血小板血型抗體與妊娠次數(shù)及復發(fā)性流產(chǎn)關系的研究

湯潔，趙瑩瑩，魏威，閆素文，張寧

（中國人民解放軍第202醫(yī)院優(yōu)生優(yōu)育研究所，遼寧 沈陽 110003）

血小板血型抗體與妊娠次數(shù)及復發(fā)性流產(chǎn)關系的研究

湯潔，趙瑩瑩，魏威，閆素文，張寧

（中國人民解放軍第202醫(yī)院優(yōu)生優(yōu)育研究所，遼寧 沈陽 110003）

目的：檢測血小板血型抗體在孕婦血清中的表達情況，分析其與妊娠次數(shù)及復發(fā)性流產(chǎn)的關系。方法：選擇2015年4月至12月，在解放軍第202醫(yī)院優(yōu)生優(yōu)育研究所進行產(chǎn)前檢查的100例初產(chǎn)婦、100例經(jīng)產(chǎn)婦（妊娠次數(shù)≥2次）及100例診斷為復發(fā)性流產(chǎn)患者為研究對象，收集其孕齡第16～28周的外周血血樣，利用固相凝集法檢測各組血清中血小板抗體的表達情況。結(jié)果：初產(chǎn)婦組、經(jīng)產(chǎn)婦組及復發(fā)性流產(chǎn)組分別檢測出血小板血型抗體陽性5、14和26例，卡方分析結(jié)果顯示妊娠次數(shù)及復發(fā)性流產(chǎn)發(fā)生率與血小板血型抗體陽性率呈顯著相關性（P＜0.05）。結(jié)論：采用固相凝集法篩查產(chǎn)前血小板血型抗體表達情況可為復發(fā)性流產(chǎn)提供診斷和治療依據(jù)。

血小板血型抗體；復發(fā)性流產(chǎn)；固相凝集法；產(chǎn)前篩查

復發(fā)性流產(chǎn)（recurrent spontaneous abortion，RSA）是指與同一性伴侶連續(xù)發(fā)生2次或2次以上妊娠并自然流產(chǎn)者。其病因復雜，包括遺傳因素、內(nèi)分泌因素、感染因素、內(nèi)生殖器官解剖異常以及自身免疫因素等，但仍有60%～80%的患者病因不明，稱為原因不明復發(fā)性流產(chǎn)。復發(fā)性流產(chǎn)發(fā)生機制復雜，生殖免疫學已成為闡述其發(fā)生發(fā)展的重要切入點［1］。母胎血小板血型不合的妊娠可使母體產(chǎn)生抗胎兒血小板抗體，導致胎兒血小板破壞，使胎兒或新生兒血小板數(shù)目減少，從而引發(fā)早期流產(chǎn)、新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜或復發(fā)性流產(chǎn)［2］。因此對適齡孕婦，特別是診斷為復發(fā)性流產(chǎn)患者產(chǎn)前進行血小板血型抗體的篩查及研究有著極其重要的作用。為進一步探討血小板血型抗體與復發(fā)性流產(chǎn)的關系，本研究采用固相凝集法，檢測了孕齡為16～28周的100例初產(chǎn)婦、100例經(jīng)產(chǎn)婦（妊娠次數(shù)≥2次）和100例復發(fā)性流產(chǎn)孕婦血清標本中血小板血型抗體的表達情況，及血小板血型抗體陽性率與妊娠次數(shù)及復發(fā)性流產(chǎn)的相關性。

1　資料與方法

1.1研究對象和標本采集選擇2015年4月至12月在解放軍第202醫(yī)院優(yōu)生優(yōu)育研究所就診的初產(chǎn)婦100例，年齡24～34歲；經(jīng)產(chǎn)婦100例（陽性對照），年齡26～38歲；復發(fā)性流產(chǎn)孕婦100例，年齡25～34歲。經(jīng)產(chǎn)婦組納入標準：（1）妊娠次數(shù)≥2次；（2）無不良妊娠史。復發(fā)性流產(chǎn)組納入標準：（1）妊娠28周前連續(xù)2次以上（含2次）自然流產(chǎn)；（2）流產(chǎn)原因為非胚胎遺傳因素、母體因素和胚胎異常因素。收集各組孕婦孕齡第16～28周的外周血，離心后收集血清標本。

