復方太子參片中淫羊藿苷含量測定研究

汪　濤，趙雁平，胡衛東（解放軍武漢療養院藥械科，湖北 武漢 430074）

復方太子參片中淫羊藿苷含量測定研究

汪濤，趙雁平，胡衛東（解放軍武漢療養院藥械科，湖北 武漢 430074）

目的：建立復方太子參片中淫羊藿苷含量測定方法。方法：采用HPLC法測定復方太子參片中所含淫羊藿苷的含量，選用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm），流動相為乙腈-水（30 ： 70），檢測波長270 nm，流速1.0 mL·min-1，柱溫35 ℃。結果：淫羊藿苷進樣量在0.033 57～1.007 μg·mL-1范圍內呈良好的線性關系（r = 0.999 8）。加樣回收率為102.0%，RSD為0.70%。結論：HPLC法簡便、穩定、可靠，可作為復方太子參片中淫羊藿苷含量測定的質量控制方法。

復方太子參片；淫羊藿苷；高效液相色譜法；含量測定

復方太子參片為純中藥制劑，軍隊醫療機構制劑批準文號：廣制字（2013）F03004，由解放軍武漢療養院配制。該制劑具有扶正固本、鎮咳平喘、清熱解毒的作用，臨床用于治療慢性支氣管炎、過敏性支氣管炎引起的咳嗽、咳痰及哮喘等癥。復方太子參片由太子參、淫羊藿、桔梗、魚腥草等中藥組成，現代藥理學研究表明，淫羊藿所含淫羊藿苷（icariin，ICA）具有免疫調節、類皮質激素樣作用，可緩解氣管痙攣［1-6］。本研究采用高效液相色譜法［7-8］（HPLC）對復方太子參片中淫羊藿所含淫羊藿苷進行含量測定研究，旨為完善該制劑的質量標準提供理論參考。

1　儀器與試藥

高效液相色譜儀（Dionex Ultimate 3000，美國戴安公司）；色譜柱為welch Ultimate AQ-C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）、phenomenex Luna C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）、Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；LC-350A型超聲波中藥處理機（濟寧市市中區魯超儀器廠）。

淫羊藿苷（中國藥品生物制品檢定所，批號111524-201407）。復方太子參片（批號為150121、150212、150305）由解放軍武漢療養院提供。硅膠H薄層板、硅膠G薄層板均由青島海洋化工廠分廠提供。乙腈（色譜純，美國Fisher公司，批號15035045）；水為純水機凈化水（純水機型號Millipore Milli-Qbiocel型純水器）。其余試劑均為分析純（國藥集團化學試劑有限公司）。

2　含量測定［9］

2.1 色譜條件與系統適用性實驗

色譜柱為Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm），以乙腈-水（30 ： 70）為流動相，檢測波長270 nm，流速1.0 mL·min-1，柱溫35 ℃。理論塔板數按淫羊藿苷峰計算應不得低于1500。

2.2溶液的制備

2.2.1供試品溶液制備方法 取復方太子參片10片，研細，取粉末約1 g（批號150121），精密稱定，置有塞錐形瓶內，精密加入50%乙醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（頻率40 kHz，功率250 W）1 h，冷卻，再稱定重量，用50%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.2對照品溶液制備 精密稱取淫羊藿苷11.19 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液（0.111 9 mg·mL-1）。再精密吸取對照品儲備液3 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得溶液濃度為33.57 μg·mL-1［10］。

2.2.3陰性對照溶液制備 取除去淫羊藿以外的其它藥材，按確定的制備工藝生產陰性樣品。按擬訂的供試品溶液制備方法，制成陰性對照溶液［11］。

2.3專屬性實驗

將上述3種溶液各10 μL，分別進樣分析，色譜圖中，淫羊藿苷色譜峰峰形對稱，達到基線分離，陰性對照溶液無干擾，結果表明該方法專屬性良好（見圖1）。

圖1　復方太子參片中淫羊藿苷含量測定色譜圖A - 對照品，B - 供試品，C - 陰性對照；1 - 淫羊藿苷Fig 1　The chromatograms of content determination of icariin in Fufang Taizishen tabletsA - reference substance， B - sample， C - negative reference substance；1 - icariin

2.4線性關系的考察

分別精密吸取對照品溶液（33.57 μg·mL-1）1、2、5、10、20、30 μL注入液相色譜儀中，測定峰面積，以進樣量為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，線性回歸方程為：Y = 36.867 4 X - 0.015 0，r = 0.999 8。結果表明，淫羊藿苷進樣量在0.033 57 ～1.007 μg范圍內時，線性關系良好［12-13］。

2.5儀器精密度實驗

精密吸取同一供試品溶液（批號150121）10 μL，重復進樣6次，測定峰面積，RSD為0.09%。結果表明儀器精密度良好［14］。

2.6重復性實驗

取同一批樣品（批號150121）6份，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，測定峰面積并計算含量，結果樣品中淫羊藿苷的平均含量為0.780 5 mg·g-1，RSD為0.84%。

