乙型肝炎表面抗體與年齡的相關研究及影響因素

于淼琛，王 貞，朱 鴻，劉 輝

(1.大連醫科大學附屬第一醫院檢驗科，遼寧大連 116011；2.大連醫科大學，遼寧大連 116011)

?

·論 著·

乙型肝炎表面抗體與年齡的相關研究及影響因素

于淼琛1，王 貞1，朱 鴻1，劉 輝2△

(1.大連醫科大學附屬第一醫院檢驗科，遼寧大連 116011；2.大連醫科大學，遼寧大連 116011)

目的 研究乙型肝炎(后簡稱乙肝)表面抗體(HBsAb)隨年齡增長而降低的原因。方法 測定HBsAb，按照一定比例稀釋標本直至HBsAb<10 U/L；測定巨細胞病毒IgG(CMV-IgG)，按照一定比例稀釋標本直至抗CMV-IgG<14 U/mL。比較分析抗體活性的變化。結果 “2和(或)3抗體”陽性組中，青年組HBsAb活性水平高于中年組，差異有統計學意義(P<0.05)；中年組CMV-IgG活性高于青年組，差異有統計學意義(P<0.05)。青年組中“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb活性水平高于單抗體陽性組，差異有統計學意義(P<0.05)；中年組中“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb活性水平高于單抗體陽性組，差異有統計學意義(P<0.05)。結論 HBsAb隨年齡增長而降低，可能與乙肝病毒感染進程中抗體反應模式不同有關。

乙型肝炎表面抗體； 抗體活性； 年齡組； 影響因素

乙型肝炎(后簡稱乙肝)是由乙肝病毒(HBV)感染引起，以肝臟損害為主的傳染病。全球約20億人曾感染HBV，其中3.5億人為慢性HBV感染，每年約有100萬人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原發性肝細胞癌(HCC)[1]。HBV感染是全球嚴重的公共衛生問題之一。

接種乙肝疫苗是預防乙肝的最有效方法,其對預防和治療乙肝有巨大作用[2]。但是，疫苗并不對所有人群有效，且隨著接種時間的延長,免疫人群的保護性抗體水平逐年下降[3]。研究發現，隨著年齡增長，人體內的免疫應答可隨著免疫原排出、病原體反復刺激、神經內分泌因素作用及免疫細胞凋亡而逐漸被削弱[4-5]，且無論初次免疫后乙肝表面抗原(HBsAg)水平如何,保護性抗體的下降速率差異無統計學意義。本研究將結合臨床試驗，探討HBV陽性率、抗體水平與年齡的關系，影響HBsAg水平的相關原因，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 統計2010年1月1日至2013年9月23日大連醫科大學附屬第一醫院所有非乙肝患者中乙肝表面抗體(HBsAb)陽性(HBsAb>10 U/L)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)正常(男15～40 U/L，女15～35 U/L)，丙氨酸氨基轉移酶(ALT)正常(男9～50 U/L，女7～40 U/L)的標本信息75 065例，按年齡統計HBsAb陽性率，男女比例為1∶1。

選取2012年5月至2014年3月大連醫科大學附屬第一醫院非肝炎患者中，ALT、AST均正常、HBsAb陽性、HBsAg陰性、乙肝E抗原(HBeAg)陰性。根據年齡及HBeAb、乙肝核心抗體(HBcAb)陰性、陽性分為4組。單抗體陽性青年組：HBeAb、HBcAb陰性，年齡為24～26歲，男51例，女68例。單抗體陽性中年組：HBeAb、HBcAb陰性，年齡為45～50歲，男50例，女50例。“2和(或)3抗體”陽性青年組：HBeAb和(或)HBcAb陽性，年齡為24～26歲，男100例，女104例。“2和(或)3抗體”陽性中年組：HBeAb和(或)HBcAb陽性，患者年齡為45～50歲，男101例，女100例。

