反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定正胃膠囊中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量

張治軍，曾友保，覃曉

（廣西壯族自治區(qū)桂林食品藥品檢驗(yàn)所，廣西桂林541002）

反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定正胃膠囊中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量

張治軍，曾友保，覃曉

（廣西壯族自治區(qū)桂林食品藥品檢驗(yàn)所，廣西桂林541002）

目的建立測(cè)定正胃膠囊中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量的反相高效液相色譜（RP-HPLC）法。方法色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5*m），流動(dòng)相為乙腈-水（65∶35），流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為225 nm。結(jié)果木香烴內(nèi)酯質(zhì)量濃度在24.78～198.24*g/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r=0.999 8，平均回收率為98.67%，RSD為1.33%（n=6）；去氫木香內(nèi)酯質(zhì)量濃度在5.06～40.48*g/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，r=0.999 8，平均回收率為97.07%，RSD為1.07%（n=6）。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為控制和評(píng)價(jià)正胃膠囊質(zhì)量的方法。

正胃膠囊；木香烴內(nèi)酯；去氫木香內(nèi)酯；反相高效液相色譜法；含量測(cè)定

正胃膠囊為常見(jiàn)胃藥，由猴耳環(huán)、木香、七葉蓮、陳皮、甘草、次硝酸鉍、氧化鎂、氫氧化鋁組方，收載于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局藥品標(biāo)準(zhǔn)，具有清熱涼血、健脾和胃、制酸止痛功效，主要用于胃中灼熱、脘腹脹痛、胃炎等的治療［1］。其中，木香具有健脾消食、行氣止痛的功效，主要成分有木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯［2-3］。為了更全面地控制、評(píng)價(jià)該制劑的質(zhì)量，本研究中建立了同時(shí)測(cè)定正胃膠囊中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量的反相高效液相色譜（RP-HPLC）法，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，其操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于控制和評(píng)價(jià)正胃膠囊的質(zhì)量。

1　儀器與試藥

島津LC-2010AHT型高效液相色譜儀，紫外檢測(cè)器（日本島津公司）。對(duì)照品木香烴內(nèi)酯（批號(hào)為111524-200503）和去氫木香內(nèi)酯（批號(hào)為110525-201008）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；正胃膠囊（批號(hào)分別為140801，140305，131101）為市售品；甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1溶液制備

混合對(duì)照品溶液：精密稱(chēng)取氫木香內(nèi)酯20.26 mg，置100 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解稀釋成質(zhì)量濃度為0.202 6 mg/mL的溶液；精密稱(chēng)取木香烴內(nèi)酯對(duì)照品24.78 mg，置100 mL棕色容量瓶中，加上述去氫木香內(nèi)酯對(duì)照品溶液25 mL，溶解稀釋至刻度，制成每1 mL分別含木香烴內(nèi)酯0.247 8 mg、去氫木香內(nèi)酯0.050 6 mg的混合對(duì)照品貯備液。取上述對(duì)照品貯備液4 mL，稀釋至10 mL，作為混合對(duì)照品溶液。

供試品溶液：取正胃膠囊（批號(hào)為140305）20粒，倒出內(nèi)容物，將其研細(xì)混勻。稱(chēng)取約2 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲提取（功率400 W，頻率60 kHz）30 min，放冷，稱(chēng)定，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，濾過(guò)，棄去初濾液約10 mL，取續(xù)濾液25 mL，水浴中揮干至約5 mL，置中性氧化鋁柱（50～200目，6 g）上，用甲醇50 mL洗脫，水浴中蒸干后用適量甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL棕色容量瓶中，定容，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過(guò)，即得。

陰性對(duì)照品溶液：按正胃膠囊的處方比例和工藝制備不含木香的陰性樣品，稱(chēng)取陰性樣品約2 g，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.2色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（65∶35）；流速：1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：225 nm。在此色譜條件下，分別取混合對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，色譜圖見(jiàn)圖1。

2.3方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別精密量取上述混合對(duì)照品貯備液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋成每1 mL含木香烴內(nèi)酯分別為24.78，49.56，99.12，148.71，198.24 μg，含去氫木香內(nèi)酯分別為5.06，10.12，20.24，30.36，40.48 μg的混合對(duì)照品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯的回歸方程分別為Y=3.75×104X+ 6.94×103，r=0.999 8；Y=4.23×104X+1.17×104，r=0.999 8。結(jié)果，木香烴內(nèi)酯質(zhì)量濃度在24.78～198.24 μg/mL范圍內(nèi)，去氫木香內(nèi)酯質(zhì)量濃度在5.06～40.48 μg/mL范圍內(nèi)分別與各自峰面積線性關(guān)系良好。

