婦炎消膠囊含量測定方法的改進

袁文靜，袁文鵬

（1.河南省周口市食品藥品檢驗所，河南周口466000；2.河南省項城市中醫院，河南項城466200）

婦炎消膠囊含量測定方法的改進

袁文靜1，袁文鵬2

（1.河南省周口市食品藥品檢驗所，河南周口466000；2.河南省項城市中醫院，河南項城466200）

目的建立測定婦炎消膠囊中大黃素和大黃酚含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 m），流動相為甲醇-0.1%的H3PO4（80∶20），波長為288 nm，流速為1.0 mL/min。結果大黃素進樣量在0.048 7～0.292 2 g范圍內、大黃酚進樣量在0.122 7～0.736 1 g范圍內與峰面積積分值線性關系良好；回歸方程大黃素為Y=0.363 77 X-0.387 1（r=0.999 8，n=6），大黃酚為Y=0.306 31 X-2.466 7（r=0.999 9，n=6）。大黃素的平均回收率為98.53%，RSD為1.49%（n=6）；大黃酚的平均回收率為100.01%，RSD為0.97%（n=6）。結論該方法簡便、靈敏，結果準確，回收率高，精密度和重復性均較好，可作為婦炎消膠囊含量的測定方法。

婦炎消膠囊；大黃素；大黃酚；含量測定

婦炎消膠囊為苗族藥［1］，主要由大黃、漿草和敗醬草等7種中藥組方，有除濕止帶、行氣化瘀、清熱解毒的功效［1］，主要用于治療婦女生殖系統炎癥和痛經、帶下。現行婦炎消膠囊質量標準［1］含量測定只以大黃素為質量指標對大黃進行質量控制。在臨床檢驗時發現，多數含有藥材大黃的制劑［2］均以大黃素和大黃酚作為質量控制標準。本研究中參考文獻［2-9］，采用高效液相色譜（HPLC）法測定婦炎消膠囊中大黃素和大黃酚的含量，其操作方法簡單，所用色譜系統普通，精密度和重復性均較好，可作為該藥品的質量控制方法。

1　儀器與試藥

1.1儀器

Agilent 1260型四元低壓高效液相色譜儀，包括G1311C 1260 Quat Pump VL四元泵，G1329B 1260 Als自動進樣器，G1316A 1260 Tcc恒溫箱，G1314F 1260 VWD型紫外檢測器，Rev.B.04.03［52］Agilent Chemstation色譜數據處理系統（安捷倫科技有限公司）；CPA 2255D型天平（德國賽多利斯公司）。

1.2試藥

大黃素對照品（批號為110756-201512），大黃酚對照品（批號為110796-201520），均購自中國食品藥品檢定研究院；婦炎消膠囊（貴州益佰女子大藥廠有限責任公司，批號分別為20150412，20150507，20150903）；甲醇（Merck KgaA）為色譜純；磷酸為分析純；純化水。

2　方法與結果

2.1色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-0.1%磷酸（80∶20）；檢測波長：288 nm；流速：1.0 mL/min；進樣量：10 μL；柱溫：30℃。理論板數以大黃素峰計不低于5 000。在此色譜條件下的色譜圖見圖1。

2.2溶液制備

對照品溶液：分別稱取大黃素和大黃酚對照品0.012 17，0.030 67 g，置25 mL容量瓶中，用甲醇溶解，分別吸取大黃素和大黃酚對照品溶液各1 mL，定容至50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，制成含大黃素9.712 μg/mL和大黃酚24.54 μg/mL的對照品溶液。

供試品溶液：取樣品10粒，除去囊殼，將內容物混均，研磨，精密稱取0.5 g，置錐形瓶中，加入乙醇25.00 mL，加熱回流提取1 h，放冷，用乙醇補足減失的質量，搖勻，濾過，量取續濾液10.00 mL置燒瓶中蒸干，加30%乙醇-鹽酸（10∶1）混合溶液15 mL，再水浴回流提取1 h，冷卻，用三氯甲烷60 mL分4次進行萃取提取，將三氯甲烷液蒸干后，用甲醇溶解定容至25 mL容量瓶中，搖勻，濾過，續濾液即為供試品溶液。

陰性對照品溶液：按婦炎消膠囊處方工藝，稱取缺大黃的其他6味中藥，制成陰性對照品，依法制備缺大黃的陰性對照品溶液。

2.3方法學考察

陰性干擾試驗：按擬訂色譜條件，取陰性對照品溶液10 μL，進樣測定。結果在大黃素和大黃酚對照品溶液色譜峰相應位置處無相同色譜峰（見圖1），表明陰性對照無干擾。

圖1　高效液相色譜圖

線性關系考察：分別吸取對照品溶液5，10，15，20，25，30 μL，依次進樣測定峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標、進樣量（X）為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程，大黃素為Y=0.363 77 X-0.387 1，r=0.999 8（n=6）；大黃酚為Y=0.306 31X-2.466 7，r=0.999 9（n=6）。結果表明，大黃素進樣量在0.048 7～0.292 2 μg、大黃酚進樣量在0.122 7～0.736 1 μg范圍內與峰面積積分值線性關系良好。

精密度試驗：取同一對照品溶液，按擬訂色譜條件進樣10 μL，平行進樣6次，測定。結果大黃素峰面積的RSD為0.63%（n=6），大黃酚峰面積的RSD為0.41%（n=6）。表明儀器精密度良好。

重復性試驗：取批號為20150507的樣品，平行制備供試品溶液5份，依法進樣測定。結果大黃素含量的RSD為2.03%（n=5），大黃酚含量的RSD為1.26（n=5），表明方法重復性良好。