選取大連醫科大學附屬第一醫院所有檢測HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb患者1 600例，24～26歲400例，男200例，女200例；45～50歲400例，男200例，女200例。檢出12種表現模式[6]，按HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb結果分組：組1為陰性、陽性、陰性、陰性、陰性，組2為陰性、陽性、陰性、陽性、陽性，組3為陽性、陰性、陽性、陰性、陽性,組4為陽性、陰性、陰性、陽性、陽性，組5為陰性、陰性、陰性、陰性、陰性，組6為陰性、陽性、陰性、陰性、陽性，組7為陰性、陽性、陰性、陽性、陰性，組8為陰性、陰性、陰性、陰性、陽性，組9為陰性、陰性、陰性、陽性、陰性，組10為陰性、陰性、陰性、陽性、陽性，組11為HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb結果任意一(或幾)項陽性，組12為(組11～組1)。

每例研究對象需要空腹抽靜脈血3 mL，標本需靜置2 h左右，讓血清充分析出，離心后分離上層血清2例，1例檢測HBsAb，1例檢測巨細胞病毒IgG(CMV-IgG),(-20)℃冰箱密封保存，備用。試驗前室溫充分復融，通過離心(15 000 r/min離心10 min)沉淀加以澄清，保證不含有任何顆粒或殘存纖維蛋白。

1.2 儀器與試劑 HBsAb采用瑞士羅氏公司生產的Cobas e 601全自動電化學發光免疫分析儀檢測；HBsAg采用美國雅培公司生產的ARCHITECT i2000SR化學發光免疫分析儀檢測；CMV-IgG檢測儀器為意大利索靈公司生產的LIAISON化學發光免疫分析系統；ALT、AST由日本日立7600-110/7600-020全自動生化分析儀檢測。所有試劑均為配套專用商品試劑盒。

1.3 方法 以前研究中，免疫指標的檢測如HBsAb和CMV-IgG結果僅報告某一水平值，并不能完全準確反映其真實水平，精密性難以保證，阻礙實驗室規范標準化。本研究嘗試將陽性高值結果進行倍比稀釋，發現其測定結果與稀釋倍數lg值之間并非直線關系，而是呈曲線性。筆者認為計算曲線下面積來表示檢測指標結果更加準確，能代表其實際水平。由于曲線的面積計算復雜，本研究將使用梯形面積計算法，以簡化結果[7-9]。如乙肝表面抗體原始測得水平值均標記為H1，稀釋倍數為1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1 024、1∶2 048，測得水平值分別標記為H2、H3、H4、H5、 H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12，HBsAb活性公式為S=(H1+H2)×(lg2-lg1)+(H2+H3)×(lg4-lg2)+(H3+H4)×(lg8-lg4)+(H4+H5)×(lg16-lg8)+(H5+H6)×(lg32-lg16)+(H6+H7)×(lg64-lg32)+(H7+H8)×(lg128-lg64)+(H8+H9)×(lg256-lg128)+(H9+H10)×(lg512-lg256)+(H10+H11)×(lg1 024-lg512)+(H11+H12)×(lg2 048-lg1 024)。CMV-IgG的抗體原始測得的水平值均標記為C1，稀釋倍數為1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128，測得水平值分別標記為C2,C3,C4,C5,C6,C7,C8，則CMV-IgG活性公式為S=(C1+C2)×(lg2-lg1)+(C2+C3)×(lg4-lg2)+(C3+C4)×(lg8-lg4)+(C4+C5)×(lg16-lg8)+(C5+C6)×(lg32-lg16)+(C6+C7)×(lg64-lg32)+(C7+C8)×(lg128-lg64)。

1.4 統計學處理 所有數據均采用SPSS19.0統計軟件進行統計分析，組間比較采用F檢驗、t檢驗，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 HBsAb水平隨年齡變化曲線 年齡與HBsAb陽性率變化的分布曲線表明，HBsAb陽性率與年齡變化曲線存在2個波峰、2個波谷。2個波峰位于出生時和24～26歲左右，2個波谷位于10～12歲和45～50歲。本次研究選取24～26歲波峰區，45～50歲波谷區2組。見圖1。

2.2 HBsAb水平在不同組比較

2.2.1 2個年齡組HBsAb水平比較 單抗體陽性青年組和中年組HBsAb水平比較，青年組HBsAb水平高于老年組，差異有統計學意義(P<0.05)；“2和(或)3抗體”陽性青年組和中年組HBsAb水平比較，青年組HBsAb水平高于老年組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2.2 相同年齡組單抗體陽性組“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb水平比較 青年組單抗體陽性組和“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb水平比較，“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb水平高于單抗體陽性組，差異有統計學意義(P<0.05)；中年組單抗體陽性組和“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb水平比較，“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb水平高于單抗體陽性組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

