雙柱定性-氣相色譜測定蔬菜中多種農藥殘留

王敏，邢燕，王鐘，高慧，王玉華，王勤

（淄博市疾病預防控制中心，山東淄博255026）

雙柱定性-氣相色譜測定蔬菜中多種農藥殘留

王敏，邢燕，王鐘，高慧，王玉華，王勤*

（淄博市疾病預防控制中心，山東淄博255026）

建立固相萃取-雙柱定性-氣相色譜法測定蔬菜中多種有機氯、擬除蟲菊酯類農藥殘留的方法。樣品中的有機氯、擬除蟲菊酯類農藥經乙腈溶劑超聲提取后，CARB/NH2固相萃取柱凈化，采用HP-5與DB1701毛細管色譜柱雙柱定性，氣相色譜－電子捕獲檢測法（GC-ECD）進行定量分析。在一定濃度范圍內質量濃度與峰面積有良好的線性關系，其線性相關系數為0.999 1～0.999 8，加標回收率在86%～110%之間，相對標準偏差（RSD）為0.73%～4.1%，方法檢出限在5.0×10-4mg/kg～1.0×10-3mg/kg。該方法充分利用雙柱定性的優勢，檢測結果準確、可靠，達到農殘檢測的要求，適用于蔬菜中多種有機氯、擬除蟲菊酯類農藥的同時測定。

蔬菜；有機氯農藥；擬除蟲菊酯農藥；氣相色譜；雙柱定性

農藥是果蔬類植物種植過程中的重要污染物，隨著農藥品種和用量的不斷增加，越來越受到各國政府和公眾的關注。目前，我國農業生產中3大類最常用的農藥為有機氯、有機磷和擬除蟲菊酯［1］。其中，有機氯農藥和擬除蟲菊酯農藥均為高效廣譜殺蟲劑［2］，在農業生產中都曾被廣泛使用。但由于其毒性高，穩定性強，世界各國對兩類農藥的最大殘留限量都作了嚴格規定。因此，建立多種農藥殘留的同時檢測方法，對于保證食品安全、保護人體健康都具有重要意義。目前，有機氯、擬除蟲菊酯農藥含量的測定方法主要有氣相色譜法（ECD）［3-6］，氣相色譜-質譜法［7］、液相色譜-質譜聯用法［8］和高效毛細管電泳法［9］等。由于氣相色譜法應用時間長，成本低，方法可靠，在農藥殘留檢測中仍占據重要地位。然而，常用的農藥殘留前處理技術無法完全除去雜質，通過單一色譜的保留時間對農殘定性時經常受到干擾，造成假陽性現象，而不同物質在不同極性的兩種柱子上均同時出峰的幾率非常低，利用這個原理來通過雙柱定性可以排除假陽性，將會得到好的定性結果，提高檢測方法的準確度。

本研究選用乙腈作為萃取溶劑，CARB/NH2固相萃取小柱（500 mg/6 mL）凈化，通過HP-5和DB-1701雙色譜柱定性，用外標法對蔬菜中α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、P，P’-DDE、O，P’-DDT、P，P’-DDD、P，P’-DDT、硫丹、三氯殺螨醇、聯苯菊酯、甲氰菊酯、三氟氯氰菊酯、氯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯等10種有機氯和8種菊酯類農藥殘留進行了分析，方法靈敏準確、簡便快捷，滿足現階段蔬菜中農藥殘留的分析要求。

1　材料與方法

1.1試樣

蔬菜樣品：隨機抽取25種市售蔬菜。

1.2儀器與試劑

6890A型氣相色譜儀：Agilent公司；ST 16R型高速離心機：Thermo Fisher公司；N-EVAPTM 112型氮吹濃縮儀：Organomation公司；KQ-250B型超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；12位SPE固相萃取儀：Supelco公司；CARB/NH2（500 mg/6 mL）固相萃取小柱：Agilent公司。

丙酮、正己烷（色譜純）：默克公司；純水；α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、P，P’-DDE、O，P’-DDT、P，P’-DDD、P，P’-DDT：濃度為50μg/mL；硫丹、三氯殺螨醇、聯苯菊酯、甲氰菊酯、三氟氯氰菊酯、氯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯濃度均為100 μg/mL。標準溶液定值單位均為農業部環境保護科研檢測所。

儀器條件

1.3氣相色譜條件

進樣口溫度240℃；檢測器溫度320℃；載氣（N2）流速1.0 mL/min；尾吹流速59.0 mL/min；進樣方式：分流；分流比為5∶1（體積比）；進樣體積1 μL。

HP-5毛細管柱升溫程序：150℃保持5 min，以4℃/min升至270℃，保持20 min；

DB-1701毛細管柱升溫程序：150℃保持5 min，以4℃/min升至270℃，保持30 min。

1.4測定方法

稱取10.0 g左右已粉碎的蔬菜樣品于50 mL離心管中，加入乙腈25 mL搖勻，超聲萃取20 min后離心分層。將上清液15 mL在40℃水浴中氮吹至近干，加入1 mL丙酮，待凈化。取固相萃取小柱（CARB/NH2，500 mg/6 mL），于固相萃取儀上固定好，用丙酮/二氯甲烷（1∶1）5 mL淋洗萃取小柱。當二氯甲烷液面即將到達小柱吸附層表面時，立即將樣品液轉入萃取柱中，另取一10 mL比色管接收樣液，待液面即將到達小柱吸附層表面時，再分別以丙酮/二氯甲烷（1∶1）10 mL先后分3次淋洗小柱，用氮氣吹至近干，加正己烷定容至1.0 mL，取1.0 μL進樣測定。