1.2儀器與試劑固相凝集法血小板血型抗體檢測試劑盒和指示細胞購自長春博德生物技術(shù)有限責任公司，TXL-4平板式血小板專用低速離心機購自長沙湘智離心機儀器有限公司。

1.3實驗方法向反應孔中滴加50 μl血小板懸液，輕搖反應板約10 s。用平板式低速離心及以50×g離心5 min，使血小板固定在反應孔底部。倒出反應孔中液體，并用滴管滴加洗滌工作液清洗3次，最后一次洗滌后將反應板置于吸水紙上吸干殘余液體。而后立即向每個反應孔中滴加100 μl低離子強度溶液，并分別向反應孔中加入50 μl患者血清樣本、陽性對照及陰性對照。將反應孔用封口膠封好，輕搖混勻后置于濕盒中37℃水浴孵育30 min。取出已孵育完畢的反應板，棄去封口膠，洗滌反應板5次。立即加入50 μl抗人IgG及50 μl指示紅細胞，輕輕振蕩混勻。200×g離心5 min。將檢測孔與對照孔的結(jié)果進行比較，判讀并記錄檢測結(jié)果。

1.4結(jié)果判定陽性結(jié)果：指示紅細胞平鋪在反應孔底部表面，若指示紅細胞只結(jié)合到部分孔底，并且結(jié)合區(qū)域比陰性對照大為弱陽性，表明患者血清中含有血小板血型抗體。陰性結(jié)果：指示紅細胞在反應孔底部中央形成紅細胞聚集，表明患者血清不含血小板血型抗體。

1.5統(tǒng)計學分析采用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計學分析。計數(shù)資料相關性分析采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

初產(chǎn)婦、經(jīng)產(chǎn)婦及復發(fā)性流產(chǎn)孕婦血清中分別檢測出血小板血型抗體陽性例數(shù)、血小板血型抗體陽性率的具體結(jié)果見表1。初產(chǎn)婦與經(jīng)產(chǎn)婦血小板血型抗體陽性率差異有統(tǒng)計學意義（χ2= 4.711，P=0.030）；初產(chǎn)婦與復發(fā)性流產(chǎn)孕婦血小板血型抗體陽性率差異有統(tǒng)計學意義（χ2= 16.835，P＜0.01）。經(jīng)產(chǎn)婦與復發(fā)性流產(chǎn)孕婦血小板血型抗體陽性率差異有統(tǒng)計學意義（χ2=4.500，P=0.034），見表1。

表1　3組孕婦血小板血型抗體陽性率比較

3　討論

妊娠是一個復雜而又協(xié)調(diào)的過程，從免疫學角度看，正常妊娠過程中母體對胚胎半同種異體抗原表現(xiàn)為妊娠免疫耐受狀態(tài)。而自然流產(chǎn)則是多種原因?qū)е履柑ソ缑婷庖吣褪苁Ш獾慕Y(jié)果。目前認為復發(fā)性流產(chǎn)與母胎界面免疫耐受失衡導致的母胎免疫排斥密切相關，除此之外母胎界面過強的炎癥反應也是導致復發(fā)性流產(chǎn)的始動因素。CD4+T細胞在母胎界面免疫耐受中發(fā)揮著巨大的作用。既往研究認為妊娠期母體對胎兒的半同種異體抗原的免疫耐受有賴于Th1/Th2細胞的免疫平衡，正常妊娠時Th1/Th2平衡偏向Th2，Th1處于抑制狀態(tài)，從而保護胎兒免受Th1細胞的攻擊。若Th1/Th2平衡偏向Th1，則將導致復發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生。近年來，越來越多的研究表明血小板血型抗體與復發(fā)性流產(chǎn)密切相關，其可能的機制為胎兒與母親血小板血型不合，當胎盤破裂時，胎兒的血小板進入母體血液，使母體產(chǎn)生血小板血型抗體，進而導致流產(chǎn)。本研究與既往文獻相符，初產(chǎn)婦血清中血小板血型抗體陽性率為5%左右［3］；且經(jīng)產(chǎn)婦血清中血小板血型抗體的陽性率較初產(chǎn)婦顯著增高［2，4］。既往文獻顯示，血小板血型抗體主要成分為IgG抗體，其在妊娠第14周即可通過母胎免疫屏障，使胎兒體內(nèi)血小板破壞，進而導致胎兒或新生兒血小板減少，引起早期流產(chǎn)和復發(fā)性流產(chǎn)［5］。因此，在早期流產(chǎn)和復發(fā)性流產(chǎn)患者孕14周后篩查血小板血型抗體就顯得尤為重要［6-7］。