圖1 HBsAb陽性率與年齡變化曲線

2.3 HBsAb陽性中CMV-IgG精密測定結果比較 “2和(或)3抗體”陽性青年組和中年組CMV-IgG活性水平比較，青年組CMV-IgG活性水平低于中年組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表1 不同年齡組HBsAb結果

表2 相同年齡組HBsAb檢測結果

表3 HBsAb陽性的2個年齡組CMV-IgG檢測結果

2.4 模式統計分析乙肝感染 統計1 600例患者血樣，24～26歲400例，男200例，女200例；45～50歲400例，男200例，女200例。檢出12種表現模式[10-12]。見圖2。

圖2 不同年齡組模式分析結果比較

3 討 論

臨床資料統計中發現，HBsAb陽性率隨著年齡增長有減低趨勢。出生時，HBsAb陽性率最高，隨著年齡的增長，HBsAb陽性率降低。10歲以后緩慢增高，24～26歲達到1次高峰。之后再次降低，45～50歲達到1個低谷。

從免疫學的角度看，隨著年齡的增長，中年人的免疫水平逐漸減低[13]，通過試驗發現，單抗體陽性組中，青年組和中年組HBsAb活性水平比較，青年組HBsAb活性水平高于老年組，差異無統計學意義(P>0.05)；“2和(或)3抗體”陽性組中，青年組和中年組HBsAb活性水平比較，青年組HBsAb活性水平高于老年組，差異有統計學意義(P<0.05)。“2和(或)3抗體”陽性組中，青年組和中年組CMV-IgG活性比較，中年組CMV-IgG活性高于青年組，差異有統計學意義(P<0.05)。由此表明，免疫水平并非單純隨年齡增長而降低。

在大多數國家，嬰兒出生后即接種乙肝疫苗，使其HBsAb保持較高水平[14]。研究發現，絕大多數疫苗接種后，能誘發使疫苗接種者保持至少15年免疫效果。隨著年齡的增長，乙肝疫苗的保護作用逐漸減低，由接種疫苗產生的HBsAb活性逐漸降低。

通過模式分析發現，組1的HBsAb為疫苗來源，組12的HBsAb為非疫苗來源。組12的青年組為33.0%，中年組為52.5%，說明乙肝疫苗對機體有一定保護作用。但是青年組存在33.0%的人群與乙肝感染有關，中年組有52.5%的人群感染乙肝，說明乙肝疫苗的保護有限。組2為HBsAb、HBeAb、HBcAb陽性，組6為HBsAb、HBcAb陽性，組7為HBsAb、HBeAb陽性，組8為HBcAb陽性，這4組說明感染乙肝后的抗體水平，中年組陽性率高于青年組，且兩者差異有統計學意義，說明中年人發生乙肝感染與年輕人乙肝感染預后模式有差異。青年組單抗體陽性組和“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb活水平性比較，“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb活性水平高于單抗體陽性組，差異有統計學意義(P<0.05)；中年組單抗體陽性組和“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb活性水平比較，“2和(或)3抗體”陽性組HBsAb活性水平高于單抗體陽性組，差異有統計學意義(P<0.05)。根據2個年齡組HBsAb活性和CMV-IgG活性的試驗結果及模式分析結果，提示中年人與年輕人天然抗體模式不同。因此，中年人對HbsAg的反應不同于年輕人，發現乙肝感染后，針對乙肝的抗體也有區別。

HBsAb隨著年齡增長，呈一定下降趨勢。可能與HBV感染進程中抗體反應模式不同有關。本次試驗采用精密測定方法，能比以往傳統方法更精確地反映患者體內抗體活性水平，更適用于不同患者體內乙肝抗體定量相等時抗體的強弱情況分析，其在疾病診斷中的價值正在逐漸被認可。總之，隨著年齡的增長，疫苗保護作用在逐漸下降，而中年人與青年人發生HBV感染時的反應模式不同，其產生抗體也不盡相同。

[1]崔春霞,解希帝,鄭瑞芬.乙型肝炎病毒的研究進展[J].疾病監測與控制雜志，2013,7(4):228-231.

