SCC患者外周血淋巴細胞亞群檢測的意義及與預后相關性分析

石鐵梅　徐靖宏　王玲　剡建平

SCC患者外周血淋巴細胞亞群檢測的意義及與預后相關性分析

石鐵梅徐靖宏王玲剡建平

目的 觀察皮膚鱗狀細胞癌（SCC）患者外周血淋巴細胞亞群的變化及其意義及與預后的關系，以探討免疫機制在SCC發生、發展中的可能機制。方法 采用流式細胞儀對46例SCC患者外周血T淋巴細胞及NK、B淋巴細胞進行檢測，并與46例健康對照組進行比較，同時所有SCC患者均行手術治療，并隨訪2年，觀察復發、轉移情況，及與外周血淋巴細胞亞群的關系。結果 與對照組比較，SCC患者外周血中CD3+比值升高（P＜0.05），CD4+、NK細胞比例降低（P＜0.05，P＜0.01），B淋巴細胞、CD8+比例升高（P＜0.05，P＜0.01），CD4+/CD8+值降低（P＜0.05）；隨著腫瘤增大，伴有淋巴結轉移、分化程度降低以及浸潤深度的增加，外周血中血CD3+、CD8+T淋巴細胞、B淋巴細胞比例升高，CD4+T淋巴細胞、NK細胞比例以及CD4+/CD8+值降低（P＜0.05），隨訪2年后，共有4例發生復發和轉移，Logistic回歸分析提示CD4+、NK細胞比例和CD4+/CD8+值降低是SCC復發和轉移的預測因素。結論 SCC患者存在免疫功能失調，可能與體液免疫亢進，細胞免疫功能受抑制有關，CD4+、NK細胞比例和CD4+/CD8+值可預測SCC的復發和轉移。

皮膚鱗狀細胞癌 淋巴細胞亞群 流式細胞儀 體液免疫 細胞免疫

皮膚鱗狀細胞癌（skin squamous cell，SCC）是源于皮膚中角質形成細胞的惡性腫瘤，具體原因不明，現認為與SCC 發生有關的包括環境和宿主因素。環境因素包括日光、X線、砷和有致癌作用的碳氫化合物等；宿主因素包括年齡、皮膚色澤、自體免疫狀態和某些基因的缺陷。本文通過觀察SCC患者外周血淋巴細胞亞群的變化，探討免疫機制在SCC發生和發展中的可能機制，以及與預后的相關性。

1　臨床資料

1.1一般資料 選擇2010年1月至2013年1月于浙江省新昌縣人民醫院的SCC患者46例，其中男28例，女18例；年齡50～80歲，平均年齡66.8歲。病程6個月～2年，12例患者伴有高血壓或糖尿病；均經過手術切除，切緣均陰性，其中腫塊大小1.0×1.0cm～8.0×7.0cm；高分化18例，中分化20例，低分化8例；10例有附近區域淋巴結轉移，病理檢查證實為SCC，皮膚癌局限于皮膚或皮下組織30例，浸潤至深層組織16例；并選擇同期在浙江省新昌縣人民醫院體檢中心體檢的46例體檢者作為對照，兩組間男女比例、年齡等一般情況差異無統計學意義（P＜0.05），具有可比性。排除標準：全身轉移的SCC患者，其它腫瘤患者，嚴重肝腎功能不全，自身免疫性疾病及慢性感染等。

1.2方法 兩組患者均于次日空腹采集靜脈血2ml，6h內作染色處理，使用美國BD公司生產FACSCalibur流式細胞儀，報告CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞、CD16+占總淋巴細胞的百分比、CD4+/CD8+比值，上述操作過程中各試劑均由美國BD公司生產。

1.3統計學方法 采用SPSS 20.0統計軟件。計量資料以（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，多因素分析采用Logistic回歸分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1SCC患者外周血T淋巴細胞亞群和健康人員比較 見表1。

表1　兩組間淋巴細胞亞群比較（±s）

表1　兩組間淋巴細胞亞群比較（±s）

組別nCD3+(%)CD3+CD4+(%)CD3+CD8+(%)CD4+/CD8+NK(%)CD3-CD16+(%) SCC組46 56.41±10.931.42±8.831.60±7.41.12±1.21.63±1.327.63±11.0對照組4651.20±9.736.33±10.728.11±6.91.73±1.32.42±1.66.91±3.6 t值2.41712.39892.34622.30022.631912.13 P值0.01770.01850.02120.02380.010

