環(huán)境孕激素和糖皮質(zhì)激素的生態(tài)毒理效應(yīng)：進(jìn)展與展望

趙硯彬，胡建英

北京大學(xué)城市與環(huán)境學(xué)院，北京 100871

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環(huán)境孕激素和糖皮質(zhì)激素的生態(tài)毒理效應(yīng)：進(jìn)展與展望

趙硯彬，胡建英

北京大學(xué)城市與環(huán)境學(xué)院，北京 100871

孕激素和糖皮質(zhì)激素的環(huán)境行為和生態(tài)毒理效應(yīng)是即環(huán)境雌激素和雄激素之后近年來國內(nèi)外環(huán)境激素研究的又一熱點(diǎn)課題。由于廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)療等，這兩類物質(zhì)通過污水處理廠不完全處理和人類農(nóng)業(yè)或畜牧業(yè)活動的直接排放從而進(jìn)入水體環(huán)境，進(jìn)而對生態(tài)系統(tǒng)和人類健康產(chǎn)生潛在危害。環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)顯示，在地表水中，多種物質(zhì)存在ng·L-1濃度水平；在污水處理廠進(jìn)出水中，濃度水平更高，甚至達(dá)到數(shù)百ng·L-1。孕激素和糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)主要通過激素受體途徑發(fā)揮毒性效應(yīng)，如孕激素受體(PR), 糖皮質(zhì)激素受體(GR)和鹽皮質(zhì)激素受體(MR)。對水生脊椎動物的內(nèi)分泌系統(tǒng)干擾作用是目前研究的焦點(diǎn)。這兩類物質(zhì)能夠影響腦垂體性腺軸轉(zhuǎn)錄水平和相應(yīng)激素合成，影響性腺發(fā)育以及導(dǎo)致繁殖能力損傷。這一毒性效應(yīng)甚至發(fā)生在環(huán)境濃度水平之下。除此之外，隨著組學(xué)技術(shù)的廣泛應(yīng)用，更多的潛在毒性終點(diǎn)不斷被發(fā)掘，如對晝夜節(jié)律系統(tǒng)和免疫應(yīng)答的干擾作用。這些研究引導(dǎo)著對環(huán)境孕激素和糖皮質(zhì)激素生態(tài)毒理學(xué)效應(yīng)更加深入的理解。

孕激素；糖皮質(zhì)激素；環(huán)境行為；生態(tài)毒理效應(yīng)；內(nèi)分泌干擾；晝夜節(jié)律；免疫反應(yīng)

內(nèi)分泌干擾物在較低濃度下能夠干擾生物體內(nèi)源激素的合成、釋放、轉(zhuǎn)運(yùn)、結(jié)合、或代謝, 從而影響機(jī)體的內(nèi)穩(wěn)態(tài)環(huán)境、干擾生物體發(fā)育以及繁殖過程，因此其環(huán)境污染問題已經(jīng)成為聯(lián)合國需要全球共同應(yīng)對的環(huán)境主題[1]。內(nèi)分泌干擾物質(zhì)種類繁多，其中天然和人工合成的五大類類固醇激素類物質(zhì)是被認(rèn)為活性最強(qiáng)，因此最為關(guān)注的[2-3]。污水處理廠的不完全處理和人類農(nóng)業(yè)或畜牧業(yè)活動的直接排放都會導(dǎo)致水環(huán)境的污染，進(jìn)而危及生態(tài)系統(tǒng)和人類健康[2-4]。

環(huán)境雌激素和雄激素類物質(zhì)的環(huán)境行為和生態(tài)毒理學(xué)效應(yīng)近年來已有廣泛報(bào)道[5-7]。與此相比，對環(huán)境孕激素和糖皮質(zhì)激素的生態(tài)毒理學(xué)的研究則相對較少。天然和人工合成的孕激素類物質(zhì)如孕酮和炔諾酮等廣泛用于人類和動物醫(yī)療，包括人類避孕、輔助生殖、癌癥治療以及動物繁殖育種控制和生長調(diào)節(jié)[8]；而糖皮質(zhì)激素如氫化可的松和倍他米松主要用于抗炎反應(yīng)，免疫抑制和抗休克等[9]。由于這兩類物質(zhì)作為醫(yī)藥品的廣泛使用，環(huán)境介質(zhì)中已經(jīng)檢出這些物質(zhì)，其濃度處于ng·L-1水平[10-12]。有研究已經(jīng)報(bào)道環(huán)境孕激素能夠?qū)λ镉绕涫囚~類的內(nèi)分泌系統(tǒng)造成損傷，如改變腦-垂體-性腺軸轉(zhuǎn)錄水平，影響性腺發(fā)育，改變體內(nèi)激素濃度和降低繁殖能力[10-11]。目前對糖皮質(zhì)激素的毒性研究雖然較少，有文獻(xiàn)也表明其能夠影響魚類體內(nèi)的激素濃度，造成精巢發(fā)育遲緩，精子質(zhì)量下降以及繁殖損傷[13]。由于對環(huán)境孕激素和糖皮質(zhì)激素的關(guān)注尚處于起步階段，目前還缺少有關(guān)環(huán)境行為和生態(tài)毒理效應(yīng)的系統(tǒng)性研究。

