚-硫酸法

多糖在濃硫酸作用下，脫水生成的糠醛衍生物能與苯酚縮合成一種橙紅色化合物，該化合物在10～100 mg范圍內(nèi)其顏色深淺與糖的含量成正比，且于490 nm波長處有最大吸收，故可用比色法在此波長下測定。主要用于甲基化的糖、戊糖、多聚糖的測定，方法簡便，試劑便宜，靈敏度高，試驗(yàn)結(jié)果基本不受蛋白質(zhì)的影響，且產(chǎn)生顏色可穩(wěn)定160 min以上。

關(guān)于黃芪多糖提取工藝的文獻(xiàn)較多，有報道用堿水提取，但對多糖的一級結(jié)構(gòu)是否有影響尚待研究。有報道用超濾法、微波技術(shù)提取，提取效率均較高，但不利于工業(yè)化大生產(chǎn)。本試驗(yàn)對水提法提取黃芪多糖進(jìn)行了系統(tǒng)研究，結(jié)果可有效降低生產(chǎn)成本，提高效率。

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Study on Extraction Technology of Xiyangshen Sanqi Huangqi Capsules

Wang Xianying，Wang Jun，Xie Xiangju，Li Shengrong
（Chongqing Academy of Chinese Medicine，Chongqing，China400065）

ObjectiveTodeterminetheextractiontechnologyofastragalusmembranaceusinXiyangshenSanqiHuangqiCapsules.M ethodsWith the astragalus polysaccharide content and the extraction rate as the indexes，theL9（34）orthogonal design test method was adopted to optimize the extraction technology for astragalus membranaceus.ResultsThe optimum extraction technology of astragalus membranaceus was as follows，water as solvent，conducting percolation with 10 times amounts of medicinal materials volume，extracted twice and each time lasted 1.5 h.ConclusionThe test results provide the experimental basis for determining the extraction process of astragalus membranaceus in Xiyangshen Sanqi Huangqi Capsules.

Xiyangshen Sanqi Huangqi Capsules；extraction technology；astragalus polysaccharide

TQ461；R284．1

A

1006－4931（2016）14－0023－03

王賢英（1973-），女，大學(xué)本科，副主任中藥師，研究方向?yàn)樗幤烽_發(fā)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，（電子信箱）wangxianying_315@163.com；李勝容（1964-），女，大學(xué)本科，主任中藥師，研究方向?yàn)樗幤烽_發(fā)及工藝，本文通訊作者，（電話）023-89029162。

2016－02－06；

2016－03－25）

*重慶市科技計劃項(xiàng)目，項(xiàng)目編號：cstc2013yykfA0239。