2.2SCC患者淋巴細胞亞群與患者臨床病理因素分析 將SCC患者的腫瘤大小、分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移情況、年齡、合并其它疾病情況與外周血淋巴細胞亞群進行分析，結果顯示，隨著腫瘤的增大、淋巴結轉移、分化程度的降低及浸潤深度的增加，外周血中血CD3+細胞比例升高（t值分別為2.3920，2.022，2.2615，2.0725，P＜0.05），CD4+T細胞降低（t值分別為2.6964，2.3019，2.4895，2.0981，P＜0.05），CD8+T細胞比例升高（t值分別為2.2458，2.0498，2.5355，2.217，P＜0.05），CD4+/CD8+值降低（t值分別為2.6135，2.0776，.22496，2.3245，P＜0.05），NK細胞比例降低（t值分別為1.9955，2.1455，2.2090，2.1659，P＜0.05），B淋巴細胞亞群比例升高（t值分別為2.2565，2.2886，2.0308，2.3045，P＜0.05）。

2.3淋巴細胞亞群與SCC復發及轉移的相關性分析 所有SCC患者隨訪2年，其中4例發生轉移和復發，1例在遠處皮膚出現腫塊、潰瘍，經病理學檢查證實為與原來SCC相同類型的病理類型，2例經影像學檢查證實為肝臟和肺部轉移，1例在原手術部位出現皮膚破潰，病理活檢證實為SCC；以外周血CD3+、CD4+、CD8+、NK、B淋巴細胞比例，CD4+/CD8+值等指標為自變量作為預測SCC復發和轉移的備選危險因素，以SCC復發和轉移為應變量，采用Logistic回歸分析進行篩選，結果顯示，CD4+、NK細胞比例和CD4+/CD8+值降低是SCC復發和轉移的危險因素（P＜0.05）。

3　討論

近幾年來國內外多項研究表明，惡性腫瘤患者外周血T細胞亞群有明顯變化，CD4+T細胞減少，CD8+T細胞增多，CD4+/CD8+比值下降或倒置，且這種變化隨著腫瘤的進展愈加明顯。其中CD4+T 淋巴細胞能促進效應細胞抗腫瘤作用，CD8+T淋巴細胞則主要起免疫抑制作用［1］，CD4+/CD8+是反應機體免疫平衡狀況的敏感指標，在正常生理狀況下，該比值相對恒定［2］，當CD8+細胞數量增加，功能亢進時，機體的體液免疫劑細胞免疫均受到抑制［3］；腫瘤通過表達、釋放某種腫瘤抗原或其他可溶性物質誘導激活CD8+T細胞，從而參與機體的免疫抑制［4］。另一類免疫細胞NK細胞是機體中對腫瘤細胞具有高度細胞毒性作用的淋巴樣細胞，是一種廣譜的殺傷細胞，可直接發揮抗腫瘤效應，并通過分泌細胞因子調節免疫應答［5］，對阻止腫瘤生長起重要作用。而B細胞主要介導體液免疫，與NK細胞協同在清除突變細胞和病毒感染細胞中發揮重要作用。目前對于肝癌、肺癌、消化道惡性腫瘤、鼻咽癌、乳腺癌等惡性腫瘤的免疫機制研究較多，而對于SCC研究較少。

SCC多認為與以下因素明顯相關：（1）紫外線。（2）化學因素。（3）癌前期皮膚病。（4）瘢痕、外傷及其他慢性皮膚病。（5）免疫抑制等。朱明芳等［6］報道1例尋常性銀屑病繼發多發性皮膚鱗狀細胞癌患者，認為長期不規則使用免疫抑制劑治療銀屑病可能是多發性皮膚鱗癌的誘發因子，提示免疫功能異常可能在SCC的發生方面起著一定作用。Sakai等［7］研究發現，2，2-二羥甲基丁酸（DMBA）誘導的鼠面頰部SCC中，隨著DMBA攝入量的增加和時間的延長，CD4+T細胞減少，CD8+T細胞增多，提示隨著腫瘤的進展，免疫抑制作用逐漸增強。本文中，所有入院病例病程均在6個月至2年，病程長，且隨著淋巴結轉移、浸潤深度的增加、腫塊的增大等因素，CD4+T細胞減少，CD8+T細胞增多，CD4+/ CD8+降低，考慮與過度免疫抑制有關。另有報道，異常的T細胞功能可導致繼發的表皮角質細胞過度增生，從而出現不典型增生甚至惡變［8］；李敬果等［9］研究發現，CD3+T淋巴細胞在SCC組織中明顯高于正常皮膚組織，提示腫瘤細胞啟動機體細胞免疫應答機制，阻礙了腫瘤細胞分裂、增殖，延緩了腫瘤進展。本資料中，SCC患者外周血T細胞功能異常，CD3+T淋巴細胞總量較對照組升高，考慮與刺激表皮角質過度增生及啟動免疫應答機制有關；而NK細胞百分比明顯降低，說明腫瘤患者NK細胞免疫功能明顯受損；同時CD4+T細胞、CD4+/CD8+比值下降，CD8+T細胞明顯高于對照組，說明SCC患者存在細胞免疫功能下降，B淋巴細胞升高，提示體液免疫的亢進，與文獻報道相符［10］。另外，46例SCC患者在手術切除病灶后隨訪2年后有4例發生復發和轉移，明顯高于SCC10年3%的復發轉移率，考慮與患者就診晚、未及時隨診、腫瘤惡性程度高等有關，同時多因素回歸分析提示CD4+T細胞、NK細胞及CD4+/CD8+比值下降是預測SCC復發和轉移的危險因素，考慮機體免疫功能受到抑制有利于SCC患者發生轉移和復發。