本文在簡述當(dāng)前孕激素和糖皮質(zhì)激素的環(huán)境來源及其水環(huán)境污染現(xiàn)狀的基礎(chǔ)上，從轉(zhuǎn)錄水平，組織學(xué)，生理學(xué)和繁殖能力損傷角度系統(tǒng)綜述了這兩類激素對水生生物內(nèi)分泌系統(tǒng)的干擾作用。并對近年來通過組學(xué)(Omics)等報(bào)道的孕激素和糖皮質(zhì)激素新毒性終點(diǎn)和潛在的研究方向進(jìn)行了歸納總結(jié)和展望，期望能對環(huán)境孕激素和糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)的生態(tài)毒理學(xué)效應(yīng)研究發(fā)展和環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)提供一定的參考。

1 環(huán)境污染現(xiàn)狀(Sources and concentrations in the environment)

1.1 環(huán)境來源

由于目前的城市污水處理工藝并沒有將環(huán)境激素類物質(zhì)作為主要去除目標(biāo)，和雌雄激素類物質(zhì)類似，仍有相當(dāng)部分的孕激素和糖皮質(zhì)激素未能去除而進(jìn)入水環(huán)境[2-3]。畜牧養(yǎng)殖場的養(yǎng)殖廢水直接排放是導(dǎo)致水環(huán)境中孕激素和糖皮質(zhì)激素殘留的另一重要途徑，尤其是在發(fā)展中國家。中國國家環(huán)保總局在全國23個(gè)省市進(jìn)行的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，全國90%的規(guī)模化畜禽養(yǎng)殖場未經(jīng)過環(huán)境影響評價(jià)，60%的養(yǎng)殖場缺乏必要的污染防治措施[14]。即使在大型畜禽養(yǎng)殖場中，也有大約20%～30%的養(yǎng)殖場廢水是直接排向地表水體的[15]。考慮到孕激素廣泛用于動物繁殖育種控制和作為生長促進(jìn)劑，糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)則用于抗炎反應(yīng)，免疫抑制等疾病治療過程，養(yǎng)殖場廢水的直接排放必然會成為一個(gè)重要的污染源。近年來相關(guān)報(bào)道顯示養(yǎng)殖場廢水中往往含有超高濃度水平的激素類物質(zhì)，如國內(nèi)部分地區(qū)的養(yǎng)殖場廢水中分別含有高達(dá)14.9 μg·L-1和180 ng·L-1的孕激素和糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)[16]。總體而言，人工合成的孕激素和糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)的使用量要遠(yuǎn)高于合成雌激素和雄激素類物質(zhì)[11]。目前國內(nèi)關(guān)于孕激素和糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)使用量和排放并沒有詳細(xì)的報(bào)道，但是瑞士相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，孕激素物質(zhì)使用量每年達(dá)到700 kg左右，其中孕酮(P4)為495 kg，其他合成類孕激素為213 kg左右[11]。英國和法國的每年孕激素物質(zhì)消費(fèi)量分別高達(dá)到1 700 kg和13 000 kg[17-18]。另外，英國2006年糖皮質(zhì)激素的消費(fèi)量也高達(dá)4 400 kg，幾乎是雌激素(490 kg)和雄激素類物質(zhì)(310 kg)消費(fèi)量的10倍之多[18]。

