鉤吻的指紋圖譜

2016-11-18 11:46:30諶賽男王河山曾靖舒周也蒞雷仙武吳水生

福建中醫(yī)藥 2016年5期

諶賽男，王河山，曾靖舒，周也蒞，雷仙武，吳水生

（福建中醫(yī)藥大學藥學院，福建福州350122）

鉤吻的指紋圖譜

諶賽男，王河山，曾靖舒，周也蒞，雷仙武，吳水生

（福建中醫(yī)藥大學藥學院，福建福州350122）

鉤吻；指紋圖譜；高效液相色譜法

鉤吻Gelsemium elegans Benth.是馬錢科胡蔓藤屬植物，其主要化學成分為吲哚類生物堿［1］，目前多采用鉤吻素子和鉤吻素甲作為藥材的質量控制指標［2-3］，不能完全反映藥材中其它成分的情況。指紋圖譜是評價藥材質量的有效方法，我們對16批不同產地的鉤吻藥材進行考察，以建立鉤吻的HPLC指紋圖譜，為鉤吻的質量控制提供實驗依據(jù)。

1　儀器與試藥

1.1儀器Agilent Technologies 1260高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；Agilent Chem Station工作站、CPA225D型十萬分之一分析天平（德國Sartorius公司）；KQ-500E型臺式超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；DFY－500型中藥粉碎機（溫嶺市林大機械有限公司）；Milli－Q超純水儀（美國Millipore公司）。

1.2試藥鉤吻素子、胡蔓藤堿乙對照品（北京市賽百草科技有限公司）；甲醇、乙腈（德國Merck公司，色譜純）；甲酸（阿拉丁試劑上海有限公司，色譜純）；其它試劑為分析純。

1.3藥材16批鉤吻樣品產地信息見表1。經福建中醫(yī)藥大學藥學院范世明高級實驗師鑒定為馬錢科胡蔓藤植物鉤吻Gelsemium elegans Benth.的干燥根莖。不同產地鉤吻曬干，粉碎，過40目篩，備用。

表1　鉤吻樣品產地

2　方法與結果

2.1色譜條件色譜柱：Agilent ZORBAX Bonus-RP Analytical柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相：甲醇（A）-0.1%甲酸水（B），按表2進行梯度洗脫；檢測波長：254 nm；柱溫：30℃；進樣量：10μL。

表2　梯度洗脫條件%

2.2對照品溶液制備稱取鉤吻素子對照品11.60 mg、胡蔓藤堿乙10.10 mg，分別置于50 mL瓶中，用50%甲醇稀釋到刻度，搖勻，得到232、202μg／mL的混合對照品貯備液。吸取混合對照品貯備液200 μL至5 mL瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，得到濃度為9.28、8.08μg／mL的鉤吻素子、胡蔓藤堿乙的混合對照品溶液。

2.3供試品溶液制備稱取鉤吻粉末0.2 g，過40目篩，置具塞錐形瓶中，加50%甲醇水（含0.1%甲酸）25 mL，密塞，稱定重量，超聲提取30 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇水（含0.1%甲酸）補足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液，0.45μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4方法學考察

2.4.1精密度試驗取同一批次鉤吻樣品（S16），按2.1項色譜條件連續(xù)重復進樣5次檢測，以胡蔓藤堿乙（11號峰）為基準峰計算各共有色譜峰相對保留時間RSD＜0.18%，相對峰面積RSD＜2.54%，表明儀器精密度良好。

2.4.2重復性試驗取產地S16鉤吻樣品6份，按2.3項方法制備供試品溶液，以11號峰為基準峰計算各共有色譜峰相對保留時間RSD＜0.13%，相對峰面積RSD＜3.11%，表明方法重復性良好。

2.4.3穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液（S16）于0、2、4、8、10、12、24 h進樣測定，以11號峰為基準峰計算共有色譜峰相對保留時間RSD＜0.21%，相對峰面積RSD＜3.15%，表明供試液在24 h內穩(wěn)定。2.5指紋圖譜的建立根據(jù)2.1項色譜條件，對16批鉤吻樣品進行檢測，將測定數(shù)據(jù)導入中國藥典委員會推薦使用的中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件（2004A），設定S16色譜圖為參照圖譜，利用中位數(shù)法，時間窗寬度設置0.2，多點校正后進行峰自動匹配，計算生成對照譜圖，生成的對照圖譜和峰自動匹配后的HPLC指紋圖譜見圖1。

比較各樣品色譜圖，標定了17個共有峰，以11號峰為基準峰，計算各樣品共有峰的相對保留時間和相對峰面積，結果見表2、表3。共有峰面積占所有峰面積的百分比為75.43%～89.77%。16批樣品相似度計算結果見表4。