經烏司他丁預處理的預存式自體血回輸對圍術期細胞免疫功能的影響

張明勛

經烏司他丁預處理的預存式自體血回輸對圍術期細胞免疫功能的影響

張明勛

目的 觀察經烏司他丁預處理的預存式自體血回輸對結直腸癌患者T細胞和NK細胞的影響。方法 選擇直腸癌、結腸癌ASAⅠ～Ⅱ級患者45例，隨機分為預存式自體輸血組（P組）、烏司他丁組（UC組）和聯合治療組（UN組），每組各15例。P組：患者于手術前3d采血400ml，在手術中出血時或在手術后回輸。UN組：患者于術前7d時開始輸注20萬U烏司他丁1次/d，共4d，同時術前第3天采取靜脈自體血400ml。UC組：患者烏司他丁的用藥方式同聯合治療組，但于術前配懸浮紅細胞2U（400ml），手術中止血完畢后或手術后輸入；用流式細胞儀測定T 淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞胞（CD56+）的數量，并計算CD4+/ CD+8比值。結果 麻醉前P組患者CD3+、CD4+、NK細胞數量及CD4+/CD8+的比值均低于UC組和UN組，而CD8+則高于UT組和UN組；術后1d UN組和UC仍高于P組，其中UN組低于UC組；術后3d各組數值開始恢復，UN組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的比值以及NK細胞的數量與術前比較差異無統計學意義（P＞0.05），而其他兩組則仍低于術前水平；術后5d三組患者的各項指標均恢復至術前水平，與術前比較差異無統計學意義（P＞0.05）。結論 經烏司他丁預處理的預存式自體輸血可通過改善腫瘤患者術前的細胞免疫抑制，改善術后患者的細胞免疫功能，促進患者早日康復。

烏司他丁 預存式自體血 結直腸癌 細胞免疫

結直腸癌是世界范圍內發病率較高的惡性腫瘤，在我國發病率呈逐年上升的趨勢且逐漸年輕化。腫瘤患者免疫功能低下，其中機體的細胞免疫系統中免疫細胞的數量和質量出現不同程度的降低，手術患者經手術后細胞免疫更加抑制，導致術后腫瘤細胞的擴散［1］，所以在圍術期對腫瘤患者免疫功能的影響對患者的康復和預后具有至關重要的作用。本實驗旨在探討經烏司他丁預處理的預存式自體血回輸對結直腸癌患者T細胞和NK細胞的影響。

1　臨床資料

1.1一般資料 本實驗經醫院倫理委員會批準后實行，患者在術前均簽署知情同意書。選擇直腸癌、結腸癌ASAⅠ～Ⅱ級患者45 例，其中男27例，女18例；年齡49～65歲，體質量46～85kg。將患者隨機分為三組：預存式自體輸血組（P組）、烏司他丁組（UC組）和聯合治療組（UN組）。預存式自體血組：患者于手術前3d采血400ml，采集后血袋標記清楚放于血庫專用冰箱內保存，在手術中出血時或者在手術后回輸。聯合治療組：患者于術前7d時開始將20萬U烏司他丁溶于生理鹽水內靜脈注射1次/d，共4d，同時術前第3天采取靜脈自體血400ml。烏司他丁組：患者烏司他丁的用藥方式同聯合治療組，但于術前配懸浮紅細胞2U（400ml），手術中止血完畢后或手術后輸入。三組患者一般資料及手術情況比較差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2入選標準及排除標準 （1）入選標準：三組患者Hb＞120g/L，HCT＞0.35，PLT＞100×10-9/L，心、肺、肝、腎功能正常，凝血酶原時間正常、無內分泌及免疫性疾病，無放療、化療和激素治療史。（2）排除標準：手術時間＞4h的患者。患者失血量＞600ml。術中患者血壓超過基礎值的40%且應用血管活性藥物后持續時間＞10min。

