參力保與二氮嗪對家兔心肌缺血再灌注損傷的保護作用

董淑雯

(濰坊護理職業學院醫學系，山東　濰坊　261041)

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參力保與二氮嗪對家兔心肌缺血再灌注損傷的保護作用

董淑雯

(濰坊護理職業學院醫學系，山東濰坊261041)

目的比較參力保與二氮嗪對家兔心肌缺血再灌注損傷的保護作用及機制。方法結扎兔冠狀動脈左前降支(LAD)30 min，復灌120 min后復制家兔心肌缺血再灌注模型。40只家兔，隨機分為5組，假手術組、模型組、參力保組、二氮嗪組、參力保+5-羥葵酸 (5-HD)組。測定左室收縮壓(LVSP)、左室舒張末期壓(LVDEP)、缺血區面積、梗死區面積、血肌鈣蛋白I(CTnI)活性。結果參力保與二氮嗪均升高LVSP、降低LVDEP，與模型組和參力保+5-HD組相比，有顯著差異(P<0.05)；參力保與二氮嗪組顯著降低血漿CTnI的活性，與模型組和參力保+5-HD組相比有顯著差異(P<0.01)；并降低心肌梗死面積，與模型組和參力保+5-HD組相比有顯著差異(P<0.05)；而參力保組與二氮嗪組上述所有指標比較差異無統計學意義(P>0.05)，參力保+5-HD組與模型組上述所有指標比較差異無顯著性(P>0.05)。結論參力保與二氮嗪對家兔心肌缺血再灌注損傷的保護作用相似，其保護作用能被線粒體ATP敏感性鉀通道阻滯劑5-HD所阻斷，其機制可能與開放線粒體ATP敏感鉀通道通道有關。

參力保；二氮嗪；心肌缺血再灌注損傷；ATP敏感性鉀通道

二氮嗪是線粒體ATP敏感鉀通道特異性開放劑，對缺血再灌注心肌提供保護作用〔1〕，但在臨床上應用發現可引起低血壓等副作用。參力保為人參三醇系皂苷單體，系從五加科植物屬人參莖葉中提取的單體，可抑制兔心肌缺血再灌注時的自由基產生，減輕脂質過氧化反應，對心肌缺血再灌注損傷具有保護作用。饒先偉等〔2〕研究報道人參皂苷Rg2對改善心肌缺血再灌注損傷、保護心肌有一定療效，而且隨著劑量的增加療效更明顯。本試驗以兔復制心肌缺血再灌注模型，通過比較參力保與二氮嗪的抗心肌缺血作用，進一步探討參力保的作用機制，以期為臨床尋找一種對心肌保護作用更安全可靠的藥物。

1　材料與方法

1.1動物普通級大耳白兔，雌雄不拘，體重2.0～3.0 kg，由武漢市新洲區全耀動物養殖場提供〔實驗動物合格證號：Scxk(鄂)2004-0006〕。

1.2藥品及試劑參力保粉劑由吉林省中醫中藥研究院提供，臨用時配成所需濃度；溶媒：羥丙基-β-環糊精，西安德立生物化工有限公司生產；二氮嗪注射液由北京紫竹藥業有限公司生產，批號國藥準字H11021791；5-羥葵酸(5-HD)；伊文思藍和氯化三苯基四氮唑(TTC)均購自Sigma公司。血肌鈣蛋白I(CTnI)試劑盒:美國DPC公司。

1.3儀器722-分光光度計(上海)，全自動生化分析儀(LANDMARK,AG-Ⅱ,美國)，BL-420F生物機能實驗系統、YPJ01型壓力換能器(成都醫療儀器廠)。

1.4實驗方法大耳白兔40只，隨機分為5組，每組8只。假手術組：開胸左冠脈前降支(LAD)下穿線不結扎,給予生理鹽水；模型組：給予溶媒(8.58 mg/kg)；參力保組：參力保(22.36 mg/kg，內含參力保5.2 mg/kg)；二氮嗪組：二氮嗪注射液3 mg/kg；參力保+5-HD組：參力保(22.36 mg/kg，內含參力保5.2 mg/kg)+5-HD(5 mg/kg)。用2%戊巴比妥鈉30 mg/kg經耳緣靜脈緩慢注入，麻醉后固定于兔臺，四肢及胸前皮下置入電極，監測心電圖變化。右頸總動脈插入導管，進入左心室，導管末端通過壓力換能器連接BL-420F生物機能實驗系統。去胸前毛，沿胸正中線剪開皮膚，從劍突上沿胸骨正中線開胸，以小型開胸器擴開切口使心臟暴露良好，用眼科鑷輕提起心包，小心剪開，用止血鉗提起左心耳，于LAD與冠脈出口下方3 mm處結扎LAD(線下放一細空心硅膠管)，造成心肌缺血，30 min后結扎處打開，關閉胸腔，再灌前5 min靜注各種藥物，再灌注120 min，為保證存活率可適當補充糖鹽水。

1.5觀察指標

1.5.1左室功能檢查實驗中待心電圖壓力曲線穩定，觀察5 min，由BL-420F生物機能實驗系統檢測再灌120 min時左室收縮壓(LVSP)，左室舒張末期壓(LVDEP)的變化。

1.5.2血漿心肌酶測定心臟采血(肝素抗凝)，3 000 r/min離心15 min，取上清，用自動生化分析儀檢測血CTnI的活性。

1.5.3心肌缺血及梗死范圍測定〔3〕于復灌結束后，原位結扎LAD，取出心臟，用生理鹽水漂洗心腔內積血，剔除心房和右室，由升主動脈注入0.01 mol/L的伊文思藍1.2～1.4 ml,凍存30 min后，自心尖到心底，將左室切成6 mm薄片，然后置于0.03 mol/L的TTC中避光37℃水浴15 min，再經3.33 mol/L甲醛固定10 min后，可見梗死區(IS)心肌呈灰白色；缺血區(AAR)呈紅色；未缺血區呈藍色。分別稱重，計算缺血區面積百分比和梗死區面積百分比。

