慢性蕁麻疹患者血清IL-35和IL-17的檢測

郭　敏　白　莉

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·論著·

慢性蕁麻疹患者血清IL-35和IL-17的檢測

郭敏1白莉2

目的：檢測慢性蕁麻疹(CU)患者血清中IL-35及IL-17的表達。方法：病例組60例，根據(jù)蕁麻疹活動性評分標準(UAS)評價疾病嚴重程度，60例健康體檢者作為對照。ELISA法檢測CU患者與對照血清中IL-35和IL-17的水平，分析其與疾病嚴重程度的相關性。結果：CU患者組血清IL-35水平為(46.73±17.19)ng/L明顯低于健康對照組的(73.78±25.51)ng/L(P<0.05)；CU組IL-17表達水平為(18.03±8.88)ng/L，明顯高于對照組的(8.46±3.29)ng/L(P<0.05)。疾病嚴重程度評分與IL-35表達水平呈負相關(P<0.05)，與IL-17表達水平呈正相關(P<0.05)。結論：IL-35和IL-17可能與CU的發(fā)病及嚴重程度有關。

慢性蕁麻疹；IL-35；IL-17

慢性蕁麻疹(chronic urticaria, CU)是皮膚科常見的過敏性疾病，以反復發(fā)生風團或紅斑伴瘙癢為特點，病程超過6周，每周至少發(fā)作兩次，病程遷延難愈，嚴重影響患者的生活質量。IL-35是Treg細胞分泌的一種特征性的免疫負調節(jié)因子，IL-17是Th17細胞分泌的特征性細胞因子，兩者均在自身免疫性疾病、炎癥反應、腫瘤等發(fā)揮重要作用。迄今國內外尚未見對慢性蕁麻疹中IL-35和IL-17相關性研究，本文采用ELISA酶聯(lián)免疫吸附實驗，檢測CU患者血清中IL-35和IL-17含量，分析兩者表達水

平與疾病嚴重程度的相關性，現(xiàn)將結果報道如下。

1　資料和方法

1.1臨床資料病例組選擇60例自2014年11月至2015年5月在我院皮膚科門診就診并經臨床確診的慢性蕁麻疹患者。入選標準：①病程大于2個月，每周至少發(fā)作兩次；②除外膽堿能性蕁麻疹、壓力性蕁麻疹、寒冷性蕁麻疹；③近4周內未使用糖皮質激素及其他免疫抑制劑，近7天內未使用抗組胺藥物治療。排除標準：①資料不全者；②妊娠期、哺乳期婦女；③合并嚴重心、肝、肺、腎等內臟疾病以及系統(tǒng)性疾病。60例患者中男28例，女32例；年齡16～58歲，平均32.3歲；病程3個月至12年，平均24.6個月。根據(jù)EAACI/GA2LEN/EDF蕁麻疹評分標準，將CU患者根據(jù)病情嚴重程度分級評分(表1)。對照組選擇60例我院體檢中心健康體檢者，排除系統(tǒng)及過敏性疾病，年齡、性別與病例組匹配，入組及采血均已告知患者并簽署知情同意書。

表1　慢性蕁麻疹EAACI/GA2LEN/EDF蕁麻疹評分標準

1.2CU嚴重程度評分標準[1,2]嚴重程度觀察指標包括風團數(shù)量及瘙癢程度，所有CU按輕、中、重三級評分，按綜合癥狀積分將病情分為輕度(0～2分)，中度(3～4)分、重度(5～6分)。

1.3標本收集入組患者均采肘靜脈血3 mL，置于真空采血試管中，室溫冷卻30 min,3000 r/min離心10 min,取血清1.5 mL放入PE管分裝，標記后置于-20℃冰箱中保存，備測。實驗操作步驟嚴格按照IL-35和IL-17酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒說明書執(zhí)行。每個試劑盒使用前先做預試驗，檢測試劑盒正常，標準孔設復孔，檢測人IL-35及IL-17吸光值，根據(jù)標準孔與復孔的平均值繪制標準曲線，通過曲線回歸方程計算出待測孔人IL-35及IL-17濃度。

1.4試劑與器材人IL-35及IL-17酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司，采用SpectreMax plus384酶標儀(MD公司，美國)。

1.5統(tǒng)計學方法采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件進行分析，進行兩獨立樣本t檢驗比較實驗組和對照組血清中IL-35和IL-17表達水平，采用Pearson相關分析探討兩者間的關系，并采用Spearman相關分析探討IL-35、IL-17與CU疾病癥狀評分的相關性，P<0.05說明差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1ELISA檢測結果IL-35血清含量在CU患者中明顯降低，與健康對照組有統(tǒng)計學差異(P<0.05);CU患者IL-17血清水平明顯高于健康對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2　IL-35與IL-17水平組間比較

2.2相關性分析IL-35水平與疾病嚴重度評分呈負相關，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，IL-17水平與疾病嚴重度評分呈正相關,有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。IL-35與IL-17表達水平呈負相關，有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；見表3。

