女性生殖道解脲支原體感染狀況及其分群價值的研究

錢迎芬

(昆山市第四人民醫院 檢驗科,江蘇 昆山215331)

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女性生殖道解脲支原體感染狀況及其分群價值的研究

錢迎芬

(昆山市第四人民醫院 檢驗科,江蘇 昆山215331)

目的 探討女性生殖道解脲支原體感染狀況以及分群對女性生殖健康的意義。方法 選取擬診斷為陰道炎或者非淋菌性尿道炎患者220例作為病例組，選用健康查體者200例作為對照組，觀察兩組解脲支原體感染情況以及分群價值。結果 ①病例組中檢測到Uu陽性患者79例，陽性率為35.9%；對照組檢測到Uu陽性為62例，陽性率為31.0%，兩組受檢者Uu陽性率差異無統計學意義(P>0.05)；②病例組中生物1群占72.2%，生物2群占24.1%，對照組生物1群占83.9%，生物2群占9.7%，兩組患者生物1群和生物2群各自所占比例差異有統計學意義(P<0.05)。感染后18 h、24 hUu2群明顯高于Uu1群和對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。結論 女性生殖道解脲支原體感染與亞群比例出現異常有關，生物2群具有毒性作用，臨床上進行分群有利于對解脲支原體感染進行診斷。

解脲支原體；亞群；女性；生殖道;感染

(ChinJLabDiagn,2016,20:1706)

在眾多支原體感染中，解脲支原體(Uu)感染是泌尿生殖道感染最常見的種類[1]。目前臨床上應用多克隆技術鑒定出Uu有近十多個血清型，但是其生物學特性不盡相同[2]。根據分子生物特性不同，UU在臨床上可分為2個生物群。本研究通過對女性生殖道解脲支原體感染狀況和兩種生物群不同毒性分析，探討分型對女性生殖健康的影響，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年1月至2015年1月在我院泌尿外科、婦科、皮膚性病科進行診斷，初次擬診斷為陰道炎或者非淋菌性尿道炎患者220例作為病例組，年齡22-54歲，平均年齡(38.4±10.4)歲；平均孕次(2.17±1.02)次，平均產次(0.52±0.23)次，月經周期(30.28±4.08)天；納入標準：①患者月經周期規律，行婦科檢查以及B超檢查未發現子宮卵巢異常；②基礎體溫測定或B超監測3個周期有排卵；③排除滴蟲性以及霉菌性陰道炎。對照組選擇健康查體者200例，年齡23-55歲，平均年齡(37.6±9.8)歲；平均孕次(2.33±1.08)次，平均產次(0.47±0.21)次，月經周期(29.84±4.12)天。兩組患者年齡、孕次、產次、月經周期差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 采集及檢驗方法 在患者宮頸處應用無菌拭子插入宮頸內口1-2 cm，旋轉1周，取2次分泌物，一份用于做Uu培養，一份用于PCR檢測。液體培養基配方為20萬U/ml青霉素0.5 ml、10% L-半胱氨酸鹽酸鹽0.5 ml、10%尿素2 ml、馬血清20 ml、0.4%粉紅0.5 ml、2PLO培養基2.1 g、5%酵母浸液10 ml；固體培養基則在液體培養基基礎上加入1.5 g瓊脂粉制作而成。待培養基出現經典“油煎蛋樣菌落”則為陽性[3]。陽性標本則放置在-20℃冰箱備用。提取陽性培養基培養的Uu DNA，運用PCR檢測手段，根據Uu的MB基因設計，通用引物序列為UMS-125:5′-GTA TTT GCA ATC TTT ATA TGT TTT CG-3′;UMA-226:5′-FAM-CAG CTG ATG TAA GTG CAG CAT TAA ATT C-3′。生物1群特異性DNA片段序列為UMS51:5′-TTC TGG GCT ATG ACA TTA GGT GTT ACC-3′;UMA427:5′-ACC TGG TTG TGT AGT TTC AAA GTT CAC-3′，擴增物大小為403/404 bp。生物2群的特異性DNA片段序列為UMS-170:5′-GTA TTT GCA ATC TTT ATA TGT TTT CG-3′;UMA263:5′-TTT GTT GTT GCG TTT TCT G-3，擴增物片段大小為448 bp。細胞培養和刺激實驗：單核細胞株(THP-1)培養用含10%胎牛血清的RPMI-1640，在細胞生長對數期進行細胞收集。將細胞接種于6孔板中(接種密度105個/ml)，用無血清的RPMI-1640培養24小時后，進行Uu的刺激試驗。需要進行孵育的濃度為105CCU/ml。每個濃度做三個復孔。在Uu感染細胞6 h、12 h、18 h和24 h進行觀察。巨噬細胞移動抑制因子(MIF)檢測選用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法，試劑盒為美國R&D公司，具體操作按說明書進行。

