神經(jīng)纖毛蛋白1和C-MET在不同臨床病理特征的非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)特點(diǎn)及其對(duì)腫瘤血管生長(zhǎng)的關(guān)系

楊麗

(宜賓市第一人民醫(yī)院血液腫瘤科，四川 宜賓　644000)

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神經(jīng)纖毛蛋白1和C-MET在不同臨床病理特征的非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)特點(diǎn)及其對(duì)腫瘤血管生長(zhǎng)的關(guān)系

楊麗

(宜賓市第一人民醫(yī)院血液腫瘤科，四川 宜賓644000)

目的探討神經(jīng)纖毛蛋白1(NRP1)和C-MET在不同臨床病理特征的非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)特點(diǎn)及其對(duì)腫瘤血管生長(zhǎng)的關(guān)系。方法選取107例肺癌患者和79例正常患者的蠟塊組織，分為觀察組和對(duì)照組，通過(guò)免疫組化技術(shù)檢測(cè)所有組織中的NRP1、C-MET的陽(yáng)性表達(dá)率和MVD值，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)兩組值進(jìn)行對(duì)比并比較觀察組的不同臨床癥狀與的NRP1、C-MET的陽(yáng)性表達(dá)率和MVD值的相關(guān)性。結(jié)果觀察組的NRP1、C-MET的表達(dá)和MVD值明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。NPR1、C-MET陽(yáng)性率，MVD值與腫瘤的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、胸膜侵犯、Ki67表達(dá)、脈管浸潤(rùn)有明顯相關(guān)性(P<0.05)。NRP1的陽(yáng)性率與C-MET的陽(yáng)性率存在正相關(guān)性(r=0.485，P<0.001),NRP1的陽(yáng)性率與MVD值存在正相關(guān)性(r=0.447，P<0.001),C-MET的陽(yáng)性率與MVD值存在正相關(guān)性(r=0.493，P<0.001)。結(jié)論NRP1和C-MET在非小細(xì)胞肺癌中存在高表達(dá)，二者均可促進(jìn)腫瘤血管的生成，同時(shí)還存在一定的正向協(xié)同作用。

癌,非小細(xì)胞肺;神經(jīng)纖毛蛋白質(zhì)1;蛋白酪氨酸激酶類;新生血管化,病理性

肺癌是一種臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤，起源于支氣管粘膜或腺體，在我國(guó)的發(fā)病率呈逐年增長(zhǎng)的趨勢(shì)[1]。而其中的非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)因其占肺癌總數(shù)的80%[2]，成為臨床上最常見(jiàn)的腫瘤。非小細(xì)胞肺癌有進(jìn)展迅速，易發(fā)生脈管轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)，而這些特點(diǎn)與腫瘤血管生成的關(guān)系十分密切。神經(jīng)纖毛蛋白1(NRP1)是一種與血管內(nèi)皮細(xì)胞新生有關(guān)的受體，位于內(nèi)皮細(xì)胞表面，能夠與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子結(jié)合[3-4]。C-MET相關(guān)蛋白產(chǎn)物可以與肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)結(jié)合而發(fā)揮一系列生物學(xué)作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的存活、增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移[5-6]。CD34對(duì)血管標(biāo)記的敏感性和特異性非常強(qiáng)，而且具有能夠標(biāo)記腫瘤中的新生血管的特性，使其成為了常用的血管標(biāo)志物。本研究通過(guò)免疫組化技術(shù)，通過(guò)檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌腫瘤組織中的NRPI和C-MET的表達(dá)情況，探討二者的表達(dá)特點(diǎn)和與腫瘤血管新生的關(guān)系。

1　資料及方法

1.1臨床資料選取107例從2015年4月至2015年11月于宜賓市第一人民醫(yī)院就診后經(jīng)病理診斷確診為非小細(xì)胞肺癌并符合非小細(xì)胞肺癌世界衛(wèi)生組織(WTO)中的診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者，對(duì)這些患者不進(jìn)行任何放、化療，直接進(jìn)行手術(shù)切除，并留取蠟塊組織作為觀察組，選取79例在同一時(shí)間于我院就診的且經(jīng)病理診斷為正常的患者的肺部蠟塊組織作為對(duì)照組。其中觀察組共107例，男58例，女49例，年齡50～78歲，平均62.34歲，其中鱗狀細(xì)胞癌56例，腺癌51例。對(duì)照組共79例，男44例，女35例，年齡49～79歲，平均61.93歲。兩組患者的一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究患者均知情同意，并經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2檢測(cè)方法對(duì)所有的實(shí)驗(yàn)標(biāo)本經(jīng)甲醛固定后，進(jìn)行石蠟包埋切片。在正式實(shí)驗(yàn)前先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，先稀釋不同的比例取得結(jié)果，再選擇染色效果最佳的稀釋比例進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。染色劑使用DAB，采用免疫組化SP法對(duì)CD34、NRP1和C-MET進(jìn)行檢測(cè)。同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。所有的操作均有同一個(gè)人完成，所有試劑統(tǒng)一購(gòu)買，為同一廠家同一批次，以減少誤差。

