c-myc基因和p53蛋白在喉癌切緣組織的表達與局部復發的相關性研究

余曉虹，羅鴻，朱曉玲,李鶴,劉開瑞

(襄陽市中心醫院北區耳鼻喉科,湖北 襄陽 441003)

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c-myc基因和p53蛋白在喉癌切緣組織的表達與局部復發的相關性研究

余曉虹，羅鴻，朱曉玲,李鶴,劉開瑞

(襄陽市中心醫院北區耳鼻喉科,湖北 襄陽 441003)

目的 通過檢測c-myc基因(c-myc)和p53蛋白在喉癌切緣組織的表達，探討其與術后局部復發的相關性。方法 選擇接受治療的喉癌患者201例，將患者按復發與否分成復發組和非復發組，校正一般資料后，采用免疫組化法對兩組患者喉癌組織和切緣組織中c-myc和p53蛋白的表達進行比較。結果 (1)在喉癌組織中，c-myc蛋白在復發組和未復發組表達的陽性率分別為54.5%和50．0%，差異無統計學意義(P>0.05)；p53蛋白在復發組和未復發組表達的陽性率分別為84.8%和91.1%，差異無統計學意義(P>0.05)；(2)在切緣組織中，c-myc蛋白在復發組和未復發組表達的陽性率分別為66.7%和20.8%，差異有統計學意義(P<0.05)；p53蛋白在復發組和未復發組表達的陽性率分別為84.8%和81.0%，差異無統計學意義(P>0.05)；(3)邊緣黏膜異型增生型發生率在復發組和未復發組分別是63.6%和45.8%，差異無統計學意義(P>0.05)。結論 切緣組織中c-myc蛋白的表達與喉癌術后局部復發具有明顯相關性，或可作為局部復發狀況的預測指標。

喉癌；局部復發；c-myc；p53

作為頭頸外科常見腫瘤之一,喉癌的治療方法隨著科學技術的進步不斷優化、改善。然而，術后局部復發時有發生,且是喉癌治療失敗的主要原因[1]，給患者和親屬帶來極大痛苦，不僅面臨再次手術或治療，對其心理也有消極影響。目前研究[2-4]認為，手術切緣組織是否安全與術后局部復發有明顯相關性，而c-myc基因(c-myc)和p53等癌基因與喉癌的發生相關。因此，本研究旨在通過檢測c-myc和p53蛋白在喉癌切緣組織的表達，探討其與術后局部復發的相關性，以期確定能預測喉癌術后局部復發危險性的基因蛋白，作為標志物對術后恢復以及輔助治療提供可靠參考數據，降低術后局部復發的出現。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年1月至2016年1月在襄陽市中心醫院接受治療的喉癌患者201例，其中男性175例，女性26例，年齡43～82(58.9±7.6)歲，病程0.4～8.7(3.5±2.1)年。排除標準：腦血管疾病或功能障礙者；腫瘤有轉移或轉移跡象者；有嚴重內科疾病者；意識不清且精神狀態差者。根據國際通用腫瘤分期系統TNM，所有調查對象均為T1期，其中T1a 89例，T1b 112例。將患者按復發與否分成復發組和未復發組，復發組： 33例，即手術切緣組織HE染色陰性，但術后經病理學鑒定為局部復發；未復發組：168例，即2年隨診期內無局部復發現象。使用自動天平測量患者身高和體質量，計算其體質量指數(BMI)。結果顯示，兩組性別、年齡、病程、BMI等方面差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。本研究經襄陽市中心醫院醫學倫理委員會批準，患者均簽署知情同意書。

表1 兩組患者一般資料比較±s

1.2 研究方法 切緣組織取材：鏡下使用CO2激光將喉癌組織整塊切除，經鉗夾清除炭化組織后在腫瘤組織周圍0.5 mm處另取4塊組織作為切緣組織標本。標本處理：4%中性甲醛固定后用石蠟包埋，4 μm連續切片。免疫組化方法：采用SP法，兩種抗體工作濃度均為1∶100，以磷酸鹽緩沖液替換一抗制作切片作為陰性對照，以陽性切片為陽性對照。

