血清抗微生物抗體檢測在炎性腸病臨床診斷中的應用

馬小波，梁朝霞，徐慶雷，張高明

(江蘇省宿遷市沭陽縣人民醫院檢驗科 223600)

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·論 著·

血清抗微生物抗體檢測在炎性腸病臨床診斷中的應用

馬小波，梁朝霞△，徐慶雷，張高明

(江蘇省宿遷市沭陽縣人民醫院檢驗科 223600)

目的 分析血清抗微生物抗體檢測在炎性腸病臨床診斷中的應用。方法 將炎性腸病76例分為克羅恩病(CD)組與潰瘍性結腸炎(UC)組。2組空腹采集靜脈血2 mL，經離心處理后收集血清，采用間接免疫熒光法檢測免疫球蛋白G(IgG)型與免疫球蛋白A(IgA)型抗釀酒酵母菌抗體(ASCA)、抗胰腺腺泡抗體(PAB)及抗小腸杯狀細胞抗體(GAB)，同時檢測抗中性粒細胞細胞質抗體(pANCA)。結果 UC組ASCA-IgG和IgA 的一種以上亞型陽性率低于CD組，其GAB、pANCA陽性率高于CD組(P<0.05)；2組PAB均未有陽性；CD組ASCA陽性特異性、敏感性為96.53%、18.75%；UC組pANCA陽性特異性、敏感性為96.37%、53.33%。結論 血清抗微生物抗體檢測可為炎性腸病臨床診斷提供依據。

血清抗微生物抗體檢測； 炎性腸病； 臨床診斷

炎性腸病是臨床醫學中的罕見病，其可分為克羅恩病(CD)與潰瘍性結腸炎(UC)，具有病因復雜、病程長、疾病復發率高等多種特點，對患者的身心健康造成嚴重影響。近年來，該病的發病率呈逐年增高趨勢，需引起重視。目前，炎性腸病的發病原因尚未明確。有文獻報道，該病的發生與腸道黏膜免疫系統異常反應有密切關系，免疫性抗體如血清抗釀酒酵母菌抗體(ASCA)、核周型抗中性粒細胞細胞質抗體(pANCA)等在該病中的作用被越來越多人關注。因此，在炎性腸病臨床檢驗中測定血清抗微生物抗體，對該病的臨床診斷有重要意義，有助于提高該病臨床診斷準確率[1]。本院于2013年4月至2016年4月對76例炎性腸病患者給予血清抗微生物抗體檢測，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年4月至2016年4月本院收治的炎性腸病患者76例作為研究對象，分為CD組與UC組。CD組16例，男9例，女7例；年齡20～81歲，平均(46.71±7.73)歲；UC組60例，男35例，女25例；年齡19～80歲，平均(46.64±7.59)歲。2組性別、年齡差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 空腹采集靜脈血2 mL，經離心處理后收集血清，送檢。

1.2.2 抗體檢測 選擇間接免疫熒光法進行抗釀酒酵母抗體(ASCA)檢測，包括免疫球蛋白G(IgG)型與免疫球蛋白A(IgA)型，同時進行抗杯狀細胞抗體(GAB)、抗胰腺外分泌腺抗體(PAB)及pANCA的檢測。劑盒由深圳科潤達生物工程公司提供，嚴格依據試劑盒說明書完成檢測。具體操作方法如下：將血清滴加在反應平板上，并在其上面覆蓋上生物薄片，在室溫狀態下靜置0.5 h，之后將生物薄片取出，選用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)進行有效清洗，同時用PBS浸泡5 min，搖晃均勻后，封片，通過熒光顯微鏡觀察。

1.3 統計學處理 統計學分析主要采用SPSS20.0統計軟件包，計數資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 陽性率比較 2組ASCA-IgG陽性率與ASCA-IgA陽性率差異無統計學意義(P>0.05)，UC組ASCA-IgG和IgA的一種以上亞型陽性率低于CD組，2組ASCA-IgG和IgA的一種以上亞型陽性率差異有統計學意義(P<0.05)；2組PAB均未有陽性，UC組GAB陽性率、pANCA陽性率高于CD組，2組GAB、pANCA陽性率差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 血清抗微生物抗體檢測陽性率比較[n(%)]

注：與CD組比較，*P<0.05。

2.2 特異性與敏感性比較 CD組ASCA陽性特異性為96.53%，敏感性為18.75%；UC組pANCA陽性特異性為96.37%，敏感性為53.33%，見表2。

表2 血清抗微生物抗體檢測特異性與敏感性比較(%)

