cyp2c19基因多態性、高水平FIB對氯吡格雷抗凝效應的相關性研究

李勤琴

(第三軍醫大學大坪醫院野戰外科研究所，重慶 400010)

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·論 著·

cyp2c19基因多態性、高水平FIB對氯吡格雷抗凝效應的相關性研究

李勤琴

(第三軍醫大學大坪醫院野戰外科研究所，重慶 400010)

目的 研究冠心病患者中cyp2c19基因多態性、高水平纖維蛋白原(FIB)與氯吡格雷抗凝效應的關系。方法 選取2015年5～11月正在服用氯吡格雷的冠心病患者611例，并對其cyp2c19基因特征和FIB水平進行分析。將患者分為cyp2c19基因純合子強代謝型組(n=261)、雜合子強代謝型組(n=272)及弱代謝型組(n=78)；611例冠心病患者中有408例患者檢測凝血項，分為高水平FIB組(n=116)、正常水平FIB組(n=224)及低水平FIB組(n=68)；再分為cyp2c19基因弱代謝型且高水平FIB組(n=24)、cyp2c19基因純合子強代謝型且高水平FIB組(n=48)，cyp2c19基因雜合子強代謝型且高水平FIB組(n=44)，比較3組的凝血酶時間(TT)。結果 cyp2c19基因型別有*1/*1、*1/*2、*1/*3、*2/*2、*2/*3、*3/*3。經基因芯片檢測發現，上述各型分別為261例(占42.7%)、235例(占38.4%)、37例(占6.0%)、60例(占9.8%)、17例(占2.9%)、1例(占0.2%)。cyp2c19*1、*2和*3等位基因頻率分別為65.0%(794/1 222)、30.5%(373/1 222)和4.5%(55/1 222)；純合子強代謝型組占42.7%(n=261)，雜合子強代謝型組占44.4%(n=272)，弱代謝型組占12.9%(n=78)。高水平FIB組的TT水平與正常水平FIB組比較差異無統計學意義(P=0.400 8)； 無論是純合子還是雜合子，cyp2c19基因強代謝型均比cyp2c19基因弱代謝型對氯吡格雷抗凝效應更敏感(P<0.05)。結論 高水平FIB對氯吡格雷抗凝效應并無顯著影響；cyp2c19基因多態性對氯吡格雷的抗凝效應有顯著影響，有助于臨床指導用藥，降低冠狀動脈血栓發生率。

cyp2c19基因； 纖維蛋白原； 基因多態性； 冠心病； 氯吡格雷

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病是冠狀動脈血管發生動脈粥樣硬化病變引起血管管腔狹窄或阻塞，造成心肌缺血、缺氧或壞死而導致的心臟病，常稱為冠心病。為預防不良心血管事件的發生，氯吡格雷與阿司匹林聯合抗血小板治療是目前推薦的治療藥物[1]，但由于個體差異，氯吡格雷的抗血小板效應對于某些患者并沒有發揮良好療效，從而導致冠狀動脈血栓的發生[2]。隨著生活水平的提高，冠心病的患病率在我國呈上升趨勢[3]，冠心病患者日趨年輕化[4]，因此積極采取有效的抗血小板治療是減少冠心病發病率的重要任務。除某些臨床因素(如年齡、肥胖、糖尿病和腎衰竭等)，有報道發現細胞色素P450(CYP450)與氯吡格雷的療效有關[5]。氯吡格雷是一種酯類前體藥物，需要經過CYP450酶代謝為有活性的產物才能發揮抗血小板作用，而cyp2c19基因具有基因多態性，能直接影響氯吡格雷在臨床中的療效[6]。此外，纖維蛋白原(FIB)作為冠心病的重要危險因素，近期備受關注。FIB是凝血途徑的重要環節，通過與血小板膜上受體相結合，導致急性冠狀動脈血栓的形成。一般情況下，FIB與凝血酶時間(TT)呈反比。氯吡格雷通過間接抑制GPⅡb/Ⅲa受體與FIB結合，從而阻止血小板聚集。本研究將探討cyp2c19基因多態性、FIB水平與氯吡格雷抗血小板效應的關系，以期為臨床實施個體化用藥提供依據。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院2015年5～11月經心電圖和冠狀動脈造影等檢查確診為冠心病、且正在服用氯吡格雷的患者611例，其中男311例，女300例；年齡30～89歲，平均(61.0±0.5)歲。入組患者均簽署知情同意書。納入標準：(1)成年人(大于18歲)；(2)漢族；(3)長期服用氯吡格雷。排除標準：(1)嚴重心衰及肝腎功能損傷；(2)不能按醫囑服用氯吡格雷；(3)對氯吡格雷和阿司匹林耐藥；(4)近期有創傷等具有抗血小板治療禁忌證患者。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 cyp2c19基因多態性檢測用乙二胺四乙酸二鈉抗凝，FIB和TT檢測用3.2%枸櫞酸鈉抗凝。所有標本采集后送往本院分子生物實驗室進行檢測。