1.3 判斷方法 免疫組化陽性結果：信號呈棕黃色或棕褐色，p53蛋白位于細胞核內，c-myc蛋白同時位于細胞核和細胞質內。染色結果：為確保結果的準確性及可靠性，采用雙盲法，由2名經驗豐富病理科醫師在光學顯微鏡下隨機選擇5個視野，然后選取每個視野中100個細胞，對陽性細胞進行計數，計算陽性細胞的百分比，取5個視野的平均值作為該標本陽性細胞數的比例，若陽性細胞≥10%則判定為陽性結果(+)，若陽性細胞<10%則判定為陰性結果(-)。典型圖片見圖1～10。

1.4 統計學方法 使用SPSS 17．0統計軟件對資料進行分析。計量數據(正態)的比較為成組t檢驗。計數資料(非等級)則采用χ2檢驗。顯著性水準α=0.05。

2 結果

2.1 喉癌組織中c-myc和p53蛋白的表達 c-myc蛋白：復發組和未復發組的陽性細胞百分比分別為54.5%(18/33)和50．0%(84/168)，差異無統計學意義(P>0.05)；p53蛋白：復發組和未復發組的陽性細胞百分比分別為84.8%(28/33)和91.1%(153/168)，差異無統計學意義(P>0.05)，具體見表2。

圖1 喉癌組織中p53(+)，SP法(×40)

圖2 喉癌組織中p53(-)，SP法(×40)

圖3 喉癌組織中c-myc(+)，SP法(×40)

圖4 喉癌組織中c-myc(-)，SP法(×40)

圖5 切緣組織中p53(+)，SP法(×40)

圖6 切緣組織中p53(-)，SP法(×40)

圖7 切緣組織中c-myc(+)，SP法(×40)

圖8 切緣組織中c-myc(-)，SP法(×40)

圖9 異型增生手術切緣p53(+)，SP法(×40)

圖10 異型增生手術切緣c-myc(+)，SP法(×40)

2.2 切緣組織中c-myc和p53蛋白的表達 c-myc蛋白：復發組和未復發組的陽性細胞的百分比分別為66.7%(22/33)和20.8%(35/168)，差異有統計學意義(P<0.05)；p53蛋白：復發組和未復發組的陽性細胞的百分比分別為84.8%(28/33)和81.0%(136/168)，差異無統計學意義(P>0.05)。具體見表2。

表2 兩組患者喉癌和切緣組織中c-myc和p53蛋白陽性細胞表達的比較/例(%)

2.3 切緣黏膜異型增生狀況 201例患者中，切緣黏膜無異型增生116例，輕度異型增生56例，中度異型增生29例。其中，復發組發生切緣黏膜異型增生型增生患者21例，無異型增生的患者12例；未復發組發生切緣黏膜異型增生型增生的患者77例，無異型增生的患者91例，差異無統計學意義 (P>0.05)。具體見表3。

表3 兩組患者切緣黏膜異型增生狀況比較/例(%)

注：兩組比較χ2=3.499，P=0.061。

3 討論

喉癌可分繼發性喉癌和原發性喉癌兩種。繼發性喉癌指其他部位的惡性腫瘤轉移至喉部致使喉部發生腫瘤，較為少見；而原發性喉癌指原發部位在喉部的腫瘤，以鱗狀細胞癌為主，相對常見?，F目前，喉癌的發生尚無明確病因，但研究[5-7]表明，吸煙、飲酒、空氣污染、職業因素、病毒感染、性激素、放射線等都是其可能的危險因素。早發現、早診斷、早治療對于緩解喉癌所致危害非常重要，不僅可提高患者的術后生存率，還可保留喉的發音功能，同時減少術后并發癥[8-10]。其治療方式主要為手術治療、放射治療、化療及生物治療等，有時會采取多種方式聯合治療的手段[11]。若對早期喉癌患者采取適當治療手段，5年生存率高于90%[12]。復發和轉移是影響其預后效果的主要因素。喉癌的癥狀主要為咳嗽、聲嘶、呼吸困難、吞咽困難、頸部淋巴結轉移等。

p53是一種腫瘤抑制基因，在所有惡性腫瘤中，50%以上會出現該基因的突變。p53基因突變后，由于其空間構象的改變，將失去對細胞生長、凋亡和DNA 修復的調控作用，p53基因由抑癌基因轉變為癌基因。喉癌患者中，p53基因發生突變的概率約為60%，是目前發現的與喉癌發生關系最為密切的癌基因[13]。

c-myc既是一種可易位基因，又是一種多種物質調節的可調節基因，也是一種可使細胞無限增殖、獲永生化功能、促進細胞分裂的基因。c-myc基因參與細胞凋零，與多種腫瘤的發生、發展與轉歸密切相關，研究表明[14]，其與喉癌的發生可能存在一定聯系。