注：-表示無數據。

3 討 論

炎性腸病是一種特發性腸道炎性反應疾病，其發作誘因通常為繼發感染、過度勞累、精神刺激等，臨床表現有腹痛、腹瀉、發熱、貧血等。炎性腸病的發病機制目前尚未明確，臨床診斷較為麻煩，沒有顯著的臨床特征或技術手段進行直接診斷。近年來，不少文獻報道該病的發生機制與腸道黏膜免疫系統有關，對血清學標志物，尤其是某些重要免疫特異性抗體的報道越來越多[2]。在炎性腸病臨床診斷中，血清學標志物發揮著重要作用，其中，常見的血清學標志物主要有ASCA、GAB、PAB及pANCA。對炎性腸病患者進行血清抗微生物抗體檢測，并分析上述4種血清學標志物的陽性率，對該病的臨床診斷有重要意義。

ASCA作為血清反應性抗體，于上個世紀90年代末被發現，但其確切起源目前尚不清楚。ASCA通常作為CD患者關鍵性血清學標志物。Tung等[3]認為，腸通透性增加是CD患者ASCA產生的重要因素，其在研究中發現，經過手術切除病變腸段后，CD患者ASCA水平顯著下降。謝文等[4]指出，腸通透性增加與ASCA的存在沒有關相關性，其認為ASCA在CD患者發病前就已經存在。目前，大部分學者認為CD患者ASCA的產生可能與其遺傳因素有關。ASCA可分為IgG及IgA亞型，國外研究顯示，CD患者ASCA-IgG和IgA的一種以上亞型陽性率為50%～70%，UC患者ASCA-IgG和IgA的一種以上亞型陽性率為5%～15%。王玉萍等[5]研究發現，CD患者ASCA-IgG和IgA的一種以上亞型陽性率為53.8%，UC患者ASCA-IgG和IgA的一種以上亞型陽性率為10.4%。本研究結果顯示，CD患者ASCA-IgG和IgA的一種以上亞型陽性率為18.75%，UC患者ASCA-IgG和IgA的一種以上亞型陽性率為3.33%，兩者陽性率均低于國外，與王玉萍等[5]的報道結果也存在一定差異，原因可能與患者選擇、檢驗操作過程、環境因素、遺傳因素等有關。

GAB屬于炎性腸病的自身抗體，UC患者GAB陽性率高于CD患者[6]。有文獻報道，GAB是UC患者特異性標志物。李璇等[7]在臨床研究中發現，UC患者中僅有15.4%的GAB為陽性，CD患者GAB陽性率與UC患者差異無統計學意義，由此表明GAB 并不能作為UC患者的特異性標志物。本研究UC患者GAB陽性率為13.33%，CD患者GAB陽性率為0，與李璇等[7]的報道的UC患者GAB陽性率相近，但與CD患者陽性率差異較大。目前，GAB 作為UC患者特異性指標仍存在各種質疑，需進一步探索。

PAB于上個世紀80年代被發現，PAB相關抗原為酶原顆粒膜糖蛋白2(GP2)。臨床研究顯示，CD患者結腸黏膜組織中存在的GP2 mRNA顯著高于UC患者，且CD患者GP2 mRNA呈顯著升高趨勢，表明抗GP2抗體對CD患者有著重要作用，其可能參與整個病理生理改變過程。姚芳等[8]指出，PAB是CD患者特異性標志物，對其臨床診斷及預后有重要作用。唐顥等[6]經過研究發現，與CD患者比較，UC患者PAB 陽性率較高，可達24%，因此認為PAB不能作為CD患者的特異性標志物。李慕然等[9]選取炎性腸病患者389例作為研究對象，其中UC患者358例，CD 組31例，結果發現，UC患者及CD患者PAB陽性率均為0，因此認為PAB不能作為炎性腸炎患者的血清學標志物。張穎等[10]報道，UC患者PAB陽性率較低，通常不超過5%，CD患者陽性率相對較高，通常為20%～40%。本研究中UC患者與CD患者PAB陽性率均為0，與李慕然等[9]的報道結果一致，與其他報道不一致，認為PAB對炎性腸病臨床診斷意義不大。總之，PAB作為炎性腸炎患者特異性標志物仍存在較大爭議，需進一步研究與探索。

ANCA作為自身抗體，其主要細胞成分為單核細胞與中性粒細胞。上個世紀80年代，有學者在觀察和研究韋格納肉芽腫患者血清中首次發現ANCA，之后ANCA逐漸被人們認識，并在臨床醫學中發揮越來越重要的作用。目前，ANCA已被認為是系統性血管炎敏感患者血清學診斷過程中必不可少的工具之一。游欣等[11]研究報道，髓過氧化酶是pANCA的主要靶抗原，其通過催化過氧化氫與氯化鐵，并使其反應為次氯酸，后通過氧爆炸引發超氧離子，從而發揮作用，能夠在較短時間內殺滅吞噬某些細菌及微生物。王建強等[12]指出，pANCA具有較高特異性，其在UC患者中的陽性率高于CD患者，對炎性腸病的臨床診斷具有一定指導價值。本研究中UC患者pANCA陽性率為53.33%，而CD患者pANCA陽性率僅為6.25%，兩者pANCA陽性率差異有統計學意義(P<0.05)，提示pANCA是UC患者臨床診斷的重要標志物之一，能為UC患者早期篩查提供必要依據。在特異性和敏感性方面，本研究中CD組ASCA陽性特異性為96.53%，敏感性為18.75%；UC組pANCA陽性特異性為96.37%，敏感性為53.33%，提示ASCA等標志性自身抗體在炎性腸病臨床診斷中的敏感性不高，但其特異性較高。