2　結果

三組患者圍手術期T細胞亞群和NK細胞數量變化比較 見表1。

表1　三組患者圍手術期T細胞亞群和NK細胞數量變化比較（±s）

表1　三組患者圍手術期T細胞亞群和NK細胞數量變化比較（±s）

注：與麻醉前比較，*P＜0.05；與P組比較，#P＜0.05；與UT組比較，▲P＜0.05

組別n麻醉前術后1d術后3d術后5d CD3+P組1560.13±7.6347.24±9.56*52.31±7.26*59.10±6.43 UC組1571.41±3.25#54.21±9.37*#62.15±9.42*#72.86±5.35# UN組1572.26±4.83#60.17±11.25*#▲71.26±8.56*#▲72.39±7.73# CD4+P組1533.15±1.4118.96±3.31*23.89±5.64*33.82±3.27 UC組1537.82±2.15#21.19±4.37*#25.02±4.92*36.17±3.18# UN組1538.06±1.23#27.82±7.64*#▲36.14±6.33#▲39.45±2.19# CD8+P組1523.29±3.2924.32±2.9124.02±3.4621.21±2.31 UC組1520.31±2.58#20.52±3.07#21.17±1.05#21.19±0.69# UN組15 18.82±2.16#▲18.13±2.42#▲17.86±3.66#▲16.17±1.36#▲CD4+/CD8+P組151.39±0.170.82±0.13*0.93±0.15*1.36±0.31 UC組151.70±0.13#0.94±0.21*1.12±0.37*1.72±0.41# UN組151.73±0.09#1.31±0.27*#▲1.79±0.15#▲1.84±0.15# NKP組1530.81±4.2722.36±3.19*26.04±2.53*36.52±3.12 UC組1536.12±3.86#24.15±3.01*#25.83±3.62*32.27±2.51 UN組1537.42±2.69#29.47±2.18*#36.46±3.2937.19±4.10

3　討論

烏司他丁是從男性尿液中分離純化出來的一種胰蛋白酶抑制劑，研究表明其除具有抑制氧自由基的產生，穩定溶酶體酶和細胞膜，減少炎癥介質的釋放［2-3］，還具有一定的免疫調節作用［4］。而預存式自體血中免疫細胞的數量和質量均優于術前水平，可以改善患者的圍術期細胞免疫功能［5］。在機體的免疫系統中，輔助性T細胞（Th）和抑制性T細胞（Ts）兩亞群間細胞的平衡在抗腫瘤中起到重要的作用，其中CD4+在效應細胞抗腫瘤過程中起到促進作用，CD8+則起到抑制作用。CD4+/CD8+的比值是對Th/Ts二者之間平衡的重要反應，可以較好的反應腫瘤患者免疫抑制的程度。

在本實驗中烏司他丁組和聯合治療組術前患者CD3+、CD4+、NK細胞數量及CD4+/CD8+的比值均高于預存式自體血組，而CD8+的值則低于預存式自體血組，這可能與患者在術前應用烏司他丁有關，腫瘤細胞可以通過誘發更多的抑制細胞和因子對CD4+產生抑制，加上CD8+產生的抑制因子使得機體的免疫功能進一步受損，而烏司他丁可以改善CD4+的功能和數量，對圍手術期的紅細胞免疫功能有保護作用。各組患者CD3+、CD4+、NK細胞數量及CD4+/CD8+的比值在術后第1天呈現不同程度的降低，但是聯合治療組的下降幅度明顯低于其他兩組，同時機體免疫系統的恢復速度明顯優于其他兩組，聯合治療組于術后3d恢復至術前水平，而其他兩組的免疫指標于術后5d時才恢復至術前水平，這可能是因為烏司他丁能促進紅細胞血紅素氧合酶1的表達及增強其活性，改善血清中的免疫粘附調節因子的紊亂狀態，使得患者術前采集的自體血更有利于減輕腫瘤細胞對免疫系統的抑制，促進患者早日康復。

［1］Leaver HA,craigsR,YapPL,et al.Lymphocyte responses following open andminimally invasive thoracic surgery.Eur J clin Invest,2000, 30(3):230-238.

［2］Cao YZ,Tu YY,Chen X,et al.Protective effect of Ulinastatin against murine models of sepsis:inhibition of TNF-alpha and IL-6 and augmentation of IL-10 and IL-13.Exp Toxicol Pathol,2012, 64(6):543-547.

［3］Lee SH, Kim HJ, Han HJ, et al. Urinary trypsin inhibitor attenuates lipopolysaccharide-induced neutrophil activation. Korean J Anesthesiol, 2012,63(6):540-546.