2 結果

2.1 兩組受檢者Uu陽性率對比 本研究所選的220例患者中，檢測到Uu陽性患者79例，陽性率為35.9%；對照組100例受檢者中，檢測到Uu陽性為62例，陽性率為31.0%，兩組受檢者Uu陽性率差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2Uu分群及陽性率對比 本研究病例組中感染Uu的79例患者中，生物1群共57例，占72.2%；生物2群共19例，占24.1%；混合感染者共3例，共占3.8%。對照組中Uu陽性的62例受檢者中，生物1群共52例，占83.9%；生物2群共6例，占9.7%，混合感染共4例，占6.5%。兩組患者生物1群和生物2群各自所占比例差異有統計學意義(P<0.05)。

2.3 病例組中不同生物群感染THP-1細胞的MIF表達 感染后6h、12h三組間MIF濃度差異無統計學意義(P>0.05)；感染后18h、24hUu2群明顯高于Uu1群和對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，而Uu1群與對照組差異無統計學意義(P>0.05)。

表1 病例組中不同生物群感染THP-1細胞的MIF表達

注：與其他兩組相比，*P<0.05

3 討論

解脲支原體是一種寄生在人類泌尿生殖道中的微生物，具有強烈的致病力，能引起患者出現急性輸卵管炎、尿道炎和子宮內膜炎等疾病，導致患者出現習慣性流產、不孕不育和死胎[4]。有研究認為Uu是條件性致病菌，當患者因環境改變或者自身免疫低下時，原本鑲嵌在細胞表面的Uu會通過其特殊的頂端粘附結構緊緊黏附在細胞表面，然后釋放NH3和過氧化物等毒性代謝產物，從而導致細胞損傷和炎性反應[5]。本研究發現，病例組和對照組Uu檢測陽性率差異無統計學意義，說明作為一種條件致病菌，憑檢測是否存在Uu來判定患者為解脲支原體感染是不可能的，這對解脲支原體感染的診斷和治療帶來了困難。目前臨床上根據不同亞型的Uu的生物學特性，將Uu分為生物1群和生物2群。其中生物1群包括基因型1、基因型3和基因型6，其對應的血清型分別為1、(3、14)和6，生物2群則包括基因型4(血清型4、7、10、11、12、13)和基因型8(血清型2、5、8、9)[6]。研究認為，不同生物群代表毒性不同，通常具有毒性的為生物2群，其在正常女性生殖系統所占比例較小，因此不會出現病理特征[7]。有研究通過采用病例對照研究，在特發性早產的婦女和健康女性子宮頸取樣本進行檢測發現，出現早產的女性Uu生物2群所占比例為43%，而健康女性只有5%，猜測生物2群能夠導致產婦出現早產[8]。也有研究發現，在性服務者生殖系統中，Uu生物2群所占比例大概為正常女性的5倍，這可能為其容易出現生殖系統疾病的原因[9]。本研究顯示，在感染Uu患者中，生物2群所占比例明顯高于正常對照組，驗證了上述觀點。

MIF是一種引起遲發性超敏反應的細胞因子，參與體內大多數的免疫應答和炎性反應，主要由單核巨噬細胞分泌。當巨噬細胞受到刺激后，大量分泌MIF，促進其在炎癥局部浸潤增生，并增強巨噬細胞分泌其他炎性因子[10]。而Uu感染能夠激活并刺激巨噬細胞分泌MIF，機制主要為MIF能夠阻止糖皮質激素對NF-kβ的結合，使NF-kβ進入細胞核結合DNA促進大量炎性因子的合成。本研究顯示，在感染18 h后，Uu2群能夠明顯刺激單核巨噬細胞分泌MIF，而Uu1群感染后巨噬細胞分泌MIF與對照組差異無統計學意義，說明Uu生物2群具有毒性作用，生物1群不具備毒性作用。

綜上所述，解脲支原體感染是由于外界因素導致其亞群比例出現異常，導致具有毒性作用的生物2群大量繁殖，從而引起患者炎性反應。

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Study on the status and value of clustering of Ureaplasma urealyticum infection in female genital tract

QIANYing-fen.

(DepartmentofClinicalLaboratory,theFourthPeople′sHospitalofKunshan,Kunshan215331,China)

Objective To explore the significance of female genital tract Ureaplasma urealyticum infection and clustering of female reproductive health.Methods Selected vaginitis or non gonococcal urethritis patients 220 cases as case group,Selected 200 healthy persons as control group,Observe two groups of Ureaplasma urealyticum infection and group value.Results 79 cases of Uu positive patients to the detection of cases,the positive rate was 35.9%;The control group detected 62 cases were Uu positive,the positive rate was 31%,There was no significant difference of Uu positive rate in two groups of subjects (P>0.05); The case group in biovar 1 accounted for 72.2%,accounted for 24.1% of the 2 biological group,The control group of 1 biological group accounted for 83.9%,accounted for 9.7% of the 2 biological group,Two groups of patients with 1 groups and 2 groups of biological organisms their proportions were statistically significant (P<0.05).After infection,the 24hUu2 and 18h groups were significantly higher than the Uu1 group and the control group,the difference was statistically significant (P<0.05).Conclusion Female genital tract Ureaplasma urealyticum infection and abnormal related subsets,Biological 2 groups have toxic effect,The clinical grouping is conducive to the diagnosis of Ureaplasma urealyticum infection.

Ureaplasma urealyticum;subgroup;female;reproductive tract;infection

1007-4287(2016)10-1706-03

R711.31

A

2015-07-08)