1.3觀察指標(biāo)判定血管密度時(shí)采用微血管密度(MVD)，具體方法：當(dāng)發(fā)現(xiàn)CD34染色陽(yáng)性的連續(xù)細(xì)胞分枝或細(xì)胞叢時(shí)，則可認(rèn)為是血管或新生血管。在10×10倍數(shù)的顯微鏡下找到10個(gè)血管密度最高的區(qū)域，改為40×10倍鏡，計(jì)數(shù)每一個(gè)視野中血管的數(shù)量，求得每個(gè)視野中血管的平均數(shù)量即為MVD值。NRP1或C-MET蛋白表達(dá)陽(yáng)性的細(xì)胞在染色后為棕黃色顆粒，在10×10倍數(shù)顯微鏡下找到腫瘤最密集的區(qū)域，改為40×10倍鏡，計(jì)數(shù)整個(gè)視野中所有的腫瘤數(shù)和染色陽(yáng)性的腫瘤數(shù)，并計(jì)算該視野下的陽(yáng)性率，計(jì)算10個(gè)視野后取平均值。陽(yáng)性率≥25%時(shí)記為陽(yáng)性，陽(yáng)性率<25%則記為陰性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS20.0軟件對(duì)采集的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，比較相關(guān)性采用線性相關(guān)分析，當(dāng)P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組患者NRP1、C-MET陽(yáng)性表達(dá)率和MVD值比較見(jiàn)表1，觀察組NPE1表達(dá)陽(yáng)性者共65例，對(duì)照組NPR1表達(dá)陽(yáng)性者共17例，觀察組的NPR1陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)；觀察組C-MET表達(dá)陽(yáng)性者共82例，對(duì)照組C-MET表達(dá)陽(yáng)性者共11例，觀察組的C-MET陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)；觀察組MVD值為40.29±8.68，對(duì)照組MVD值為24.53±4.32，觀察組的MVD值明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。2.2觀察組患者不同臨床癥狀下NPR1、C-MET陽(yáng)性率、MVD值比較見(jiàn)表2，NPR1陽(yáng)性率、C-MET陽(yáng)性率、MVD值與腫瘤的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、胸膜侵犯、Ki67表達(dá)、脈管浸潤(rùn)有明顯相關(guān)性(P<0.05)。隨著腫瘤細(xì)胞分化程度的降低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生、胸膜侵犯的發(fā)生、Ki67表達(dá)的增加、脈管浸潤(rùn)的發(fā)生，NPR1、C-MET陽(yáng)性率升高，MVD值增加。

表1　兩組患者NEP1和C-MET陽(yáng)性表達(dá)率比較和MVD值的比較

2.3觀察組中NPR1、C-MET陽(yáng)性率與MVD值的相關(guān)性分析NRP1的陽(yáng)性率與C-MET的陽(yáng)性率存在正相關(guān)性(r=0.485，P<0.001),NRP1的陽(yáng)性率與MVD值存在正相關(guān)性(r=0.447，P<0.001),C-MET的陽(yáng)性率與MVD值存在正相關(guān)性(r=0.493，P<0.001)。