表3　IL-35、IL-17與疾病嚴重度的相關性及IL-35與IL-17相關性的分析

3　討論

慢性蕁麻疹(CU)發(fā)病的中心環(huán)節(jié)是肥大細胞活化脫顆粒，釋放組胺、合成細胞因子、炎癥介質等引起血管擴張及血管通透性增加，導致真皮水腫，引起風團及瘙癢等臨床癥狀[3]。目前國內外對CU的研究大多集中在免疫調節(jié)機制上，主要研究為Th1/Th2細胞之間的平衡以及相關的細胞因子在自身免疫性疾病中的作用，但仍不能很好地解釋CU的發(fā)病機制。Treg細胞與Th17細胞是近幾年研究發(fā)現(xiàn)的CD4+的細胞亞群，Treg/Th17的平衡在免疫調節(jié)過程中發(fā)揮重要作用[4]，目前已經在自身免疫性疾病中得到越來越多的關注。

IL-35是由調節(jié)性T細胞分泌的一種具有免疫負調節(jié)作用的新型細胞因子，IL-35與IL-12、IL-23、IL-27一起組成了IL-12細胞因子家族[5]。IL-35是由p35和EBI3兩個亞單位組成的異源二聚體，其在體外具有促進Treg細胞擴增，誘導iTR35細胞產生、促進Th1細胞分化，抑制Th17細胞產生和效應性T細胞活化等作用，是Treg細胞發(fā)揮其最大抑制效應所必不可少的細胞因子[6]。 由于IL-35具有較強的免疫抑制作用，越來越多的研究者開始關注其在疾病發(fā)生與發(fā)展過程的重要作用。IL-17是由Thl7分泌的最重要的細胞因子，參與中性粒細胞的增殖、成熟和趨化，可誘導巨噬細胞、內皮細胞、上皮細胞和成纖維細胞分泌IL-6、IL-8、腫瘤壞死因子、趨化因子，導致和放大炎癥[7]。已有的研究表明IL-17作為一種很強促炎功能的細胞因子，在過敏性哮喘、慢性蕁麻疹、類風濕性關節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、銀屑病、紅斑狼瘡、自身免疫性肝炎和炎癥性腸病中扮演重要角色[8-10]。

本研究發(fā)現(xiàn)，CU患者組IL-35的表達水平較健康對照組明顯降低，并且與疾病的嚴重程度呈負相關，提示在健康人體內，IL-35可能作為一種保護性細胞因子存在，維持人體的免疫平衡。本研究表明CU患者比健康人血清IL-17水平明顯升高，且與病情嚴重程度評分成正相關，但與病程、年齡、性別無明顯相關性，推測隨著臨床癥狀逐漸加重，Treg細胞分化減少，合成的IL-35逐漸降低，促進Th1、Th2等細胞分化,抑制Th17細胞產生和Treg細胞活化，IL-17的表達增加，導致機體免疫功能的異常，引起CU的發(fā)生。本研究還發(fā)現(xiàn)，在CU患者中IL-35與IL-17表達水平呈負相關，有統(tǒng)計學意義(r=-0.488,P<0.05)，提示IL-35既可以使調節(jié)性T細胞增殖，也可以抑制Th17細胞的分化，影響IL-17合成，提示兩者可能共同在自身免疫性疾病、炎癥反應、腫瘤、病毒感染等扮演重要角色[6]。

綜上所述，CU的發(fā)生與發(fā)展與IL-35與IL-17密切相關，通過對其關系的研究有助于了解CU的免疫發(fā)病機制，并為CU的診斷與治療提供新的思路。但CU發(fā)生、發(fā)展的機制復雜，尤其對于IL-35的研究尚處于早期，IL-35與IL-17在CU中如何相互作用，仍需進一步研究。

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(收稿：2015-07-29修回：2015-08-05)

Detection of serum IL-35 and IL-17 in the patients with chronic urticaria

GUOMin1,BAILi2.

1.FirstClinicalMedicalcollege,ShanxiMedicalUniversity,Taiyuan030001,China; 2.TheFirstHospitalofShanxiMedicalUniversity,Taiyuan030001,China

BAILi,E-mail:baili@medmail.com.cn

Objective: To detect the level of IL-35 and IL-17 in the patients with chronic urticaria (CU). Methods: The levels of IL-35 and IL-17 in 60 patients and 60 controls were detected by ELISA and the severity of the patients was assessed by urticaria activity score (UAS). The correlation between the level of serum IL-35 and IL-17, and CU severity scores was analyzed. Results: The serum level of IL-35 in the patients was (46.73±17.19) ng/L, which was lower than that in the controls (73.78±25.51) ng/L. The difference was statistically significant (P<0.05). The serum level of IL-17 in the patients was (18.03±8.88) ng/L, which was higher than that in the controls (8.46±3.29) ng/L. The difference was statistically significant (P<0.05). The CU severity score was negatively correlated to the level of IL-35 and positively to the level of IL-17 (P<0.05). Conclusion: The expression of IL-35 and IL-17 may be involved in the onset and severity of CU.

chronic curticariaA; IL-35; IL-17

1山西醫(yī)科大學第一臨床醫(yī)學院，山西太原,030001

2山西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院，太原，030001

白莉，E-mail:baili@medmail.com.cn