2　結果與討論

2.1雙柱定性參數與定量色譜柱的選擇

不同物質在不同極性的兩種柱子上均同時出峰的幾率非常低，通過雙色譜柱分離能得到更準確的定性結果。選用弱極性的HP-5（30.0m×320 μm×0.25 μm）和中等極性的DB-1701（30.0 m×320 μm×0.25 μm）色譜柱對上述農藥進行分離，用HP-5色譜柱分離農藥標準的色譜圖如圖1所示，DB-1701色譜柱分離農藥標準的色譜圖如圖2所示。

從圖中看出，有機氯和擬除蟲菊酯類農藥在兩條色譜柱上均能達到很好的分離。由于目標物在HP-5保留時間相對DB1701較短，為提高試驗效率，本研究選用HP-5作為定量分析所用分離柱。

圖1　有機氯、擬除蟲菊酯類農藥標準色譜圖（HP-5色譜柱）Fig.1Standard chromatogram for organochlorine and pyrethroid pesticide residues separated by HP-5 column

圖2　有機氯、擬除蟲菊酯類農藥標準色譜圖（DB-1701色譜柱）Fig.2Standard chromatogram for organochlorine and pyrethroid pesticide residues separated by DB-1701 column

2.2樣品凈化柱的選擇

蔬菜中主要干擾物質是葉綠素、碳水化合物、蛋白質和脂肪，Carb-NH2小柱上層主要成分是活性碳，除去色素的效果較好，下層NH2基能和碳水化合物、蛋白質以及脂肪中的相關基團（-OH、-NH2基等）形成氫鍵而去除干擾化合物；二者結合可有效除去色素、碳水化合物、蛋白質和脂肪等雜質。故本研究選用CARB/NH2柱作為樣品凈化柱對樣品進行前處理。

2.3標準曲線及檢出限

以正己烷為溶劑，配制有機氯農藥標準系列及擬除蟲菊酯類農藥標準系列如表1所示。

表1　有機氯、擬除蟲菊酯類農藥的標準曲線方程及檢出限Table 1Standard curve equation and detection limit for organochlorine and pyrethroid pesticide residues

用HP-5氣相色譜柱為定量色譜柱，以標準的峰面積對濃度作曲線，標準曲線方程及相關系數列于表1中。通過表1中數據可以看出，在實驗濃度范圍內目標物濃度與峰面積線性關系良好，相關系數在0.999 1～0.999 8之間，檢出限為5.0×10-4mg/kg～1.0×10-3mg/kg。

2.4方法回收率和精密度

在已知不含農藥殘留的白菜樣品中分別加入1 mL 0.5 ug/mL農藥混合標準中間液，按實驗方法提取、凈化和檢測，以峰面積計算各種農藥的回收率。重復測定6次，計算各種農藥的平均回收率及相對標準偏差，其結果見表2。

表2　有機氯、擬除蟲菊酯類農藥的加標回收率及相對標準偏差（添加濃度0.5 μg）Table 2Recoveries and the relative standard deviations for organochlorine and pyrethroid pesticide residues

2.5樣品測定

運用上述方法對隨機抽取的25種市售蔬菜按上述方法測定，在3種樣品中發現硫丹、聯苯菊酯、三氟氯氰菊酯等農藥殘留，檢出量均小于食品安全國家標準中規定的農藥最大殘留限量［10］，其它農藥測定結果均小于檢出限。

3　結論

本研究充分利用雙柱定性的優勢，檢測效果靈敏、準確、重現性好，達到農殘檢測的要求，適用于蔬菜中多種有機氯、擬除蟲菊酯類農藥的同時測定。

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［3］王智亮，安靜，王曉紅，等.玉米和大豆中多種有機氯農藥殘留檢測方法研究［J］.食品研究與開發，2013，34（14）：95-98

［4］萬益群，鄢愛平，謝明勇.中草藥中有機氯農藥和擬除蟲菊酯農藥殘留量的測定［J］.分析化學，2005，33（33）：614-618

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［10］中華人民共和國衛生和計劃生育委員會，中華人民共和國農業部. GB 2763-2014食品安全國家標準中國國家標準化管理委員會食品中農藥最大殘留限量［S］.北京：中國標準化出版社，2012

Determination of Multiple Pesticide Residues in Vegetables by Gas Chromatography with Dual-column Identification

WANG Min，XING Yan，WANG Zhong，GAO Hui，WANG Yu-hua，WANG Qin*
（Zibo Municipal Center for Disease Control and Prevention，Zibo 255026，Shandong，China）

A method for the determination of organochlorine and pyrethroid pesticide residues in vegetables by solid phase ex-traction（SPE）coupled with dual-column gas chromatography（GC）was developed and validated.The samples were extracted by acetonitrile with ultrasonic wave extraction and purificated with Carb-NH2SPE column，then qualitatived by DB-1701 and HP-5，and quantitatived by GC-ECD.The results demonstrated that the linear ranges were gotten in a proper concentration range with the linear correlation coefficient from 0.999 1 to 0.999 8.The average recoveries ranged from 86%to 110%with the relative standard deviations of 0.73%-4.1%，and the limits of detection were from 5.0×10-4mg/kg to 1.0×10-3mg/kg.The method makes full use of the advantage of dual-column identification，which is accurate，sensitive and suitable for the analysis of organochlorine and pyrethroid residues in vegetables.

vegetables；organochlorine pesticides；pyrethroid pesticides；gas chromatography；dual-column identification

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.20.033

山東省醫藥衛生科技發展計劃項目（2013WS0028）；淄博市科學技術發展計劃（2012GG01283）

王敏（1985—），女（漢），技師，碩士研究生，研究方向：食品和水質檢測。

王勤，主任技師。

2015-04-01