糞大腸菌群酶底物法在環(huán)境監(jiān)測中的應(yīng)用研究

殷惠　陳志芳　馬德高

【摘 要】在水體污染監(jiān)測中糞大腸菌群為其指示菌，對現(xiàn)階段水質(zhì)檢測有著重要的作用。因此，在進行水質(zhì)檢測是選擇出快速、準(zhǔn)確的糞大腸菌群檢測方法對于有效的方式疾病的發(fā)生于傳播有著關(guān)鍵性的意義。本文簡要介紹了酶底物法，并與與其他方法進行了比較，然后分析了酶底物法的應(yīng)用及其前景，相信隨著酶底物法不斷推廣而具有更廣闊的應(yīng)用范圍。

【關(guān)鍵詞】糞大腸菌群 酶底物法 環(huán)境監(jiān)測 應(yīng)用研究

糞大腸菌群能夠在45℃左右的環(huán)境中生存，產(chǎn)氣產(chǎn)酸，其主要來源于人和動物的糞便，能夠?qū)е履c道性疾病的傳播，是進行水質(zhì)檢測的重要指標(biāo)，所以，更好的優(yōu)化糞大腸菌群檢測有著較為重要的醫(yī)學(xué)意義。其中酶底物法為現(xiàn)階段糞大腸菌群檢測的新型方法之一，具有快速、精確及可靠的檢測優(yōu)勢，能夠及時的將水體的污染情況反應(yīng)出來。

1 酶底物法解析

1.1 酶底物法介紹

酶底物法為利用糞大腸菌群在45℃左右生長過程中產(chǎn)生的半乳糖苷酶與葡萄糖醛酸酶，分解培養(yǎng)基中所含的葡萄糖醛酸與半乳糖苷，從而使整個培養(yǎng)基呈現(xiàn)出黃色與發(fā)生熒光反應(yīng)，根據(jù)最終的陽性組合，查閱MPN表而得出糞大腸菌群的數(shù)量。

在實際操作的過程中，檢測人員首先應(yīng)當(dāng)根據(jù)污染的程度對需檢測的水樣進行適當(dāng)性的稀釋，然后取100ml的水樣加入到無菌瓶中，再向其中加入科立得，搖勻，然后將其倒入97孔定量盤中，放置于45℃的培養(yǎng)箱中，連續(xù)培養(yǎng)24小時，最后根據(jù)實際的陽性孔數(shù)，通過查MPN表進行計算。

1.2酶底物法與其他方法比較

現(xiàn)階段我國使用的糞大腸菌群檢測方法主要為國外早期使用的實驗方法—濾膜法和MPN法為主，同時隨著現(xiàn)代化生物監(jiān)測技術(shù)的發(fā)展，紙片法、分子生物鑒定法及固定酶底物法在很多方面得到一定的應(yīng)用，各種方法比較如表1所示。

從糞大腸菌群檢測的實驗操作方面來講，酶底物法采用了取藥封口的培養(yǎng)方式，相對于其他檢測方面過程較為簡單，降低了人為污染帶來的影響，特別是紙片法，其操作過程雖然也較為簡單，但是其操作過程中交易受到人為的污染，此外還需要進行確認(rèn)實驗。其次，從實驗的結(jié)果方面來分析，酶底物法使用的97孔定量盤所包含的數(shù)表能夠達到近2400組，遠遠大于其他檢測方法，因此其檢測的結(jié)果更為準(zhǔn)確。第三，酶底物法使用了酶技術(shù)對糞大腸菌群進行了檢測，出現(xiàn)假陽性與假陰性的現(xiàn)象非常少，這在很大程度上能夠提升糞大腸菌群檢測的準(zhǔn)確性。

2酶底物法的應(yīng)用

糞大腸菌群為一種衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)，在很多行業(yè)內(nèi)均有著較為嚴(yán)格的要求，其中酶底物法在糞大腸菌群檢測標(biāo)準(zhǔn)中的應(yīng)用如表2所示。