[2]楊春,秦波.HBV感染后免疫耐受形成機制的研究進展[J].中國病原生物學雜志,2013,8(11):1033-1035.

[3]Liu HL,Ma Y,Wang H,et al.Quantitative evaluation of the effect of the hepatitis B vaccine based on the HBsAg- and anti-HBs-positive rates in the Chinese population over the last 33 years[J].Vaccine,2012,30(23):3483-3487.

[4]蔡小嫵,蔡立強.乙型肝炎疫苗免疫接種率及影響因素調查[J].臨床合理用藥,2014,7(1):102-103.

[5]呂靜靜,顏丙玉,陳士玉,等.成人乙型肝炎疫苗初免低應答后加強[J].山東大學學報:醫學版,2012,50(11):126-132.

[6]Gilca V,Serres G,Boulianne N,et al.Antibody persistence and the effect of a booster dose given 5,10 or 15 years after vaccinating preadolescents with a recombinant hepatitis B vaccine[J].Vaccine,2013,31(3):448-451.

[7]Han YN,Wang B,Liu H.The novel use of a routine quantitative system to analyze the activity,content and affinity of an antibody to hepatitis B core antigen[J].J Clin Virol,2011,52(4):295-299.

[8]Liu H,Han YN,Wang B.Establishment of a new method for the detection of the affinity of antibody to hepatitis B e antigen by a routine quantitative system[J].Clinica Chimica Acta,2011,412(11/12):1022-1025.

[9]Liu H,Han YN,Wang B.A simple method to measure antibody affinity against the hepatitis B surface antigen using a routine quantitative system[J].Journal of Virological Methods,2011,173(2):271-274.

[10]毛能建,蔣小麗,黃文.喀什地區乙肝血清標志物模式分析[J].中國傷殘醫學,2013,21(11):49-50.

[11]李會敏.對286 份乙肝五項指標檢驗結果的分析[J].當代醫藥論叢,2014.12(1):196-197.

[12]李賢龍,梅桂杰,王玲.健康體檢者乙肝血清標志物檢出狀況分析[J].中國療養醫學,2014,23(1):41-42.

[13]Braeckman TL,Herck K,Jilg W,et al.Two decades of hepatitis B vaccination in mentally retarded patients:effectiveness,antibody persistence and duration of immune memory[J].Vaccine,2012,30(32):4757-4761.

[14]任宏,李燕婷,吳寰宇,等.乙肝表面抗體衰減人群細胞免疫狀態和影響因素分析[J].上海預防醫學雜志,2010,3(22):121-123.

The research on relationship between level of hepatitis B surface antibody and age

YUMiaochen1,WANGZhen1,ZHUHong1,LIUHui2△

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian,Liaoning116011,China;2.DepartmentofClinicalImmunology,DalianMedicalUniversity,Dalian,Liaoning116011,China)

Objective To study the relationship between Hepatitis B surface antibody(HBsAb) and the age.Methods The level of HBsAb was detected until the level was diluted lower than 10 IU/L according to the certain ratio and.And the level of cytomegalovirus antibody(CMV-IgG) were detected until the level was diluted lower than 14 U/mL according to the certain ratio.The antibody activity were analyzed statistically.Results In the 2 and/or 3 positive-antibodies group,the antibody activity level of youth group was significantly higher than that of middle-aged group(P<0.05).The CMV-IgG activity level of middle-aged group was significantly higher than that of youth group(P<0.05).In the youth group,the antibody activity of 2 and/or 3 positive-antibodies group was significantly higher than that of single antibody positive group(P<0.05).In the middle-aged group,the antibody activity of 2 and/or 3 positive-antibodies group was significantly higher than that of single positive-antibody group(P<0.05).Conclusion The level of HBsAb has decreased with the growth of the age.The possible reason may be that antibody response pattern is different in the process of hepatitis B virus infection.

hepatitis B surface antibody; antibody activity; age group; influence factor

于淼琛，女，主管技師，主要從事臨床免疫方面的研究。

△通訊作者，E-mail：liuhui60@sina.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.21.020

A

1673-4130(2016)21-3004-03

2016-05-10

2016-06-30)