1.2 污水處理廠濃度水平

城市污水處理廠(STP)承接著絕大部分市政生活污水的處理，因此在其進(jìn)水中往往會檢測出高濃度的孕激素和糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)的殘留。目前已經(jīng)有多個(gè)文獻(xiàn)報(bào)道了其在STP進(jìn)水中的濃度水平，范圍涵蓋北美、歐洲和亞太多個(gè)國家和地區(qū)。2007年，在加拿大4個(gè)STP進(jìn)水樣品的激素濃度調(diào)查中，F(xiàn)ernandez等[19]發(fā)現(xiàn)孕激素炔諾酮(NET)和甲基炔諾酮(NOR)存在非常高的檢出率，并且濃度分別高達(dá)224 ng·L-1和48 ng·L-1。Pauwels等[20]在比利時(shí)STP進(jìn)水中廣泛檢出孕激素P4，濃度水平在5～33 ng·L-1左右，并顯示出季節(jié)性變化的規(guī)律。我國城市污水處理廠進(jìn)水中對7種孕激素類物質(zhì)進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)孕激素P4濃度水平最高，達(dá)到33 ng·L-1。其次是17α-羥基孕酮(17-OHP)，濃度水平達(dá)到14 ng·L-1[21]。在我國廣東地區(qū)多個(gè)STP進(jìn)水中，同樣檢測到多種孕激素類物質(zhì)，其中以P4和炔諾酮(NGT)為主，濃度水平在5～59 ng·L-1之間[22-23]。

和孕激素類似，環(huán)境糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)檢測也顯示出相近濃度水平的STP進(jìn)水殘留。Chang等[25]于2007年首次在環(huán)境中檢出了多種糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)。在對北京7處污水處理廠6種糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)的監(jiān)測中發(fā)現(xiàn)絕大數(shù)水樣中均存在多種糖皮質(zhì)激素殘留。其中CRL的濃度水平最高，達(dá)到120 ng·L-1，其次是CRN，達(dá)到86 ng·L-1[25]。之后Piram等[24]在2008年在法國里昂STP進(jìn)水中檢出了8種糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)，多數(shù)物質(zhì)濃度范圍在十?dāng)?shù)個(gè)ng·L-1左右，其中可的松(CRN)和氫化可的松(CRL)分別高達(dá)174 ng·L-1和53 ng·L-1。Fan等[26]于2011年對北京一污水處理廠7種糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)進(jìn)行質(zhì)量平衡計(jì)算，研究物質(zhì)在城市污水處理廠的環(huán)境行為。發(fā)現(xiàn)CRL和CRN的濃度水平最高，平均濃度達(dá)到 15～22 ng·L-1。在我國廣東地區(qū)多個(gè)STP進(jìn)水檢測中也同樣檢出多種糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)，其中以CRN、CRL和地塞米松(DEX)為主，CRN和CRL濃度水平分別達(dá)到50 ng·L-1和29 ng·L-1[22]。總體來說，STP進(jìn)水中一般存在著數(shù)個(gè)至數(shù)百個(gè)ng·L-1濃度水平的孕激素和糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)殘留。

污水處理工藝一般能有效去除這兩類激素，去除率達(dá)到73%～99%左右，特別是天然糖皮質(zhì)激素較容易被城市污水處理廠中的生物處理單元去除[26]，因此其在STP出水中濃度一般處于較低水平。Vulliet等[27]分析了2006年4～6月法國里昂STP的多個(gè)出水樣品，其中P4、NET和左炔諾孕酮(LNG)的濃度水平穩(wěn)定在十?dāng)?shù)個(gè)ng·L-1范圍。Chang等[3]在北京STP出水中，共檢出了6種孕激素類物質(zhì)，濃度水平多在數(shù)個(gè)ng·L-1以下。Fan等[26]在2011年同樣對北京STP出水的激素檢測中觀察到了類似濃度水平，其中P4最高濃度為5.0 ng·L-1。同樣，廣東STP出水中孕激素類物質(zhì)濃度水平和北京接近，在數(shù)個(gè)ng·L-1左右[22]。和孕激素環(huán)境行為類似，STP出水檢出的環(huán)境糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)也大體穩(wěn)定在數(shù)個(gè)ng·L-1濃度水平。如在北京STP出水中，7種糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)濃度水平多小于數(shù)個(gè)ng·L-1，其中濃度水平最高的CRL和CRN，濃度分別約為3.2 ng·L-1和2.6 ng·L-1[3,26]。盡管如此，STP出水中檢出高濃度的孕激素和糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)殘留也有過多次報(bào)道，如Fernandez等[19]在加拿大STP出水中檢測到孕激素NOR最高濃度高達(dá)126 ng·L-1。Al-Odaini等[28]在馬來西亞STP出水中檢測到NET濃度高達(dá)188 ng·L-1。Piram等[24]對法國一STP出水檢測顯示，8種檢出的糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)中CRN濃度高達(dá)229 ng·L-1，這是目前報(bào)道中濃度最高的數(shù)據(jù)。