圖1　高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn)：精密量取木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的混合對(duì)照品溶液10 μL，在擬訂色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定。結(jié)果木香烴內(nèi)酯色譜峰面積平均為118787.2，RSD為0.46%（n=5），去氫木香內(nèi)酯色譜峰面積平均為300 172.4，RSD為0.54%（n=5），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為140801）樣品6份，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果木香烴內(nèi)酯及去氫木香內(nèi)酯的平均含量分別為0.974 5 mg/g和0.194 3 mg/g，RSD分別為1.37%和1.54%（n=6），表明該方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱(chēng)取已知含量的正胃膠囊（批號(hào)為140801）內(nèi)容物1 g，6份，分別精密加入混合對(duì)照品貯備溶液3，4，5 mL，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于0，1，2，4，12，18，24 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果木香烴內(nèi)酯、去氫木香內(nèi)酯峰面積的RSD分別為1.46%和1.13%（n=7），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

表1　加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4樣品含量測(cè)定

按2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液和混合對(duì)照品溶液，分別精密吸取各10 μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　樣品含量測(cè)定結(jié)果（mg/g）

3　討論

本研究中參照文獻(xiàn)［4-13］，曾采用超聲波提取法與加熱回流提取法分別提取0.5，1.0，2.0 h，結(jié)果2種提取方法測(cè)定木香內(nèi)酯2種成分的實(shí)際峰面積相近，表明提取效率基本相同。但采用加熱回流提取雜質(zhì)較多，同時(shí)考慮試驗(yàn)操作的簡(jiǎn)便性，故選用超聲提取法。在提取時(shí)間上，試驗(yàn)結(jié)果表明，0.5 h基本已提取完全。

由于樣品組方為中西藥配比，成分較復(fù)雜，在實(shí)際提取中雜質(zhì)較多，導(dǎo)致液相色譜下木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯基線分離不太理想，難以達(dá)到準(zhǔn)確定量，故本研究中參照文獻(xiàn)［14-15］，提取液采用中性氧化鋁柱凈化后再進(jìn)樣，試驗(yàn)結(jié)果較理想。

木香在正胃膠囊處方中為臣藥，用量較大，其主要成分木香內(nèi)酯具有行氣止痛、健脾消食功效，在整個(gè)制劑功效中起主要作用。但原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有次硝酸鉍、氫氧化鋁和甘草的定量控制，本研究中建立的木香含量測(cè)定方法操作簡(jiǎn)便，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可為更全面控制和評(píng)價(jià)正胃膠囊的質(zhì)量提供技術(shù)研究基礎(chǔ)。

［1］YBZ10432009，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥品標(biāo)準(zhǔn)［S］.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：57-58.

［3］王緒穎，賈曉斌，陳彥.木香類(lèi)藥材的研究進(jìn)展［J］.中藥材，2010，33（1）：153-157.

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［5］何洋，孫悅，黃娟萍，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定加味香連丸中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量［J］.藥物分析雜志，2011，31（2）：222-224.

［6］黃瀾，黃麗.RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定保濟(jì)丸中厚樸酚、和厚樸酚、木香烴內(nèi)酯及去氫木香內(nèi)酯的含量［J］.藥物分析雜志，2012，32（3）：396-399.

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［8］張松亮，顧騰飛，于天杰.HPLC法同時(shí)測(cè)定木香健胃顆粒中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯含量［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2014，30（1）：63-65.

［9］裴貴珍，郭鑫，張雪峰，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定六味能消膠囊中木香烴內(nèi)酯、去氫木香烴內(nèi)酯大黃素、大黃酚的含量［J］.藥物分析雜志，2015，35（2）：241-245.

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Content Determination of Costunolide and Dehydrocostuslactone in Zhengwei Capsules by RP-HPLC

Zhang Zhijun，Zeng Youbao，Qin Xiao
（Guilin Institute for Food and Drug Control，Guilin，Guangxi，China541002）

ObjectiveTo establish a RP-HPLC method for the content determination of costunolide and dehydrocostuslactone in Zhengwei Capsules.MethodsThe HPLC system consisted of the Agilent ZORBAX SB-C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）and acetonitrile-water（65∶35）as the mobile phase，the flow rate was 1.0 mL/min and the detectivewavelength was 225 nm.ResultsCostunlide showed a good linear relationship in the range of 24.78-198.24 μg/mL，r=0.999 8，the average recovery was 98.67%and RSD was 1.33%（n=6）.Dehydrocostuslactone showed a good linear relationship at the range of 5.06-40.48 μg/mL，r=0.999 8，the average recovery was 97.07%andRSD was 1.07%（n=6）.ConclusionThe method is sensitive，simple，accurate and repeatable.It can be used for the quality control of Zhengwei Capsules.

Zhengwei Capsules；costunolide；dehydrocostuslactone；RP-HPLC；content determination

R284．1；R286．0

A

1006－4931（2016）14－0078－03

張治軍（1971-），男，碩士研究生，副主任藥師，研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量檢驗(yàn)與控制，（電子信箱）770013802@qq.com。

2015－10－14；

2016－03－28）