兩種方法在單增李斯特菌考核檢測中的應(yīng)用

郭 微 沈畢忠

（盤錦檢驗檢測中心

（市疾病預(yù)防控制中心），遼寧 盤錦 124010）

兩種方法在單增李斯特菌考核檢測中的應(yīng)用

郭 微 沈畢忠

（盤錦檢驗檢測中心

（市疾病預(yù)防控制中心），遼寧 盤錦 124010）

目的 研究探討不同檢測方法在單增李斯特菌考核檢測中應(yīng)用價值。方法 回顧分析2014年CNAS單增李斯特菌能力驗證考核中，應(yīng)用傳統(tǒng)檢測方式與現(xiàn)代檢測方法分別進(jìn)行檢測，分析兩種檢測方式特點(diǎn)。結(jié)果 兩種檢測方式均能有效檢測出單增李斯特菌，不過現(xiàn)代方法較傳統(tǒng)方法在培養(yǎng)時間和生化鑒別方面占有明顯優(yōu)勢。結(jié)論 現(xiàn)代API法應(yīng)用于單增李斯特菌考核檢測中具有極高的檢出率與靈敏度，該方式操作簡便，鑒定耗時短，適用于初學(xué)者

單增李斯特菌；檢驗方法；應(yīng)用

單增李斯特菌也稱之為腐生菌，在自然界中廣泛分布，主要生存于土壤和腐生植物中。引起李斯特菌病爆發(fā)的食品主要有乳及乳制品、肉類制品、水產(chǎn)品以及蔬菜水果，其中水果蔬菜、乳及乳制品最為常見。目前對于單增李斯特菌的培養(yǎng)檢測多采用傳統(tǒng)國標(biāo)法，不過該方式在前期分離培養(yǎng)工作需大量時間，導(dǎo)致檢測周期性較長［1］；而API Listeria方式則是近幾年新型的平板培養(yǎng)法，具有自動化、系統(tǒng)化發(fā)展趨勢，同時其檢測耗時短，極為符合單增李斯特菌考核檢測中的應(yīng)用。

1　材料與方法

1.1實驗材料：樣品編號：PTC-T081單增LMO-080；樣品狀態(tài)：密封西林瓶裝固體粉末；樣品數(shù)量：100份。

1.2實驗試劑：本次實驗所用的培養(yǎng)基、細(xì)菌生化鑒定套裝均由北京陸橋有限公司提供；顯色培養(yǎng)基由科瑪嘉公司提供。APILAB軟件一套，API Listeria 10300試劑盒由法國生物梅里埃公司提供。

1.3實驗儀器：細(xì)菌鑒定設(shè)備是法國梅里埃公司生產(chǎn)的ATB半自動細(xì)菌鑒定儀；細(xì)菌鏡檢設(shè)備是Olympus CX-31電子顯微鏡；細(xì)菌培養(yǎng)設(shè)備是上海智誠分析儀器制造有限公司生產(chǎn)的ZBDP2080恒溫培養(yǎng)箱；滅菌設(shè)備是山東新華醫(yī)療器械股份有限生產(chǎn)的LMQC5070高壓滅菌器。普通干粉培養(yǎng)基、即用型血瓊脂平板、生化鑒定管購自北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司；顯色干粉培養(yǎng)基購自法國CHROMagar微生物顯色培養(yǎng)基公司；API生化鑒定條購自法國梅里埃公司。

1.4檢測過程：稀釋液合計25 mL，此溶液即是待測樣品原液，全過程20 min內(nèi)完成。將上述制備的25 mL待測原液按照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 單核細(xì)胞增生李斯特菌檢驗》GB 4789.30-2010標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行后續(xù)操作。

1.5評價方法：根據(jù)國標(biāo)法作為參照，評估現(xiàn)代API法的靈敏度與特異性及陽性試驗的預(yù)測值與陰性試驗預(yù)測值。陽性則為檢測出單增李斯特菌，若為陰性則表示未檢出單增李斯特菌。

2　結(jié) 果

兩種檢測方式均能有效檢測出單增李斯特菌，不過現(xiàn)代方法較傳統(tǒng)方法在培養(yǎng)時間和生化鑒別方面占有明顯優(yōu)勢。見表1。

3　討 論

單增李斯特菌適應(yīng)能力超強(qiáng)，能在2～42 ℃下生存，值得注意的是，它在4 ℃冰箱保存的食品中也能生長繁殖，使其危害性更進(jìn)一步增大。人們在未經(jīng)高溫徹底加熱處理的情況下食用，就會出現(xiàn)感染癥狀，因而李斯特菌病又稱為“冰箱病”。在感染后3～70 d出現(xiàn)癥狀，健康成人可出現(xiàn)輕微類似流感癥狀，易感者突然發(fā)熱，劇烈頭痛、惡心、嘔吐、腹瀉、敗血癥、腦膜炎、孕婦出現(xiàn)流產(chǎn)，而孕婦本人癥狀多較輕。

傳統(tǒng)國標(biāo)法在檢測中由于需要采取單項逐步試驗，操作過程耗時費(fèi)力、步驟繁瑣，加之在觀察分離菌落的色澤區(qū)別難度較大等問題均會對檢測技術(shù)者帶來不小的難度與挑戰(zhàn)；現(xiàn)代API法則是通過多種培養(yǎng)基或干燥底物配合規(guī)范特定的生化判斷編碼，利用熒光底物對細(xì)菌進(jìn)行快速檢測。該方式僅需要24 h即可判斷結(jié)果，無需另行配置相關(guān)試劑，大大降低工作者操作步驟，提升了檢測效率，并且在菌落判斷中由于熒光呈色底物的存在，有效提升了菌落辨別，提高鑒定結(jié)果。張烜榕等［2］研究表明，在對于大量單增李斯特菌污染樣品的檢查鑒定中，采用API Listeria方式尤為適合，其操作簡便，只需一次接樣，無需借助溶血實驗的結(jié)果即可進(jìn)行結(jié)果判定；同時可避免國標(biāo)法中使用乙醇胺等危險物質(zhì)，降低檢查人員事故風(fēng)險率。

表1　傳統(tǒng)檢測方法與現(xiàn)代檢測方法比對

隨著造成人類致病的微生物感染種類逐步增多，過去常規(guī)單一性檢測微生物的方式逐漸出現(xiàn)不足，而現(xiàn)代API法中規(guī)范的生化鑒定編碼則會隨著今后對其的完善而逐步擴(kuò)充，加之配合專家學(xué)者的分析研究，有效彌補(bǔ)了傳統(tǒng)檢測中存在的不足從而極大促進(jìn)了微生物檢測準(zhǔn)確率，尤為適用于初學(xué)者。

［1］ 程潔，張曉峰.單增李斯特菌選擇性增菌培養(yǎng)和分離方法的比較研究［J］.檢驗檢疫科學(xué)，2003，13（6）:36-38.

［2］ 張烜榕，顏軍，李文龍，等.單核細(xì)胞增生李斯特菌三種檢測方法的比較［J］.大理學(xué)院學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2013，22（6）:38-42.

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1671-8194（2016）25-0033-02