總之，SCC患者存在著免疫機制的異常，通過研究SCC患者外周血淋巴細胞亞群表達情況可能有助于進一步了解皮膚惡性腫瘤發生、發展的機制，并在評估預后方面具有一定價值，但由于本資料入選例數較少，隨訪時間較短，故外周血淋巴細胞亞群是否有更大的臨床意義，仍需進一步研究。

［1］Smyth MJ, Teng MW, Swann J, et al. CD4+CD25+T regulatory cells suppress NK cell-mediated immunotherapy of cancer. J Immunol, 2006,176(3):1582-1587.

［2］梁平,徐小珂,薛強東,等.早期潛伏梅毒和晚期梅毒外周血外周血淋巴細胞亞群的檢測.中國皮膚性病學雜志,2010,24(4):307-308.

［3］姜笠.免疫調節治療銀屑病前后外周血T細胞亞群的研究.中國麻風皮膚病雜志,2003,19(4):340.

［4］陸春偉,佟海俠,陸美言,等.急性白血病患者外周血淋巴細胞亞群和調節性T細胞的檢測及臨床意義.現代腫瘤醫學,2010,18(11):2230-2233.

［5］Seki S,Habu Y,Kawamura T,et al.The liver as a crucial organ in the first line host defense:the roles of Kupfer cells,NK cell and NK1.1Ag+T cell in T helper 1 immune responses.Immunological Rev, 2000,174(1):35-46.

［6］朱明芳,吳靜,熊偉,等.尋常性銀屑病繼發多發性皮膚鱗狀細胞癌1例.中國皮膚性病學雜志,2013,27(12):1304-1305.

［7］Sakai Y,Tanaka M,Shirakawa M. Lymphocyte changes in peripheral blood,spleen,and liver in DMBA-induced squamous cell carcinoma of mouse cheek skin.Odontology,2004,92(1):36-42.

［8］繆界萍.尋常型銀屑病患者外周血T淋巴細胞亞群和血清腫瘤壞死因子α的變化及臨床意義.中國醫藥指南,2010,3(1):12-13.

［9］李敬果,翟曉翔,張翠俠,等,皮膚鱗狀細胞癌中Livin基因的表達與CD3+T細胞浸潤的研究.臨床腫瘤學雜志,2012,17(10):880-881.

［10］江虹,李菊湘.T淋巴細胞亞群在惡性腫瘤患者外周血中的變化.檢驗醫學與臨床,2010,7(13):1361-1362.

Objective To observe the alteration of peripheral blood lymphocyte subsets in patients of skin squamous cell carcinoma（SCC）and analysis the correlation between prognosis，in order to investigate the immune mechanism in the development of SCC occurred，the possible mechanism. Methods Peripheral blood T-lymphocyte subgroups and NK cells，B-lymphocyte subgroups from 46 patients with SCC were detected by flow cytometry instrument；46 healthy persons were detected as a control group. All the SCC patients were treated by surgery，followed-up of 2 year，and observed the recurrence，metastasis，and the relationship with the peripheral blood lymphocyte subsets. Results Compared with control group，the CD3+ratio increased in peripheral blood of patients with SCC（P＜0.05），the CD4+and NK cells ratio decreased（P＜0.05，P＜0.01），the ratio of B lymphocyte，CD8+（P＜0.05，P＜0.01）increased，the value of CD4+/CD8+decreased（P＜0.05）.Accompanied by the increase of tumor size，Infiltrating depth and lymph node transfer，decrease of differentiation degree，the CD4+、NK cells ratio and CD4+/CD8+decreased，the B lymphocyte，CD8 + cells ratio increased（P＜0.05）；After 2 years followed-up，4 cases recurrenced and metastasized，Logistic regression analysis suggested the reduction of proportion of CD4+and NK cells and CD4+/CD8+values was a predictor of SCC recurrence and metastasis. Conclusion The disorders of immune function in patients with squamous cell carcinoma existed，may be related to the humoral immune hyperfunction，suppression of cellular immune function. The proportion of CD4+and NK cells and CD4+/ CD8+values may predict recurrence and metastasis of SCC.

Skin squamous cell carcinoma Lymphocyte subsets Flow cytometry instrument Humoral immune Cellular immune

312500 浙江省新昌縣人民醫院（石鐵梅 王玲 剡建平）

310003 浙江大學醫學院附屬第一醫院（徐靖宏）