［4］李鶴飛,李永輝,王海波,等.烏司他丁對圍手術期食管癌患者細胞免疫功能的影響.軍醫進修學院學報,2012,33(9):941-943.

［5］屈常偉.駱喜寶.劉志貴,等.預存式自體輸血對結直腸癌患者圍術期細胞免疫功能的影響.實用醫學雜志,2013,29(18):2986-2988.

Objective To observe the UTI pretreated stored autologous blood transfusion in patients with colorectal cancer effects on T cells and NK cells. Methods Colorectal cancer，colon cancer ASAⅠ～Ⅱ grade 45 cases of patients were randomly divided into pre-existing autologous transfusion group（P group），ulinastatin group（UC group）and combination therapy group（UN）group 15 example. Stored autologous blood groups：patients with 400ml of blood for three days before the surgery，when your hands are bleeding or transfusion after surgery. Combination therapy group：patients at the time of preoperative 7d starting daily 200，000 U Ulinastatin co-4d，and the third day to take intravenous preoperative autologous blood 400ml. UTI Group：Patients UTI medication the same way as the combined treatment group，but in the preoperative erythrocyte suspension with 2U（400 ml），after the completion of surgery to stop bleeding after surgery or input；T lymphocytes was measured by flow cytometry. cell subsets CD3+，4+，8+，NK cells cells（CD56+）by the number of CD CD，and calculate the CD4+/ CD8+ratio. Results CD3+，CD4+，NK cells and the ratio of the number of patients in group P before anesthesia CD4+/CD8+were lower than the UC group and UN groups，and CD8+were higher than UC group and UN group；postoperative 1d UN group and UC was still higher than P group，which UN group than UC group；3d after each set of values began to recover，CD3+UN group，the difference was not statistically significant（P＞0.05 before CD4+，the ratio of CD4+/ CD8+and the number of NK cells and surgery），while the other two were still lower than the preoperative level；indicatorswere

to preoperative levels 5d after three groups of patients，compared with the preoperative difference was not statistically significant（P＞0.05）. Conclusions UTI pretreated stored autologous blood transfusions by improving cellular immunity in cancer patients before surgery inhibiting cell patients improve immune function，and promote early recovery of patients.

Ulinastatin Stored autologous blood Colorectal cancer Cellular immunity.

274000 山東省菏澤市立醫院輸血科

1.3麻醉方法 麻醉誘導：靜脈給予咪唑安定0.15mg/ kg、舒芬太尼1μg/kg，2min后行依托咪酯麻醉誘導。患者意識消失后靜脈推注羅庫溴銨0.6mg/kg。待肌松充分后行氣管內插管，插管成功后予以機械通氣，通氣參數為Vt 8～10ml/kg，RR 12～18次/min，調整參數并維持Pet CO235～45mmHg，持續輸注瑞芬太尼0.25μg/（kg·min），順阿曲庫銨0.2mg/（kg·h）。術中調節依托咪酯的劑量，血壓高于基礎值20%給予烏拉地爾，低于基礎值20%則給予多巴胺；心率＞100次/min給予艾司洛爾，＜55次/min給予阿托品。術中維持循環穩定，手術結束后清理呼吸道分泌物，待患者呼吸、意識、咳嗽、吞咽反射恢復后拔除氣管導管；患者意識清楚后送回病房。

1.4觀察指標 兩組病例均在麻醉誘導前、輸血前、手術后第1天、手術后第5天分別抽取靜脈血2ml，肝素抗凝，將100μl抗凝全血加入單抗20μl試管中，室溫反應25min加入溶血劑2ml，室溫放置10min，2000r/min離心，5min后棄上清液，加入PBS 2ml 2 000r/min離心，5min后棄上清液洗滌2次，加1% 多聚甲荃500μl 固定，置4℃保存上機檢測，以流式細胞儀（美國FACScan 型）測定T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞胞（CD56+）的數量，計算CD4+/ CD8+比值。

1.5統計學方法 采用SPSS 17.0統計軟件。計量數據以（±s）表示，組間比較采用t檢驗，組間采用方差分析。P＜0.05為差異有統計學意義。