穩定性試驗：取批號為20150507的樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件分別于0，1，3，7，15 h時進樣測定。結果的RSD大黃素為1.09%，大黃酚為2.17%（n=5），表明供試品溶液在15 h內穩定。

加樣回收試驗：取批號為20150507的樣品6份，各5 g，作好標示，隨機分為3組，每組2份，用移液管分別加入大黃素對照品（0.012 17 g→25 mL）和大黃酚對照品（0.030 67 g→25 mL）的對照品溶液1，2，3 mL，依法進樣測定樣品含量，并計算回收率。結果見表1。

表1　加樣回收試驗結果（n=6）

2.4樣品含量測定

取批號20150412，20150507，20150903的3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件，進樣測定，按外標法分別計算大黃素和大黃酚的含量，并與大黃素標準測定方法測定結果相比較。結果見表2。

表2　婦炎消膠囊中大黃素和大黃酚的含量測定結果（mg/粒）

3　討論

3.1指標性成分的選擇

大黃為蓼科植物掌葉大黃Rheum palmatum L.、唐古特大黃Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.或藥用大黃Rheum officinale Baill.的干燥根和根莖［10-11］。游離性蒽醌衍生物大黃素為大黃的主要抗菌成分［12-13］，是中藥大黃的主要單體，其化學名稱為1，3，8-三羥基-6-甲級蒽醌，是自然界分布較廣的蒽醌類物質。大黃酚是大黃的次生代謝產物［14］。婦女生殖系統炎癥、痛經、帶下多是肝郁不舒、熱毒蘊結、氣血瘀積導致。婦炎消膠囊治療婦科病應用的是大黃性味苦寒，瀉熱毒、破積滯、行瘀血的作用，近代研究逐步證實了大黃的抗菌性［12-13］。故筆者參考文獻［2-9］，并結合檢驗工作的實際，把大黃素和大黃酚作為婦炎消膠囊的質量控制指標。

3.2色譜條件和系統適用性試驗的選擇

在試驗中發現，原質量標準［1］的色譜條件和系統適用性試驗比較切合實際，色譜檢測的各項指標可達到最佳，故繼續使用。

3.3供試品溶液制備方法的選擇

婦炎消膠囊原質量標準［1］含量測定項下，制備供試品溶液的方法比較繁瑣，在樣品溶液的制備過程中容易流失。筆者參考文獻［2-9］，采用本研究中供試品溶液的制備方法，同時與原制備方法相比較，樣品含量提取明顯提高。故將其作為供試品溶液的制備方法。

［1］國家藥品監督管理局.國家藥品標準（試行）頒布件［Z］. 2002ZD-0265.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2015：23-24，494-495，709-710，1 472-1 474.

［3］張勇鋼.高效液相色譜法測定復方大黃痔瘡栓中大黃素大黃酚的含量［J］.時珍國醫國藥，2008，19（2）：465-466.

［4］張炬，常軍民，劉濤.HPLC法測定天山大黃中大黃素和大黃酚的含量［J］.新疆醫科大學學報，2003，26（6）：603.

［5］劉芳，陳建偉.HPLC法測定炒決明子中總大黃酚的含量［J］.中成藥，2005，27（5）：549.

［6］馬濤，熊春媚，郭亞東.高效液相色譜法快速測定大黃中大黃素和大黃酚的含量［J］.昆明師范高等專科學校學報，2005，27（4）：9-11.

［7］趙曉波，丁紅強，袁銳利，等.HPLC法測定乙肝清熱解毒膠囊中大黃素的含量［J］.中醫學報，2010，25（6）：1 136-1 138.

［8］王輝，陳曉艷，白麗杰.醒腦安神片中大黃素和大黃酚的含量［J］.中國藥業，2005，14（9）：48-49.

［9］徐紅，陳美林，李娟，等.三黃膠囊中大黃素與大黃酚的含量［J］.中國民族民間醫藥，2010，19（5）：34-39.

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［11］任仁安.中藥鑒定學［M］.上海：上?？茖W技術出版社，1991：44-47.

［12］丁艷，黃志華.大黃素藥理作用研究進展［J］.中藥藥理與臨床，2007，23（5）：236-238.

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［14］徐仁生.天然產物化學［M］.北京：科學技術出版社，1993：621-623.

Improvement of Content Determination Method for Fuyanxiao Capsules

Yuan Wenjing1，Yuan Wenpeng2
（1.Zhoukou Institute for Food and Drug Control，Zhoukou，Henan，China466000；2.Xiangcheng Hospital of Traditional Chinese Medicine，Xiangcheng，Henan，China466200）

ObjectiveToestablish amethod forthecontent determinationof emodinand chrysophanol inFuyanxiaoCapsulesby HPLC.MethodsAgilent Eclipse XDB-C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）was used，the mobile phase was composed of Methods-0.1%H3PO4（80∶20），the flow rate was 1.0 mL/min with detection wavelength at 288 nm.ResultsThe calibration curve was linear in the range of 0.048 7-0.292 2 μg for emodin.The calibration curve was linear in the range of 0.122 7-0.736 1 μg for chrysophanol.The regression equation of emodin wasY=0.363 77 X-0.387 1（r=0.999 8，n=6）.The regression equation of chrysophanol wasY=0.30631 X-2.4667（r=0.9999，n=6）.Theaveragerecoveryrateofemodinandchrysophanolwere98.53%and 100.01%，and RSD were 1.49%and 0.97%（n=6）.ConclusionThe method is simple，sensitive，accurate with high recovery rate and repeatability，which can be used for the content determination of Fuyanxiao Capsules.

Fuyanxiao Capsules；emodin；chrysophanol；content determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2016）18-0067-03

袁文靜（1980-），女，河南項城人，大學本科，主管藥師，研究方向為臨床藥學，（電子信箱）ymz502@126.com。

（2016-04-20；

2016-05-27）