1.2.2 基因擴增與雜交顯色 采用核酸提取試劑盒(試劑盒由上海百傲科技股份有限公司提供，產品編號BST01051)提取DNA；采用cyp2c19基因特異引物經聚合酶鏈式反應(PCR)擴增后，將帶生物素標記的PCR產物與固定在醛基基片的cyp2c19基因型檢測探針進行雜交反應[基因檢測芯片試劑盒，國食藥監械(準)字2013第3400956號]及顯色反應，最后將芯片進行掃描得到圖像(生物芯片識讀儀，規格型號BE-20，生產廠家為上海百傲生物技術有限公司)，判斷基因型別。

1.3 結果判斷 cyp2c19*1/*1為野生型、cyp2c19*1/*2和cyp2c19*1/*3為突變雜合子、cyp2c19*2/*2和cyp2c19*3/*3為突變純合子。根據不同基因型別所編碼的酶對氯吡格雷代謝速度，將cyp2c19*1/*1歸為快代謝型，cyp2c19*1/*2和cyp2c19*1/*3為中間代謝型，cyp2c19*2/*2和cyp2c19*3/*3為慢代謝型。

2 結 果

2.1 cyp2c19基因多態性的型別 cyp2c19基因型別包括*1/*1，*1/*2，*1/*3，*2/*2，*2/*3，*3/*3，經基因芯片檢測發現各型別分布情況依次如下：261例(占42.7%)、235例(占38.4%)、37例(占6.0%)、60例(占9.8%)、17例(占2.9%)、1例(占0.2%)。cyp2c19*1、*2和*3等位基因頻率分布分別為65.0%(794/1 222)、30.5%(373/1 222)和4.5%(55/1 222)。其中，純合子強代謝型組占42.7%(n=261)、雜合子強代謝型組占44.4%(n=272)及弱代謝型組占12.9%(n=78)。

2.2 不同FIB水平冠心病患者FIB、TT水平分析 分析高水平FIB對正在服用氯吡格雷冠心病患者的TT水平影響，發現高水平FIB組TT水平與正常水平TT水平比較差異無統計學意義(P=0.400 8)。說明高水平FIB對氯吡格雷抗凝效應并無影響。見表1。

表1 不同FIB水平冠心病患者FIB、TT水平分析

注：與高水平FIB比較，*P=0.018 2。

表2 純合子強代謝型與弱代謝型cyp2c19基因型構成比及TT水平

表3 雜合子強代謝型與弱代謝型cyp2c19基因型構成比及TT水平

表4 強代謝型與弱代謝型cyp2c19基因型構成比及TT水平

2.3 cyp2c19基因型頻數、頻率分布及對氯吡格雷抗凝效應的影響 對高水平FIB冠心病患者的cyp2c19基因型頻數、頻率分布對氯吡格雷抗凝效應的影響進行分析，發現cyp2c19基因純合子強代謝型冠心病患者的TT水平[(16.22±0.32)s]高于cyp2c19基因弱代謝型冠心病患者[(12.95±0.30)s]，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。同樣，cyp2c19基因雜合子強代謝型冠心病患者的TT水平[(15.44±0.40)s]高于cyp2c19基因弱代謝型冠心病患者[(12.95±0.30)s]，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。總之，無論是cyp2c19基因純合子還是雜合子強代謝型均比cyp2c19基因弱代謝型對氯吡格雷抗凝效應敏感。見表4。

3 討 論

CYP450同工酶被稱為藥酶，是一系列結構和功能相關酶組成的超家族，也是體內藥物代謝的酶系。CYP450酶代謝的藥物中，12.0%是由cyp2c19基因負責代謝。氯吡格雷是一種血小板聚集抑制劑。作為一種藥物前體，其需要通過氧化作用形成2-氧基-氯吡格雷后再水解成有活性的代謝物[7]。該氧化作用過程中，cyp2c19基因具有一定調節作用。本研究結果表明，無論是純合子還是雜合子強代謝型cyp2c19基因都有助于氯吡格雷的抗凝效應，雖然TT主要用于檢測凝血、抗凝和顯微蛋白溶解系統功能，對血小板聚集的反應并不完全，但其仍然能反應出 cyp2c19基因多態性對氯吡格雷抗血小板效應的影響。