1.6統計學方法應用SPSS12.0 軟件進行單因素方差分析。

2　結　果

2.1心功能指標再灌120 min時，參力保組、二氮嗪組與模型組、參力保+5-HD組比較，LVSP 升高明顯，LVDEP降低(P<0.05)；參力保組與二氮嗪組比較，LVSP、LVDEP無顯著差異(P>0.05)；參力保+5-HD組與模型組比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2對血漿心肌酶的影響參力保組、二氮嗪組與模型組、參力保+5-HD組比較可明顯降低CTnI(P<0.05)；參力保組與二氮嗪組比較無差異性(P>0.05)；參力保+5-HD組與模型組比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1　參力保對缺血/再灌注損傷后心功能指標及心肌缺血、梗死及心肌酶的影響±s,n=8)

與模型組比較：1)P<0.05；與參力保+5-HD組比較：2)P<0.05

2.3心肌缺血及梗死面積除假手術組外，各組對比缺血區面積無顯著差異,說明各組動物的缺血程度具可比性；參力保組、二氮嗪組與模型組、參力保+5-HD組比較可明顯降低梗死區面積(P<0.05)；參力保組與二氮嗪組比較無差異(P>0.05)；參力保+5-HD組與模型組比較無差異(P>0.05)。見表1。

3　討　論

我們在前期試驗中已經證實參力保可明顯降低缺血再灌注心肌磷酸激酸同工酶(CK-MB)水平和丙二醛(MDA)含量，保護抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)活性，抑制了胞內酶的釋放，減輕心肌損傷〔4〕。而在本試驗中與二氮嗪的作用比較，以觀察參力保對線粒體 ATP敏感性鉀通道的作用。

Garlid 等〔1〕首先在離體鼠心的實驗中發現二氮嗪能對局部缺血再灌注心肌提供保護作用。研究顯示，二氮嗪預處理和后處理均是通過開放線粒體敏感性鉀通道而發揮心肌保護效應的〔5〕。近年來國內學者對二氮嗪也做了大量研究，劉蔚等〔6〕在心肌缺血前預防性給予二氮嗪靜脈注射，可以降低心肌梗死面積,改善心電圖損傷壞死性變化，減少血清肌酸激酶(CK)活性的增加，可見二氮嗪能夠減輕心肌缺血再灌注損傷。 Mykytenko等〔7〕在犬體冠狀動脈阻塞60 min和再灌注24 h的模型中，發現5-HD可以消除缺血后處理的心肌保護作用，證實5-HD是線粒體ATP敏感性鉀通道的特異性阻斷劑，鹿欣等〔8〕的研究也證實給予二氮嗪和5-HD后，缺血心肌線粒體Flameng評分增高，表明5-HD取消了二氮嗪預處理、后處理的保護作用。

當心肌缺血再灌注損傷發生心肌動力學障礙時,LVSP、左室內壓(LVDP)減低,LVEDP增高。而目前認為評價缺血預處理是否保護心肌的金指標是心肌梗死范圍的降低。本試驗結果表明，參力保與二氮嗪對缺血/再灌注損傷心肌有相似的保護作用，其保護作用能被5-HD所阻斷，說明參力保的抗心肌缺血作用與開放線粒體ATP敏感性鉀通道有關，而引起線粒體ATP敏感性鉀通道開放的機制尚待進一步研究，且在試驗過程中未發現參力保有不良作用。

1Garlid KD，Paucek P，Yarovoy VY，etal.Cardioprotective effect of diazoxide and its interaction with mitochondrial ATP-sensitive K+channels-possible mechanism of cardioprotection〔J〕.Circ Res，1997;81(6):1072-82.

2饒先偉，葉澤兵.人參皂苷Rg2后處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用及其機制〔J〕.現代醫院,2013;13(8):18-20.

3徐鋼，季永，汪莉，等.內源性硫化氫參與缺血后處理減輕離體大鼠心臟缺血/再灌注損傷〔J〕.中國藥理學通報,2008;24(7):910-4.

4董淑雯，宋海濱，單迅，等.參力保對家兔心肌缺血再灌注損傷的保護作用〔J〕.青島大學醫學院學報,2008；44(2):99-101.

5趙其宏，張穎，梁啟勝，等.二氮嗪后處理對缺血/再灌注心肌的保護作用及其與PI3K/Akt 信號通路的關系〔J〕.中國藥理學通報,2012;28(1):127-31.

6劉蔚，李瑩瑩，汪海.線粒體KATP開放劑二氮嗪對家兔心肌缺血-再灌注損傷的影響〔J〕.山東醫藥,2013;53(8):22-5.

7Mykytenko J,Reeves JG,Kin H,etal.Persistent beneficial effect of postconditioning against infarct size:role of mitochondrial K(ATP)channels during reperfusion〔J〕.Basic Res Cardiol,2008;103(5):472-84.

8鹿欣，陳克彪，馬磊，等.探討二氮嗪后處理聯合預處理對離體大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用〔J〕.泰山醫學院學報,2011;32(12):893-6.

〔2015-02-18修回〕

(編輯苑云杰/曹夢園)

濰坊市衛生局中醫藥科技計劃項目(No.2013C017)

董淑雯(1965-)，女，碩士，副教授，主要從事心血管病學研究。

R541.4

A

1005-9202(2016)18-4428-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.18.011