高效液相色譜法測(cè)定濃香型白酒中乳酸的含量

李斌 王穎

摘要 [目的]建立測(cè)定濃香型白酒中乳酸含量的HPLC方法。[方法]采用Agilent SB-C18柱（4.6×150 mm2，5 μm）色譜柱，0.005 mol/L H2SO4溶液為流動(dòng)相，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量20 μL。[結(jié)果]乳酸在1～12 mg/mL的濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系（R2=0.999 8），平均回收率為99.36%（RSD=0.066%），最低檢出限為0.009 mg/mL。[結(jié)論]此方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速，適用于濃香型白酒中乳酸的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞 濃香型白酒；乳酸；含量測(cè)定；高效液相色譜法

中圖分類號(hào) S571.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2016）04-0291-02

Determination of Lactic Acid Content in Chinese Strong Aromatic Spirits by HPLC

LI Bin WANG Ying

（College of Biological and Chemical Engineering，Nanyang Institute of Technology，Nanyang Henan 473004）

Abstract [Objective]To establish a HPLC method for the determination of the lactic acid content in Chinese strong aromatic spirits.[Methods]An Agilent SB-C18 column（4.6×150 mm2，5 μm） was used with sulfate acid as the mobile phase at a concentration of 0.005 mol/L. The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wave length was 210 nm.The temperature of the column was 35 ℃ and the sample amount was 20 μL.[Results]There was a good linear relationship between the concentration of lactic acid within 1～12 mg/mL and the peak area（R2=0.999 8）.The average recovery rate was 99.36%（RSD=0.066%）.The lowest detection limit was 0.009 mg/mL.[Conclusion]This method could be accurate，simple，quick and suitable for the determination of lactic acid in Chinese strong aromatic spirits.

Key words Chinese strong aromatic spirits；lactic acid；content determination；HPLC

酸類物質(zhì)是白酒中重要的呈香呈味物質(zhì)，在白酒微量芳香成分中占很大比例，尤其對(duì)濃香型白酒的口感影響較大，同時(shí)酸類也是形成酯類的前體物質(zhì)，有機(jī)酸在白酒中含量的高低直接影響酒質(zhì)的好壞。乳酸在濃香型白酒酸類物質(zhì)中占有相當(dāng)大的比重，因此對(duì)乳酸進(jìn)行定量分析對(duì)白酒的勾兌以及生產(chǎn)工藝的控制都有十分重要的意義[1-3]。目前，白酒中乙酸、丙酸、丁酸、己酸等有機(jī)酸可以利用氣相色譜儀分析，但是由于乳酸在FID上沒有響應(yīng)，因此在氣相色譜儀上直接進(jìn)樣不能分析白酒中的乳酸。利用高效液相色譜儀直接進(jìn)樣，可快速、準(zhǔn)確地分析出白酒中乳酸的含量，同時(shí)彌補(bǔ)了氣相色譜儀不能直接分析乳酸的缺點(diǎn)[4]。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

52°賒店老酒元青花：購于當(dāng)?shù)爻校蝗樗針?biāo)準(zhǔn)品：購于Sigma公司；自制超純水；H2SO4（分析純）開封開化有限公司試劑廠。

1.2 儀器與設(shè)備

L-7400日本日立公司；UV-VIS檢測(cè)器；Agilent SB-C18柱（4.6×150 mm2，5 μm）；自動(dòng)進(jìn)樣器；化學(xué)工作站；微孔濾膜（0.45 μm，25 mm）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 色譜條件。柱溫35 ℃。流動(dòng)相：0.005 mol/L H2SO4溶液。使用前用0.45 μm的微孔濾膜過濾。流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，進(jìn)樣量20 μL[5]。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。準(zhǔn)確稱取一定量的乳酸標(biāo)準(zhǔn)，用流動(dòng)相溶解并定容于10 mL容量瓶中，配成乳酸標(biāo)準(zhǔn)液，然后進(jìn)行稀釋，分別配成1、2、3、6、9、12 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。上機(jī)前以0.45 μm的微孔濾膜過濾。

1.3.3 精密度試驗(yàn)。取乳酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖，以主成分的峰面積計(jì)算RSD。

1.3.4 重復(fù)性試驗(yàn)。取同批酒樣，連續(xù)取6份，測(cè)定乳酸的含量。

1.3.5 回收率試驗(yàn)。分別向已知乳酸濃度的酒樣中加入高、中、低3種濃度的乳酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖[6]。

2 結(jié)果與分析

2.1 乳酸色譜測(cè)定分析

2.2 線性關(guān)系

以乳酸標(biāo)準(zhǔn)品濃度（X，g/L）為橫坐標(biāo)，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，計(jì)算得回歸方程為：

Y=532 942X-480 310（R2=0.999 8）。表明乳酸在1～12 mg/mL的范圍內(nèi)濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.3 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

取同批酒樣，連續(xù)取6份，測(cè)定乳酸的含量。結(jié)果分別為0.138%、0.140%、0.141%、0.139%、0.137%、0.143%，平均含量為0.140%，RSD為1.5%。

2.5 回收率的測(cè)定

為了考察測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，進(jìn)行了回收率的測(cè)定，結(jié)果見表2。可以看出，平均回收率為99.36%，RSD為0.066%。回收率在99.30%～99.43%之間，RSD小于2%，說明該方法測(cè)定結(jié)果比較可靠。

2.6 最低檢出限的測(cè)定

用乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行逐步稀釋后，進(jìn)行HPLC分析，以3倍信噪比計(jì)算最低檢出限為0.009 mg/mL。

3 結(jié)論與討論

高效液相色譜儀法檢測(cè)濃香型白酒中乳酸的含量，速度快，檢測(cè)樣品濃度范圍寬，精密度和準(zhǔn)確度都很高，高效液相色譜儀和氣相色譜儀相結(jié)合可以對(duì)白酒中有機(jī)酸含量進(jìn)行全面分析，對(duì)科學(xué)指導(dǎo)白酒生產(chǎn)有重要意義。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 原小寓，于泓，董影杰，等.白酒中乳酸的離子排斥色譜-直接電導(dǎo)檢測(cè)分析[J].食品科學(xué)，2011，32（12）：188-190.

[2] 李維青.濃香型白酒與乳酸菌、乳酸、乳酸乙酯[J].釀酒，2010，37（3）：90-93.

[3] 鎮(zhèn)達(dá)，姚惟琪，錢志偉，等.濃香型白酒發(fā)酵中乳酸含量動(dòng)態(tài)變化與相關(guān)微生物研究[J].中國(guó)釀造，2009，12（12）：32-34.

[4] 馮向東.高效液相色譜法測(cè)定白酒中乳酸和乙酸含量[J].釀酒科技，2009，5（5）：115-116.

[5] 鄭志，姜紹通，潘麗軍.EDTA定鈣法測(cè)定發(fā)酵液中乳酸含量的探討[J].分析檢驗(yàn)，2003，24（3）：102-105.

[6] 王柳，呂嘉櫪，沈文.HPLC法分析酸奶發(fā)酵過程中的有機(jī)酸[J].食品工業(yè)，2014，35（4）：197-200.