從上表2中可以看出，現(xiàn)階段我國對糞大腸菌群的檢測標(biāo)準(zhǔn)多數(shù)情況下為發(fā)酵法，并沒有對酶底物法進行規(guī)定性使用，由此可知，在今后進行糞大腸菌群的檢測時，將酶底物法應(yīng)用到糞大腸菌群的檢測試驗中，在很大程度上能夠彌補我國在糞大腸菌群檢測方面使用酶底物法的空白，同時在很多程度上也為更好的提升我國糞大腸菌群的檢測的準(zhǔn)確性打下了良好的基礎(chǔ)。

3酶底物法應(yīng)用前景

酶底物法相對于其他的糞大腸菌群檢測方法操作較為簡單，所得結(jié)果也較為準(zhǔn)確快速，在今后的環(huán)境監(jiān)測中有著較為廣泛的應(yīng)用前景，主要表現(xiàn)在如下方面：

首先糞大腸菌群檢測為我國環(huán)境監(jiān)測的主要衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)之一，具有非常重要的實際檢測意義，因此，在進行糞大腸菌群檢測時采用酶底物法能夠有效的滿足檢測應(yīng)用的需求。

其次，現(xiàn)階段國內(nèi)使用的糞大腸菌群檢測方法較為傳統(tǒng)，實際的操作流程較為繁瑣，所需的檢測時間較長，一般在48小時到72小時才能獲得糞大腸菌群的檢測結(jié)果，并對檢測條件、檢測技術(shù)人員水平等方面有著較高的要求，在進行水樣的保存時也往往較為苛刻，這在很大程度上限制了傳統(tǒng)的糞大腸菌群檢測方法在我國中西部地區(qū)的使用，直接的影響到我國中西部地區(qū)衛(wèi)生檢測的效果。

第三，糞大腸菌群在檢測時使用酶底物法能夠較為迅速、準(zhǔn)確及可靠的將結(jié)果檢測出來，同時所需的玻璃器皿也不需要進行清洗，檢測環(huán)境要求也不高，一般均不需要在無菌的環(huán)境中進行，也不需要進行培養(yǎng)基的專門配置，在24小時內(nèi)進行定量的檢測，這在很大程度上降低了糞大腸菌群的檢測所需的工作量，同時可以避免使用多管法時逐級稀釋帶來的操作誤差，也避免了使用濾膜法時肉眼讀數(shù)的人為誤差，能夠較為準(zhǔn)確地判斷水樣的污染狀況。

第四，國內(nèi)現(xiàn)階段使用的糞大腸菌群檢測標(biāo)準(zhǔn)并沒有對酶底物法的使用進行針對性的規(guī)定，但是在國外特別是西方的發(fā)達國家內(nèi)，酶底物法在糞大腸菌群的檢測中已經(jīng)得到了較為廣泛的應(yīng)用，并取得了較好的效果，國際上各個組織機構(gòu)已經(jīng)認(rèn)可了酶底物法在檢測糞大腸菌群的作用，因此，國內(nèi)在進行糞大腸菌群的檢測時也應(yīng)當(dāng)順應(yīng)時代的需求，認(rèn)清時代所處的位置，針對性的將酶底物法嵌入到我國糞大腸菌群的檢測工作中，從而更好的完善我國糞大腸菌群的檢測方法，提升我國糞大腸菌群檢測的準(zhǔn)確性。

4結(jié)語

酶底物法在進行糞大腸菌群的檢測時，根據(jù)糞大腸菌群特異性酶針對性的與特異性物質(zhì)產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)，從而得到熒光與顏色的變化作為糞大腸菌群的檢測依據(jù)，整個操作的過程非常簡單，結(jié)果也較為清晰，直觀，客觀性也較強。現(xiàn)階段影響酶底物法應(yīng)用的主要因素為其檢測過程中使用的培養(yǎng)基現(xiàn)階段只有國外的生產(chǎn)商生產(chǎn)，因此，使用該方法時所需的檢測費用較高，這在很大程度上也是由于酶底物法在國內(nèi)現(xiàn)階段并沒有得到廣泛的推廣而導(dǎo)致的，因此，隨著酶底物法在我國糞大腸菌群檢測中的不斷應(yīng)用，其所需的檢測成本必然會大幅度的降低，使其具有更廣闊的應(yīng)用范圍和前景，作為評價水質(zhì)微生物污染的快速標(biāo)準(zhǔn)檢測方法在日常監(jiān)測和應(yīng)急監(jiān)測中發(fā)揮重要作用。

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