本研究利用固相凝集法檢測了100例初產(chǎn)婦、100例經(jīng)產(chǎn)婦和100例復發(fā)性流產(chǎn)孕婦血清標本中血小板血型抗體的表達情況，結(jié)果顯示，復發(fā)性流產(chǎn)孕婦血清標本中的血小板血型抗體陽性率顯著高于初產(chǎn)婦和（或）經(jīng)產(chǎn)婦，提示血小板血型抗體在復發(fā)性流產(chǎn)孕婦血清中陽性表達率的升高可能與復發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生、發(fā)展密切相關。值得注意的是，與既往文獻相似，本研究顯示經(jīng)產(chǎn)婦血清標本中的血小板血型抗體陽性表達率亦顯著高于初產(chǎn)婦，提示血小板血型抗體與妊娠次數(shù)密切相關［2］。

綜上所述，本研究檢測了初產(chǎn)婦、經(jīng)產(chǎn)婦和復發(fā)性流產(chǎn)孕婦血清標本中血小板血型抗體的表達，并進一步卡方檢驗分析了各組間差異的統(tǒng)計學意義。結(jié)果顯示，血小板血型抗體與妊娠次數(shù)和復發(fā)性流產(chǎn)密切相關。孕期篩查血小板血型抗體，對防治復發(fā)性流產(chǎn)有著重要的意義。

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（楊秀梅編輯）

Relationship between Platelet-specific Alloantibody and Gravidity or Recurrent Spontaneous Abortion

TANG Jie，ZHAO Yingying，WEI Wei，YAN Suwen，ZHANG Ning
（Department ofAristogenesis，No.202 Hospital of PLA，Shenyang 110003，China）

Objective：To investigate the expression of platelet-specific alloantibody in the sera of primipara，pluripara，and recurrent spontaneous abortion（RSA）patients，and analyze the relationship between platelet-specific alloantibody and gravidity or RSA.Methods：A total of 100 primipara，100 pluripara（gravidity≥2）and 100 RSA patients who

prenatal examination in department of aristogenesis，No.202 Hospital of PLA from Apr 2015 to Dec 2015 were recruited.The blood samples were collected during 16-28 weeks of pregnancy，and the expression of platelet-specific alloantibody was detected by solid-phase red cell adherence assay.Results：There were 5 positive platelet-specific alloantibody in primipara group，14 in red all pluripara group，and 26 in RSA group.Platelet-specific alloantibody was significantly associated with gravidity and the incidence of RSA（P＜0.05）by chi-square analysis.Conclusion：Screening the expression of platelet-specific alloantibody during pregnancy can provide evidence for the diagnosis and treatment of RSA.

platelet-specific alloantibody；recurrent spontaneous abortion；solid-phase red cell adherence assay；prenatal screen

R714.21

A

1008-2344（2016）06-0445-02

10.16753/j.cnki.1008-2344.2016.06.008

軍隊臨床高新技術(shù)重大項目（No.2010gxjs003）

湯潔（1964—），女（漢），副主任技師.研究方向：復發(fā)性流產(chǎn)免疫失衡的分子機制.E-mail:yicongtang@hotmail.com

2016-05-16