2.7穩定性實驗

取同一批樣品（批號150121），按“2.2”項下方法制備供試品溶液，分別于制備后0、1、2、4、8、12 h測定峰面積值，RSD為0.65%。測定結果表明，供試品溶液在12 h內穩定。

2.8加樣回收率實驗

分別精密吸取對照品儲備液（0.111 9 mg·mL-1）10、15、25 mL，置100 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得不同濃度的淫羊藿苷對照品溶液（濃度分別為11.19、16.78、27.98 μg·mL-1）。再精密稱取已知準確含量的同一批樣品（批號150121）共9份，分別精密加入上述不同濃度的淫羊藿苷對照品溶液25 mL，每個濃度制備3份，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀，按“2.1”項下色譜條件進行測定，結果顯示淫羊藿苷的平均回收率為102.0%，RSD為0.70%［15］，見表1。

表1　加樣回收率實驗結果. n = 9Tab 1　The result of sample recovery rate test. n = 9

2.9耐用性實驗

分別精密稱取同一批號（批號150121）的樣品粉末，按供試品溶液制備方法制備，在“2.1”項下色譜條件，采用三種不同品牌的色譜柱，依法測定，welch Ultimate AQ-C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）：分離度＞ 4，理論塔板數13 812，含量為0.772 9 mg·g-1；phenomenex Luna C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）：分離度＞ 4，理論塔板數11 321，含量為0.766 5 mg·g-1；Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm × 250 mm，5 μm）：分離度＞ 4，理論塔板數10 438，含量為0.780 5 mg·g-1；RSD為0.91%，表明三種不同品牌色譜柱均能重現現有方法。

2.10樣品的含量測定

取本品3批，批號分別為150121、150212、150305，按“2.2”至“2.6”項下方法進行測定，結果見表2。

表2　樣品中淫羊藿苷的含量測定結果Tab 2　The result of content determination of icariin in Fufang Taizishen tablets

3　討論

復方太子參片由4味中藥材組成。方中太子參，甘、微苦、平，入脾肺經，益氣健脾，生津潤肺，為君藥；淫羊藿，辛、溫，入肝腎經，強身固本，補腎納氣，為臣藥；桔梗，苦、辛、平，入肺經，降氣止咳平喘，祛痰利咽，為佐藥；魚腥草，辛、酸，微寒，入肺經，清利濕熱，消癰腫之功，清肺熱，為使藥。諸藥相伍，扶正固本、鎮咳平喘，適用于慢性支氣管炎，哮喘。

3.1含量測定指標成分的選擇

在建立復方太子參片中有效成分含量測定方法的過程中，在測定太子參所含太子參環肽B，要使用HPLC法進行梯度洗脫，由于設備條件不具備，未能實施。淫羊藿為方中主藥，淫羊藿苷又為淫羊藿有效成分之一，并且含量測定及加樣回收實驗不存在干擾，故選擇淫羊藿苷作為復方太子參片質量控制的指標成分。

3.2流動相的選擇

《中華人民共和國藥典》2015年版一部中淫羊藿項下測定淫羊藿苷，以乙腈-水（30 ： 70）為流動相，結果顯示供試品溶液峰形較好，淫羊藿苷能夠達到基線分離，理論塔板數按淫羊藿苷峰計算不低于1500，故采用此流動相。

3.3淫羊藿苷含量限度的確定

由于《中華人民共和國藥典》2015年一部中對淫羊藿中淫羊藿苷的含量有規定，根據實驗情況，選擇淫羊藿苷的含量為重點控制對象。根據含量測定的結果及大量配制中的實際情況，建議復方太子參片應含淫羊藿苷≥0.20 mg·片-1。

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Study on content determination of icariin in Fufang Taizishen tablets

WANG Tao， ZHAO Yan-ping， HU Wei-dong（The Drug and Equipment Section of Wuhan Sanatorium of People's Liberation Army， Wuhan 430074， China）

Objective： To establish a content determination method of icariin in Fufang Taizishen tablets. Methods： The content of icariin in the Fufang Taizishen tablets was determined by HPLC. Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18column （4.6 mm × 250 mm，5 μm） was used with mobile phase of acetonitrile-water （30 ： 70）， the detection wavelength was 270 nm， flow rate was 1.0 mL·min-1，column temperature was 35 ℃. Results： The calibration curves were linear when the concentration of icariin was within the range of 0.033 57 - 1.007 μg·mL-1（r = 0.999 8）. The average recovery was 102.0% （RSD = 0.70%）. Conclusion： The HPLC method is simple， stable， reliable， and can be adopted as the quality control method of Fufang Taizishen tablets.

Fufang Taizishen tablets； Icariin； HPLC； Content determination

R917

A

1672 - 8157（2016）05 - 0271 - 03

2015年軍隊醫療機構制劑標準提高計劃（14TG0198）

汪濤，男，主管藥師，主要從事醫院藥學工作。E-mail：taidi1127@126.com

（2016-01-29

2016-04-25）