石榴籽油對去卵巢大鼠骨質代謝的影響

許文勝 張 濤 康文磊 陳永軍 楊增華

(包頭醫學院第一附屬醫院骨三科，內蒙古 包頭 014010)

?

石榴籽油對去卵巢大鼠骨質代謝的影響

許文勝 張 濤 康文磊 陳永軍 楊增華

(包頭醫學院第一附屬醫院骨三科，內蒙古 包頭 014010)

目的 探討石榴籽油對去卵巢大鼠骨質代謝的影響。方法 50只3月齡SPF級雌性SD大鼠隨機分為假手術組、去卵巢組、己烯雌酚組、低石榴籽油組和高石榴籽油組，每組10只。假手術組保留卵巢，其余組則將雙側卵巢去除，已烯雌酚組每天用100 μg/kg己烯雌酚灌胃，低石榴籽油組和高石榴籽油組每天分別給予石榴籽油0.95 g/kg和1.27 g/kg劑量灌胃。對大鼠血清鈣(Ca)、磷(P)含量以及堿性磷酸酶活性(ALP)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平進行檢測，并對下頜骨、股骨中段和遠心端骨密度進行檢測。結果 與去卵巢組相比，己烯雌酚組、低石榴籽油組和高石榴籽油組大鼠血清Ca、P含量及ALP活性均降低，低石榴籽油組和高石榴籽油組大鼠血清SOD水平升高，而MDA水平降低(P<0.05)；與己烯雌酚組相比，低石榴籽油組大鼠血清Ca、P和SOD含量升高，而MDA含量降低，高石榴籽油組大鼠血清SOD含量升高，而MDA降低(P<0.05)；與去卵巢組相比，己烯雌酚組、低石榴籽油組和高石榴籽油組大鼠下頜骨、股骨中點和股骨遠端骨密度均升高(P<0.05)。結論 補充石榴籽油可有效降低去卵巢大鼠骨質轉化活性，抑制骨密度降低，而這種作用可能與石榴籽油雌激素作用及抗氧化作用有關。

石榴籽油；去卵巢；骨質代謝

絕經后骨質疏松(PMOP)是好發于絕經后婦女的常見代謝性骨病，臨床上以骨量減少、骨微結構破壞為主要特征，是導致絕經后婦女骨折及骨脆性增加的主要因素〔1〕。研究表明，PMOP的發生與更年期后卵巢功能減退有關，雌激素分泌減少可影響血鈣代謝，使骨組織中的鈣大量游離而導致骨量丟失引起骨質疏松〔2〕。臨床上曾用雌激素替代療法治療及預防PMOP的發生，但雌激素具有一定的副作用〔3〕，限制了其應用。石榴籽油是從石榴籽中提取的天然油脂，主要成分是多不飽和脂肪酸，有研究指出〔4〕，石榴籽的石榴醚提取物和非皂化物質具有較強的雌激素活性，且能被黃體酮所拮抗。但關于石榴籽油在防治骨質疏松方面的研究少有報道。本研究觀察石榴籽油對大鼠骨質代謝的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及試劑 選取3月齡SPF級雌性SD大鼠50只，河南省實驗動物中心提供〔合格證號SCXK(豫)2012-0005〕，體重(210±10)g。石榴籽油由南海市華神花粉有限公司提供，其中含石榴酸69.7%；己烯雌酚片(0.5 mg/片)購自江西南昌制藥有限公司。根據AIN93配方配制半成品飼料，為避免大豆異黃酮等植物雌激素的影響，將飼料中的大豆餅換成菜粕；AU5800全自動生化分析儀購自美國貝克曼庫爾特公司，AA-7020型原子吸收分光光度計購自北京東西分析儀器有限公司，BH6012二維掃描單光子骨密度儀購自中國核工業總公司北京核儀器廠。