1.3 地表水濃度水平

多個(gè)國家如美國、法國、瑞士和中國等已經(jīng)對地表水中孕激素和糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)殘留濃度進(jìn)行過相關(guān)研究報(bào)道。2011年，Vulliet等[29]分析了法國南部71個(gè)地表水樣品激素殘留，發(fā)現(xiàn)P4幾乎存在于所有檢測水樣中，濃度范圍在0.4～11 ng·L-1左右。平均濃度最高的孕激素類物質(zhì)是LNG，濃度達(dá)到3.6 ng·L-1。Velicu等[30]分析了美國賓州地區(qū)21個(gè)地點(diǎn)的地表水中激素濃度，其中P4濃度為7.3～11.8 ng·L-1。Ammann等[31]分析了瑞士河流中近30種孕激素和糖皮質(zhì)激素及其代謝產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)絕大部分物質(zhì)存在數(shù)個(gè)ng·L-1左右濃度水平。其中P4和CRL呈現(xiàn)出較高的濃度水平，分別達(dá)到10 ng·L-1和6 ng·L-1。國內(nèi)地表水中孕激素和糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)殘留濃度與國外報(bào)道濃度類似。Chang等[3,21]在2009年和2011年分別分析了北京地區(qū)多條河流水體的類固醇激素濃度，發(fā)現(xiàn)大部分水樣都能夠檢測出數(shù)個(gè)ng·L-1濃度水平的孕激素和糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)。其中孕激素MGA、MPA和糖皮質(zhì)激素COR濃度分別高達(dá)34 ng·L-1、34 ng·L-1和22 ng·L-1。我國廣東多條河流中孕激素NOR和糖皮質(zhì)激素CRN濃度最高也可分別達(dá)到22 ng·L-1和1.9 ng·L-1[22]。

本文進(jìn)一步對近年來發(fā)表的25篇環(huán)境孕激素和12篇糖皮質(zhì)激素的環(huán)境檢出濃度數(shù)據(jù)進(jìn)行歸納和整理，系統(tǒng)比較了典型環(huán)境孕激素和糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)在城市污水處理廠進(jìn)出水和地表水體中的濃度水平(圖1)，其中包括6種孕激素(P4、NET、NOR、MPA、MGA、LNG)和5種糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)(CRN、CRL、PRE、PREL、DEX)。從圖中可以看出，在城市污水處理廠進(jìn)水中，3種孕激素NET、LNG和P4的濃度水平一般是最高的，其中NET的濃度水平甚至高達(dá)224 ng·L-1。而在出水中NET、NOR和LNG的濃度水平最高，NET最高為188 ng·L-1。在地表水中濃度水平最高的是P4、NOR和LNG，一般為數(shù)個(gè)ng·L-1，P4的最高濃度值約為47 ng·L-1。目前報(bào)道的地表水中NET的濃度一般較低，可能和其易降解性有關(guān)。在城市污水處理廠進(jìn)水樣品中，糖皮質(zhì)激素類CRN和CRL的濃度水平最高，一般為數(shù)十至數(shù)百ng·L-1，最高值分別達(dá)到285 ng·L-1和270 ng·L-1。而其他3種物質(zhì)PRE、PREL和DEX濃度水平一般低于10 ng·L-1。STP也能有效去除糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)，在STP出水中糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)都處于較低的濃度水平，一般低于1 ng·L-1。值得注意的是在北京地表水中6種糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)的平均濃度均高于STP出水濃度，一般在幾個(gè)ng·L-1濃度水平左右，顯示有可能存在未經(jīng)STP處理的廢水直接排放。

考慮到類固醇激素類物質(zhì)往往具有極高的生物活性，如數(shù)個(gè)ng·L-1濃度水平的雌激素類物質(zhì)EE2即能造成魚類繁殖能力損傷和種群水平的下降[5]，目前環(huán)境水平的孕激素和糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)是否影響水生生物的內(nèi)分泌系統(tǒng)及相應(yīng)毒理學(xué)效應(yīng)是亟待研究闡釋的重點(diǎn)課題。

2 內(nèi)分泌干擾效應(yīng)(Endocrine disruptions)