FIB是冠心病的重要危險因子，其通過與血小板膜受體相結合，最終導致急性冠狀動脈血栓的形成[8]。已有研究發現，FIB的關鍵作用是與活化的血小板相互作用[9]，而氯吡格雷是一種血小板聚集抑制劑，FIB水平的高低是否對氯吡格雷抗血小板效應有影響還缺乏詳細研究。本研究中，筆者將已檢測凝血項的患者分為高水平FIB組、正常水平FIB組和低水平FIB組，并總結患者服用氯吡格雷后各組間TT的變化，發現高水平的FIB 對氯吡格雷抗血小板效應并無影響，說明TT雖是檢測纖維蛋白溶解系統功能的重要指標，但受到體內其他凝血因素及相關凝血因子等多因素的影響。雖然已有研究表明，高水平FIB與冠心病的病變程度相關[10]，但本研究所選患者病變程度可能并未達到FIB能影響的程度。

雖然既往研究報道cyp2c19基因多態性對氯吡格雷抗凝效應存在影響，但較少文獻報道cyp2c19基因多態性與FIB聯合影響氯吡格雷的抗凝效應，因此本研究獻報道具有一定創新性。本研究發現，無論是cyp2c19基因純合子還是雜合子強代謝型都比cyp2c19基因弱代謝型對氯吡格雷抗凝效應敏感，對冠心病患者進行cyp2c19基因型別檢測有助于臨床指導用藥，減少冠狀動脈血栓加重的風險。

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Study on correlation between cyp2c19 gene polymorphisms and high concentration of fibrinogen with clopidogrel resistance

LIQinqin

(FieldsurgeryResearchInstitute,DapingHospitalofThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400010,China)

Objective To investigate the relationship between cyp2c19 gene polymorphisms and high concentration of fibrinogen with clopidogrel anticoagulation effect in the patients with coronary atherosclerotic heart disease(CAHD).Methods A total of 611 CAHD patients taking oral clopidogrel in our hospital from May 2015 to November 2015 were selected and their cyp2c19 gene characteristics and the fibrinogen(FIB)levels were analyzed.The patients were divided into the cyp2c19 gene homozygote strong metabolism group(n=261),heterozygote strong metabolim group(n=272)and weak metabolism group(n=78).In all the cases,408 cases were detected the coagulation indicators and divided into the high FIB level group(n=116),normal FIB level group(n=224)and low FIB level group(n=68);then re-divided into the cyp2c19 gene weak metabolism and high FIB level group(n=24),the cyp2c19 gene homozygote strong metabolism and high FIB level group(n=48)and cyp2c19 gene heterozygote strong metabolism and high FIB level group(n=48).The thrombin time(TT)was compared among 3 groups.Results cyp2c19 genotypes were *1/*1,*1/*2,*1/*3,*2/*2,*2/*3 and *3/*3.The gene chip detection found that the above genotypes had 261 cases(42.7%)of cyp2c19*1/*1,235 cases(38.4%)of cyp2c19*1/*2,6% 37 cases(6.0%)of cyp2c19*1/*3,60 cases(9.8%)of cyp2c19*2/*2,17 cases(2.9%)of cyp2c19*2/*3 and 1 case(0.2%)of cyp2c19*3/*3.The cyp2c19 *1,*2 and *3 allele frequencies were 65.0%(794/1 222),30.5%(373/1 222)and 4.5%(55/1 222)respectively;The homozygote strong metabolism group accounted for 42.7%(n=261),the heterozygote strong metabolism group accounted for 44.4%(n=272)and the weak metabolism group accounted for 12.9%(n=78).The TT level had no statistical difference between the high FIB level group and the normal FIB level group(P=0.400 8);no matter homozygote or heterozygote,the cyp2c19 gene strong metabolism type had more sensitivity to the clopidogrel anticoagulation effect than the cyp2c19 gene weak metabolism type(P<0.05).Conclusion The high FIB level has no influence to the clopidogrel anticoagulation effect;the cyp2c19 gene polymorphisms have significant influence on clopidogrel anticoagulation effect,which is conducive to clinical medication guidance and reduce the occurrence rate of coronary arterial thrombus.

cyp2c19; FIB; gene polymorphisms; coronary atherosclerotic heart disease; clopidogrel

李勤琴，女，技師，主要從事腫瘤等方面的研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.22.011

A

1673-4130(2016)22-3123-03

2016-02-01

2016-04-21)