1.2 方法

1.2.1 建模分組及處理 所有大鼠適應性喂養7 d后隨機分為假手術組、去卵巢組、己烯雌酚組、低石榴籽油組和高石榴籽油組，每組10只。利用0.8%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，假手術組采用背側切開將卵巢周圍約3 g脂肪組織去除，保留卵巢，其余40只大鼠則將雙側卵巢組織去除。術后7 d以后，雌二醇組每天上午8時用100 μg/kg己烯雌酚灌胃，低石榴籽油組和高石榴籽油組每天上午8時分別給予石榴籽油0.95 g/kg和1.27 g/kg灌胃。各組大鼠均在相同條件下喂養，自由飲水和進食，每7 d稱重一次，以調整用藥劑量。

1.2.2 血標本收集及生化指標檢測 連續喂養90 d后將大鼠股動脈放血處死，取腹腔靜脈血6 ml，3 000 r/min離心10 min后取上清保存于-20℃冰箱以備檢。分別檢測大鼠血清鈣(Ca，鄰甲酚酞絡合銅酮直接比色法)和磷(P，紫外直接法)含量，以及堿性磷酸酶(ALP，比色法)活性、超氧化物歧化酶(SOD，比色法)和丙二醛(MDA，TAB法)水平。

1.2.3 骨密度檢測 取處死大鼠一側下頜骨及股骨，將軟組織去除后，用10%中性甲醛溶液固定后備檢。利用二維掃描單光子骨密度儀分別對下頜骨最后磨牙后1 mm、股骨中段和遠心端骨密度(g/cm2)進行檢測，精密度2%。

1.3 統計學處理 利用SPSS21.0軟件，多組間計量資料比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。

2 結 果

2.1 不同組大鼠血清生化指標變化情況 與假手術組相比，去卵巢組大鼠血清Ca、P和MDA含量及ALP活性均升高，而SOD含量降低(P<0.05)；與去卵巢組相比，己烯雌酚組、低石榴籽油組和高石榴籽油組大鼠血清Ca、P含量及ALP活性均降低，低石榴籽油組和高石榴籽油組大鼠血清SOD水平升高，而MDA水平降低(P<0.05)；與己烯雌酚組相比，低石榴籽油組大鼠血清Ca、P和SOD含量升高，而MDA含量降低，高石榴籽油組大鼠血清SOD含量升高，而MDA降低(P<0.05)，見表1。

2.2 不同組大鼠實驗前后體重變化情況 建模前各組大鼠體重無差異(P>0.05)。與假手術組相比，去卵巢組大鼠處死前體重及體重增長率均增加(P<0.05)，己烯雌酚組、低石榴籽油組和高石榴籽油組大鼠體重及體重增長率無差異(P>0.05)，見表2。

2.3 不同組大鼠下頜骨和股骨中段和遠心端骨密度情況 與假手術組相比，去卵巢組、己烯雌酚組、低石榴籽油組和高石榴籽油組大鼠下頜骨、股骨中點和股骨遠端骨密度均降低(P<0.05)；與去卵巢組相比，己烯雌酚組、低石榴籽油組和高石榴籽油組大鼠下頜骨、股骨中點和股骨遠端骨密度均升高(P<0.05)，見表3。

表1 不同組大鼠血清生化指標變化情況±s,n=10)

表2 不同組去卵巢大鼠體重變化情況±s,n=10)

與假手術組相比：1)P<0.05；與去卵巢組相比：2)P<0.05；與己烯雌酚組相比：3)P<0.05；下表同

表3 不同組大鼠下頜骨和股骨中段和遠心端骨密度

3 討 論

骨質疏松作為三大老年性疾病之一，具有較高的發病率，常給患者帶來疼痛等癥狀，嚴重影響患者生活質量，同時，亦是發生骨折的重要危險因素〔5〕。研究表明〔6〕，正常人體骨代謝過程中骨質形成和吸收處于動態平衡中，而骨質疏松患者則表現出破骨細胞活性增加，骨質吸收遠高于骨質形成，從而導致大量骨質流失。有研究指出，雌激素可作用于成骨細胞，可對糖皮質激素的抑制作用進行拮抗，促使成骨細胞生長，抑制了過多的Ca從骨骼中釋放〔7〕。本研究顯示，激素水平降低可導致大量的Ca、P從骨質中游離進入血液，從而使血清Ca、P濃度升高，骨密度降低。血清ALP是骨形成及轉換常用的評價指標，可反映骨形成的活躍程度〔8〕，去除卵巢大鼠血清ALP活性增加，提示由于骨吸收亢進而代償性骨形成增加。石榴籽油可與己烯雌酚發揮同樣的作用，減少了Ca和P從骨質中釋放，提高了大鼠骨密度；同時，ALP活性得到有效抑制，提示石榴籽油可能具有雌激素活性，可抑制ALP活性升高而改善骨質高轉化狀態〔9〕，從而抑制骨吸收。