2.1 繁殖能力損傷與組織生理學(xué)變化

現(xiàn)有研究已經(jīng)表明多種孕激素類物質(zhì)如P4、NET、LNG、DDG(去氫孕酮)和DRS(屈螺酮)能夠顯著抑制水生生物性腺發(fā)育過程并抑制其繁殖能力。Zeilinger等[32]將黑頭呆魚雌魚連續(xù)21 d暴露LNG或DRS，觀察是否影響產(chǎn)卵能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)LNG在0.8 ng·L-1環(huán)境濃度水平下，雌魚卵巢發(fā)育和卵細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生顯著改變，近70%的產(chǎn)卵能力損失。Runnalls等[33]將黑頭呆魚暴露于100 ng·L-1LNG和孕二烯酮(gestodene)，發(fā)現(xiàn)這兩類物質(zhì)能夠立即使雌魚停止產(chǎn)卵，孕二烯酮對繁殖能力損傷的最低有效作用濃度(LOEC)為1 ng·L-1。1.2 ng·L-1的NET也能夠顯著損傷黑頭呆魚的繁殖能力[34]。孕激素對魚卵繁殖能力的影響，存在顯著的種間差異。如相同暴露條件下的青鳉魚，25 ng·L-1的NET才能顯著降低青鳉魚的繁殖能力[34]，顯示黑頭呆魚比青鳉魚對環(huán)境孕激素類物質(zhì)更加敏感。和青鳉魚相比，斑馬魚對孕激素的敏感性更低，連續(xù)21 d暴露742 ng·L-1的P4才能顯著抑制雌魚產(chǎn)卵，MGA為666 ng·L-1，DDG為1 263 ng·L-1，DRS則為2 763 ng·L-1[35-37]。考慮到實(shí)際水環(huán)境中LNG和NET等孕激素濃度水平一般在數(shù)個(gè)至數(shù)十個(gè)ng·L-1，由此可能產(chǎn)生敏感魚種的繁殖毒性，從而在種群水平上影響生態(tài)系統(tǒng)。孕激素繁殖毒性的分子機(jī)理目前尚缺乏深入的研究報(bào)道，一般認(rèn)為與影響魚體相關(guān)激素水平和雌魚卵巢結(jié)構(gòu)的改變有關(guān)，如抑制卵泡刺激激素(FSH)和黃體生成素(LH)的合成，抑制卵巢發(fā)育，造成卵原細(xì)胞退化等可能是造成繁殖能力下降的主要因素[10-11]。

圖1 典型孕激素和糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)環(huán)境濃度注：In. 污水處理廠進(jìn)水；Ef. 污水處理廠出水；Sur. 地表水。Fig. 1 Concentrations of progestogens and glucocorticoids in the aqueous environmentNote: In. STP influents; Ef. STP effluents; Sur. Surface water. P4, progesterone; NET, norethindrone; NOR, norgestrel; MPA, medroxyprogesterone acetate; MGA, megestrol acetate; LNG, levonorgestrel; CRN, cortisone; CRL, cortisol; PRE, prednisone; PREL, prednisolone; DEX, dexamethasone.

和繁殖能力損傷這一毒性終點(diǎn)相比，有更多研究圍繞環(huán)境孕激素類物質(zhì)對魚類組織生理學(xué)的影響，特別在精卵巢發(fā)育和魚體類固醇激素濃度水平作為毒性作用靶點(diǎn)的研究已經(jīng)積累較多。研究發(fā)現(xiàn)1 ng·L-1的LNG能夠顯著抑制黑頭呆魚雌魚體內(nèi)雄激素11-KT的濃度水平[38]，相類似的31 ng·L-1的LNG能夠顯著抑制斜齒鳊雄魚體內(nèi)11-KT濃度水平[39]。1 ng·L-1的醋酸環(huán)丙孕酮(CPA)能夠同時(shí)顯著抑制雄性和雌性底鳉體內(nèi)雄激素TTR和雌激素17β-E2濃度水平[40]；10 ng·L-1的NET同樣能夠顯著抑制黑頭呆魚雌魚體內(nèi)17β-E2濃度水平[34]。類似的魚體類固醇激素水平改變同樣存在于其他孕激素類物質(zhì)如DRS、MGA和desogestrel的暴露研究[33,37]。性腺組織學(xué)變化也是孕激素類物質(zhì)主要作用終點(diǎn)。抑制雌魚卵巢發(fā)育，改變卵細(xì)胞構(gòu)成和造成卵巢退化是最常觀察到的孕激素毒性作用現(xiàn)象。在雄魚精巢中，干擾精子發(fā)育過程和改變成熟精子和未成熟精細(xì)胞比例同樣在多種孕激素類物質(zhì)暴露實(shí)驗(yàn)中被觀察到。如Zhao等[36]將斑馬魚連續(xù)21 d暴露于不同濃度的P4或DRS，發(fā)現(xiàn)這兩類孕激素都能夠顯著改變雌魚卵巢結(jié)構(gòu)，造成卵原細(xì)胞的退化。與此同時(shí)，雄魚精巢中成熟精子的比例顯著增加。在DDG以及DDG和MPA聯(lián)合暴露實(shí)驗(yàn)中，斑馬魚精卵巢也出現(xiàn)同樣的變化特征[35]。