綜上所述，血清學抗體對炎性腸炎患者的臨床診斷、鑒別診斷及病情評估有重要作用，但其特異性與敏感性方面的研究不夠深入。在炎性腸炎患者臨床診斷中，仍然缺乏科學、合理的血清學抗體應用方案。ASCA、GAB及pANCA是炎性腸炎患者重要的血清學標志物，通過血清抗微生物抗體檢測可為該病的臨床診斷、鑒別診斷及病情評估提供依據，但PAB對該病的臨床診斷未起作用。為了能夠更科學地預測與評估炎性腸炎，需不斷深化對已知抗體的研究，同時加強抗體聯合應用研究，盡可能發揮已知抗體在炎性腸炎預測及評估中的作用，提高炎性腸炎的臨床診治水平。

[1]Prideaux L,Kamm MA,Cruz P,et al.Inflammatorybowel disease serology in Asia and the West[J].World J Gastroenterol,2013,19(37):6207-6213.

[2]曹會芳.血常規檢查在70例炎癥性腸病診斷中的價值[J].中國民族民間醫藥,2016,25(1):75.

[3]Tung CC,Wong JM,Lee WC,et al.Combining TNFSF 15 and ASCA IgA can be used as a predictor for the stenosis/perforating phenotype of Crohn′s disease[J].J Gastroenterol Hepatol,2014,29(4):723-729.

[4]謝文,汪付兵,余曉萍,等.潰瘍性結腸炎患者血清自身抗體檢測的臨床價值[J].國際醫學檢驗雜志,2013,34(15):1959-1960.

[5]王玉萍,王承黨.炎癥性腸病患者血清抗體檢測的臨床意義[J].胃腸病學,2015,20(11):687-690.

[6]唐顥,錢家鳴.血清標志物對炎癥性腸病診斷和預后評判應用進展[J].中國實用內科雜志,2015,35(9):794-797.

[7]李璇,潘芳,劉楊.血清抗微生物抗體檢測診斷炎癥性腸病的意義探究[J].實用醫藥雜志,2016,33(4):317-319.

[8]姚芳,范一宏,曹倩,等.血清學標志物聯合檢測用于診斷克羅恩病的相關研究[J].中華消化雜志,2014,34(6):384-387.

[9]李慕然,劉艷迪,鄭曉莉.血清學抗體檢測對炎癥性腸病的診斷價值[J/CD].中華臨床醫師雜志(電子版),2013,7(6):2425-2428.

[10]張穎,王英德.糞便鈣衛蛋白、抗中性粒細胞胞漿抗體檢測在潰瘍性結腸炎診斷中的價值比較[J/CD].中華臨床醫師雜志(電子版),2012,6(6):1620-1622.

[11]游欣,劉暢,姜政.抗中性粒細胞抗體和抗釀酒酵母細胞抗體對成人炎癥性腸病亞組診斷價值的meta分析[J].現代醫藥衛生,2015,31(7):972-976.

[12]王建強,黃緣.炎癥性腸病血清學標志物的研究進展[J].世界華人消化雜志,2013,21(36):4110-4115.

Application of serum antimicrobial antibody detection in clinical diagnosis of inflammatory bowel disease in clinical diagnosis

MAXiaobo,LIANGChaoxia△,XUQinglei,ZHANGGaoming

(DepartmentofClinicalLaboratory,ShuyangCountyPeople′sHospital,Suqian,Jiangsu223600,China)

Objective To analyze the application of antimicrobial antibody detection in the clinical diagnosis of inflammatory bowel disease.Methods Seventy-six cases of inflammatory bowel disease were divided into the Crohn′ s disease(CD)group and ulcerative colitis(UC)group.2 mL of fasting blood were collected in the two group and centrifuged for collecting serum.The levels of IgG,IgA,ASCA,PAB and GAB were detected by adopting the indirect immunofluorescence method,meanwhile pANCA was detected.Results The positive rate of more than 1 subtype of ASCA IgG and IgA in the UC group was lower than that in the CD group,its GAB,pANCA positive rates were higher than those of the CD group(P<0.05);the two groups had no PAB positive.The specificity and sensitivity of ASCA(+)in the CD group were 96.53% and 18.75% respectively;which in the UC group were 96.37% and 53.33% respectively.Conclusion The serum antimicrobial antibody detection can provide a basis for clinical diagnosis of inflammatory bowel disease.

detection of antimicrobial antibody; inflammatory bowel disease; clinical diagnosis

馬小波，男，主管技師，主要從事檢驗方面的研究。△

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.22.025

A

1673-4130(2016)22-3159-03

2016-02-07

2016-08-27)