早期喉癌患者二氧化碳激光治療失敗的原因主要是由于術后局部復發，本研究中復發組A中所有患者均接受了喉部分切除術。目前，判斷二氧化碳激光治療手術切除部分是否足夠或者手術切緣是否安全的主要手段仍然是病理學檢查。然而，本研究中33例局部復發患者常規病理學檢查組織切緣均為陰性，說明病理學檢查的不確定性太大，往往不能很好的預測術后局部復發的可能性。因此，探索更為準確、可靠的檢查標準及方法很有必要。

本研究結果顯示，喉癌組織中，c-myc蛋白在復發組和未復發組表達的陽性率分別為54.5%和50．0%，差異無統計學意義(P>0.05)，說明c-myc在喉癌組織的表達與喉癌復發的發生及演進無明顯關系；p53蛋白在復發組和未復發組表達的陽性率分別為84.8%和91.1%，差異無統計學意義(P>0.05)，說明p53在喉癌組織的表達與喉癌復發的發生及演進也無明顯關系。

在切緣組織中，c-myc蛋白在復發組和未復發組表達的陽性率分別為66.7%和20.8%，差異有統計學意義(P<0.05)，說明c-myc在切緣組織的表達與喉癌復發的發生及演進有一定相關性；p53蛋白在復發組和未復發組表達的陽性率分別為84.8%和81.0%，差異無統計學意義(P>0.05)，說明p53在邊緣組織的表達與喉癌復發的發生及演進也無明顯關系。

邊緣黏膜異型增生型發生率在復發組和未復發組分別是63.6%和45.8%，差異無統計學意義(P>0.05)，說明邊緣黏膜異型增生型的發生率與喉癌復發的發生及演進無明顯關系。

綜上所述，切緣組織中c-myc蛋白的表達與喉癌術后局部復發具有明顯相關性，或可作為局部復發狀況預測的指標。

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Correlation between the expressions of c-myc gene and p53 protein in laryngeal cancer edge tissues and local recurrence

YU Xiaohong,LUO Hong，ZHU Xiaoling,et al

(DepartmentofOtolaryngology,XiangyangCentralHospital,Xiangyang,Hubei441003,China)

Objective To explore the correlation of c-myc gene and p53 protein with local recurrence in laryngeal cancer edge tissues.Methods Totally 201 patients with laryngeal cancer treated in Xiangyang Central Hospital were assigned into 2 groups,recurrence group and non-recurrence group.The expressions of c-myc gene and p53 protein in laryngeal cancer edge tissues were analyzed after correcting clinical data between two groups.Results In laryngeal cancer tissues,the positive rates of the expression of c-myc gene in group A and group B were 54.5% and 50.0% respectively,and they were not statistically different(P>0.05);the expressions of p53 protein in group A and group B were 84.8% and 91.1% respectively,and they were not statistically different either(P>0.05).In edge tissues,the positive rates of the expression of c-myc gene in group A and group B were 66.7% and 20.8% respectively,and they were statistically different (P<0.05);the expression of p53 protein in group A and group B were 84.8% and 81.0% respectively,and they were not statistically different(P>0.05).The incidences of mucosa dysplasia on edge tissues in group A and group B were 63.6% and 45.8% respectively,and they were not statistically different(P>0.05).Conclusions The expression of c-myc gene in edge tissues has obvious correlation with postoperative local recurrence of laryngeal cancer,which can become a forecast indicator of local recurrence.

Laryngeal cancer;Local recurrence;c-myc;p53

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.10.029

2016-03-25，

2016-07-12)