營養瓊脂培養基制備新方法的建立

廖偉偉 （遼寧省錦州市動物疫病預防控制中心 121000）

營養瓊脂培養基制備新方法的建立

廖偉偉 （遼寧省錦州市動物疫病預防控制中心 121000）

為探討營養瓊脂培養基制備新方法。通用的普通營養培養基制備程序分為配料、加熱溶解、滅菌、矯正pH、分裝、檢定、保存等7個步驟。通過實踐，筆者發現在這些步驟中，加熱溶解和滅菌可以合二為一，提高培養基制備速度，具備9大優點。用兩種方法制備出來的培養基平板，進行平行藥敏試驗，觀察新方法制備的培養基質量和使用效果。結果：培養基快速制備方法能夠在提高效率的同時，保證培養基的質量，能夠運用到實踐工作中。

瓊脂培養基；制備；新方法；優點；試驗

在獸醫診療工作中，常常需要運用到藥敏試驗。就錦州市動物疫病預防控制中心禽病門診為例，天天都有用到培養基平板做藥敏試驗。由于需要大量的藥敏培養基平板，在長期的實踐工作中，筆者探索出了新的培養基制備方法。現將試驗過程總結如下。

1 材料與方法

1.1 器材與試劑

立式壓力蒸汽滅菌器 （YXQ-LS-30SⅡ（，上海博迅實業有限公司醫療設備廠產品。恒溫培養箱 （JKDP.360（，廈門醫療電子儀器廠產品。生物安全柜 （NU-437-400E（，美國Nuaire。試驗室pH計 （PHSJ-3F（，上海雷磁精密科學儀器有限公司產品。營養瓊脂粉 （批號20151005（，北京奧博星產品。冰箱、250ml生理鹽水玻璃瓶 （以下簡稱玻璃瓶（、棉繩、注射器針頭、無菌培養皿、封口塑料膜、天平、250ml量筒、自制藥敏片、蒸餾水。

1.2 試驗方法

同時用傳統方法和新方法各制備10個培養基平板。傳統方法制備的培養基平板編號為A，新方法制備的培養基編平板號為B。同時進行大腸桿菌藥敏試驗。

2 培養基制備新方法

2.1 配料

按照營養瓊脂粉說明書給出的比例稱量出干粉倒入250ml玻璃瓶中，倒入相應比例的純化水。然后蓋上瓶塞，再用塑料膜包裹整個玻璃瓶瓶口部分，用棉繩綁緊。最后劇烈震蕩，充分混合。瓶中的液體不要超過220ml，如果需要的量大，可以多配幾瓶。

2.2 加熱溶解與滅菌

（1（把玻璃瓶放入立式壓力蒸汽滅菌器中。用注射器6號針頭扎穿封口膜與瓶塞，針頭保留其中，使瓶中壓力與蒸汽滅菌器中的壓力同步。

（2（高溫可破壞培養基的營養成分，因此必須嚴格控制滅菌溫度和時間，并且不可重復滅菌[1]。在立式壓力蒸汽滅菌器中121.3℃滅菌15～20min。這個濕熱滅菌的過程包含了傳統的培養基加熱溶解的步驟。

（3（滅菌15～20min后，滅菌器自動停止加熱。這時候拔除電源，讓滅菌器自然冷卻減壓。1～2h后，壓力儀表顯示為0時可以打開放氣閥，排出殘余蒸汽，使滅菌器內外壓力一致時，帶棉布手套取出玻璃瓶，拔除注射器針頭。瓶中的培養基已經完全溶解，這時候需要注意反復倒置輕搖玻璃瓶20次，使里面的液態培養基充分均勻透明。

2.3 矯正pH值

培養基配方要求的pH值為滅菌或者消毒后的pH值，即培養基使用前的pH值[2]。把玻璃瓶轉移到無菌操作臺或者生物安全柜中，緩慢的打開瓶塞，用試驗室pH計進行測量，然后用無菌的1mol/L NaOH或1mol/L HCl矯正。

2.4 分裝

待矯正后的培養基冷卻至50℃左右就可以在無菌操作臺或生物安全柜中向培養皿中傾倒培養基了。倒入培養皿中的液態培養基要全部自然覆蓋培養皿的底部，厚度為3～5mm。

2.5 檢定

每批培養基平板制成后須經檢定方可使用，新制成的平板培養基，含水量較多，不利于藥敏試驗，應將冷卻凝固后的平皿倒扣擱置于37℃恒溫培養箱中，培養24h。24h后培養基平板沒有長菌才可以使用。

2.6 保存

檢定合格的培養基要轉移到無菌濕盒中保存，正面朝上擺放，然后一起放入2～8℃冰箱里保存。

3 大腸桿菌藥敏試驗

附表 A、B培養基平板藥敏試驗比較

在禽病門診采取10戶10只大腸桿菌病雞的肝臟，每份肝臟分別涂抹A、B培養基平板，貼上同樣的藥敏片，進行37℃培養24h。觀察A、B平板大腸桿菌生長情況。觀察同類型藥敏片在A、B平板上的抑菌效果。

4 結果

4.1 新方法制作的培養基

新方法制作的培養基淡茶色透明，質地均勻，無絮狀物或沉淀。藥敏試驗中培養基平板軟硬度適中不易劃破。細菌生長方面與傳統方法制作的培養基相比較無明顯差異。

4.2 大腸桿菌藥敏試驗結果

兩種方法制備的培養基均能讓大腸桿菌正常生長，并且不同的藥敏片在A、B兩種培養基平板上的抑菌效果差別不明顯，見附表。

5 討論

本文通過培養基平板藥敏試驗檢驗了培養基制備新方法的可行性，從而證明在普通營養瓊脂培養基制備方法可以運用該新方法。培養基制備新方法較傳統方法有九處優點，一是縮短了制備時間；二是減少了制備器材 （電爐、石棉網等（；三是有效防止加熱溶解過程中的燒焦和外溢事故；四是縮短了高溫時間，減少了高溫過程對培養基的營養破壞；五是可以批量制備，不像傳統方法一次只能加熱溶解一個燒杯；六是實現了儀器標準化，不會因人的技能水平差異或者個人行為的偶然性而導致不同批次的培養基質量差異；七是防止水分散失導致濃度變化；八是節省能源；九是防止電爐引起的燙傷甚至火災。

[1]劉榮華.微生物檢測中培養基的制備及注意事項[J].當代臨床醫刊,2015(1):1236.

[2]馬莉.淺談微生物試驗室培養基制備[J].現代測量與試驗室管理,2011(3):35-36.