有研究指出，氧化應激與骨質疏松的發生關系密切，每天攝入一定量的抗氧化劑將會顯著降低罹患骨質疏松的風險〔10〕。本研究顯示，去除卵巢大鼠氧自由基清除能力下降，發生氧化應激反應；石榴籽油可對去除卵巢大鼠體內氧化應激反應產生抑制作用，對氧自由基產生淬滅作用。同時，本研究顯示，補充石榴籽油并不會使去卵巢大鼠體重顯著增加，這可能與石榴籽油中主要以多不飽和脂肪酸為主有關〔11〕。

1 Tian J，Xu XJ，Shen L，etal.Association of serum Dkk-1 levels with β-catenin in patients with postmenopausal osteoporosis〔J〕.J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci，2015;35(2)：212-8.

2 Min YK.Update on denosumab treatment in postmenopausal women with osteoporosis〔J〕.Endocrinol Metab (Seoul)，2015;30(1)：19-26.

3 Miyauchi Y，Sato Y，Kobayashi T，etal.HIF1α is required for osteoclast activation by estrogen deficiency in postmenopausal osteoporosis〔J〕.Proc Natl Acad Sci U S A，2013;110(41)：16568-73.

4 Tran HN，Bae SY，Song BH，etal.Pomegranate (Punica granatum) seed linolenic acid isomers：concentration-dependent modulation of estrogen receptor activity〔J〕.Endocr Res，2010;35(1)：1-16.

5 Bernabei R，Martone AM，Ortolani E，etal.Screening，diagnosis and treatment of osteoporosis：a brief review〔J〕.Clin Cases Miner Bone Metab，2014;11(3)：201-7.

6 Golob AL，Laya MB.Osteoporosis：screening，prevention，and management〔J〕.Med Clin North Am，2015;99(3)：587-606.

7 Palacios S，Currie H，Mikkola TS，etal.Perspective on prescribing conjugated estrogens/bazedoxifene for estrogen-deficiency symptoms of menopause：A practical guide〔J〕.Maturitas，2015;80(4)：435-40.

8 Hegazy SK.Evaluation of the anti-osteoporotic effects of metformin and sitagliptin in postmenopausal diabetic women〔J〕.J Bone Miner Metab，2015;33(2)：207-12.

9 Liu Y，Liu H，Li M，etal.Association of farnesyl diphosphate synthase polymorphisms and response to alendronate treatment in Chinese postmenopausal women with osteoporosis〔J〕.Chin Med J (Engl)，2014;127(4)：662-8.

10 Manolagas SC.From estrogen-centric to aging and oxidative stress：a revised perspective of the pathogenesis of osteoporosis〔J〕.Endocr Rev，2010;31(3)：266-300.

11 Saravani M，Kazemi Mehrjerdi H，Mirshahi A，etal.Protective effects of pomegranate seed oil on ovariectomized rats as a model of postmenopausal osteoporosis：A multi-detector computed tomography evaluation〔J〕.Vet Res Forum，2014，5(4)：263-7.

〔2016-11-19修回〕

(編輯 李相軍)

內蒙古自治區自然科學基金項目(2014MS0812)；包頭市社會發展科技支撐項目(2014S2003-5-12)；內蒙古醫療衛生科研計劃項目(201302101)

許文勝(1972-)，男，碩士，副主任醫師，主要從事創傷骨科研究。

R68

A

1005-9202(2016)20-4956-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.20.007