3　討論

近年來(lái)，人們對(duì)于提高肺癌治療后患者的生存率并未取得重大進(jìn)展。在非小細(xì)胞肺癌的進(jìn)程中極易出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的明顯浸潤(rùn)、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[7]。有學(xué)者認(rèn)為NRP1是一種潛在的血管生成促進(jìn)因子，將它稱為新型VEGF受體。NEP1與血管關(guān)系密切，是從乳腺癌細(xì)胞系中純化得到[8-9]。也有研究顯示NRP1與腫瘤細(xì)胞的遷移密切相關(guān)[10]。C-MET是一種原癌基因編碼的擁有自主磷酸化活性的HGF受體，主要在各種上皮細(xì)胞中表達(dá)，可以調(diào)控腫瘤的侵襲性生長(zhǎng)，是酪氨酸蛋白激酶家族成員[11]。C-MET還可以通過(guò)將蛋白激酶結(jié)構(gòu)域中PTK激活引起絲裂原的活化，從而引起蛋白激酶的羧基端酪氨酸殘端的磷酸化，上調(diào)u-PA，最終調(diào)節(jié)一系列的生物反應(yīng)，并可引起基底膜的破壞和細(xì)胞外基質(zhì)的降解，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移[12-13]。C-MET還有刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增生，通過(guò)自分泌和旁分泌促進(jìn)血管的生成[14]。也有研究稱C-MET通過(guò)激活STAT(信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子)途徑與PI-3K(磷脂酰肌醇 3-激酶)途徑，引起細(xì)胞表達(dá)出血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)、生長(zhǎng)和血管生成[15-16]。本實(shí)驗(yàn)主要探討NRP1與C-MET在不同臨床癥狀下的表達(dá)特點(diǎn)及其與血管生長(zhǎng)的相關(guān)關(guān)系，故選擇了特異性和敏感性明顯高于同類其他標(biāo)記物(如CD31、F8因子等)且能夠特異性標(biāo)記腫瘤的新生血管的CD34作為標(biāo)記物。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示NRP1與C-MET陽(yáng)性率均隨著腫瘤中血管的增加而提高，故推斷NRP1與C-MET均在腫瘤的生長(zhǎng)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。同時(shí)NRP1和C-MET在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)存在相關(guān)性，故推斷NRP1和C-MET在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)上存在一定的協(xié)同作用，其原因可能與NRP1和C-MET均能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、提高腫瘤細(xì)胞的突變率有關(guān)，也可能與NRP1和C-MET均促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的產(chǎn)生從而相互促進(jìn)有關(guān)。由本實(shí)驗(yàn)結(jié)果得知當(dāng)腫瘤的分化程度較低時(shí)，NRP1和C-MET的表達(dá)均處于較高水平，故推測(cè)NRP1和C-MET可能與腫瘤細(xì)胞的分化有一定相關(guān)性，當(dāng)NRP1與C-MET表達(dá)升高時(shí)腫瘤細(xì)胞有向低分化發(fā)展的趨勢(shì)，此時(shí)腫瘤的治療較困難且預(yù)后較差。實(shí)驗(yàn)結(jié)果中存在脈管浸潤(rùn)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞中NRP1和C-MET的表達(dá)均升高，故推斷NRP1和C-MET均可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的脈管累犯和淋巴轉(zhuǎn)移，而NRP1和C-MET的促進(jìn)血管生成作用發(fā)揮了一定作用，腫瘤血管的生成為腫瘤的生長(zhǎng)提供了條件，而密集的血管有利于腫瘤細(xì)胞進(jìn)入脈管和淋巴。當(dāng)Ki67的表達(dá)升高時(shí)，NRP1和C-MET的表達(dá)也隨之升高，這種相關(guān)性更好的證明了NRP1和C-MET擁有重要的促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的作用。生成腫瘤血管有多種方法，可以是內(nèi)皮依賴性血管(由內(nèi)皮細(xì)胞前體細(xì)胞分化而成)，也可以是由腫瘤周圍的正常組織中的血管延伸到腫瘤組織中形成，而這些血管的生成均可以通過(guò)NRP1和C-MET的表達(dá)從而促進(jìn)多種血管生成相關(guān)信號(hào)的分泌而完成，從而促進(jìn)腫瘤內(nèi)血管生長(zhǎng)，加快腫瘤的生長(zhǎng)。總之，NRP1和C-MET在非小細(xì)胞肺癌中存在高表達(dá)，二者均可促進(jìn)腫瘤血管的生成，同時(shí)還存在一定的正向協(xié)同作用。

表2　觀察組患者不同臨床癥狀下NPR1、C-MET陽(yáng)性率，MVD值比較

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Express characteristics of NRP1 and C-MET in non-small cell lung cancer with different clinical pathological features and relationship between with the tumor blood vessel growth

YANG Li

(Hematology-OncologyDepartmentofTheNo.1People'sHospitalofYibin,Yibin,Sichuan644000,China)

ObjectiveTo analyze express characteristics of NRP1 and C-MET in non-small cell lung cancer with different clinical pathological features and relationship between with the tumor blood vessel growth.MethodWe selected 107 paraffin embedded tissues from patients with lung cancer and another 79 from patients without lung cancer.Detect the positive expression rate of NRP1and C-MET and the value of MVD，then divided them into the observation group and the control group.Compare the positive expression rate of NRP1 and C-MET and the value of MVD in different groups and the correlation between different clinical symptoms and the positive expression rate of NRP1and C-MET and the value of MVD in observation group.ResultsCompared with the control group,observation group have significant differences in the expression rate of NRP1and C-MET and the value of MVD (P<0.05).There are significant correlation between different clinical symptoms and the positive expression rate of NRP1and C-MET and the value of MVD in observation group (P<0.05).There are positive correlations between the expression rate of NRP1and C-MET (P<0.05).There are positive correlations between the expression rate of NRP1and the value of MVD (P<0.05).There are positive correlations between the expression rate of C-MET and the value of MVD (P<0.05).ConclusionThere are high expressions of NRP1and C-MET in non-small cell lung cancer,both of them can promote the growth of blood vessels and have some certain positive synergy .

Carcinoma,non-small-cell lung;Neuropilin-1;Protein-tyrosine kinases;Neovascularization,pathologic

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.09.033

2016-04-21，

2016-07-18)