目前關(guān)于環(huán)境糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)對魚類繁殖能力影響的相關(guān)報(bào)道較少。2012年，LaLone等[41]報(bào)道了短期暴露地塞米松對黑頭呆魚繁殖能力的影響。發(fā)現(xiàn)在高濃度地塞米松(500 μg·L-1)暴露下，能夠造成約50%的產(chǎn)卵能力損失。與此同時(shí)，還造成雌魚體內(nèi)17β-E2濃度水平以及相關(guān)基因如VTG表達(dá)水平的顯著降低。類似的組織生理學(xué)變化同樣發(fā)現(xiàn)于其他多種魚類暴露研究中。如Consten等[42]證明飲食暴露于高濃度CRL的雄性鯉魚體內(nèi)11-KT濃度水平受到顯著的抑制；Guiloski等[43]發(fā)現(xiàn)DEX能顯著降低脂鯉體內(nèi)睪酮TTR濃度水平；Shankar等[44]將雄性弓背魚暴露于CRL后，發(fā)現(xiàn)對其精巢發(fā)育能夠造成顯著損傷，如增加TSI指數(shù)和抑制精子發(fā)生過程等。雖此類研究發(fā)現(xiàn)的糖皮質(zhì)激素毒性都是在高于環(huán)境濃度下的實(shí)驗(yàn)暴露結(jié)果，最近的一個(gè)研究發(fā)現(xiàn)低濃度下(100 ng·L-1)的合成糖皮質(zhì)激素beclomethasone dipropionat可以導(dǎo)致黑頭呆魚的繁殖毒性，如抑制卵黃蛋白原的合成和改變雄魚第二性征[45]。雖然目前環(huán)境中并未檢測該合成糖皮質(zhì)激素，考慮到相似的GR結(jié)合機(jī)制，環(huán)境中的糖皮質(zhì)激素可能導(dǎo)致魚類特別是敏感物質(zhì)的繁殖毒性，有必要展開系統(tǒng)的研究。

2.2 腦垂體性腺軸基因轉(zhuǎn)錄水平

盡管環(huán)境孕激素內(nèi)分泌干擾效應(yīng)研究已不斷擴(kuò)展和深入，但對其分子機(jī)理的理解目前還十分欠缺。一般認(rèn)為，孕激素能夠通過受體途徑調(diào)控眾多腦垂體性腺軸相關(guān)基因表達(dá)水平，進(jìn)而改變體內(nèi)類固醇激素水平和性腺發(fā)育過程。現(xiàn)有魚類暴露實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明fshβ、lhβ、cyp11b和hsd17b3等多個(gè)HPG軸激素調(diào)控或合成基因是環(huán)境孕激素類物質(zhì)的潛在作用靶點(diǎn)。fshβ和lhβ基因編碼魚類腦垂體分泌的多肽類促性腺激素，兩者協(xié)同作用刺激卵巢中卵泡細(xì)胞的生長和發(fā)育過程[46]。暴露于較高濃度LNG的鳊魚和暴露于MGA的斑馬魚腦中，fshβ和lhβ的表達(dá)水平都呈現(xiàn)顯著抑制[37,39]。毒理基因組學(xué)數(shù)據(jù)還揭示，短期暴露于P4和DRS的斑馬魚雌魚魚腦中g(shù)nrh2和cyp19b基因同樣能夠被顯著抑制[47]。gnrh2作為一種多肽類的促性腺激素釋放激素，主要功能是使垂體釋放FSH和LH[46]。Cyp19b則主要負(fù)責(zé)魚腦內(nèi)雌激素17β-E2的合成過程[48]。因此上述研究結(jié)果表明，孕激素類物質(zhì)能夠顯著抑制魚腦相關(guān)激素合成基因的表達(dá)。在魚類性腺中，類固醇激素合成基因cyp11b、cyp17、hsd11b2和hsd17b3是被廣泛報(bào)道的孕激素作用靶點(diǎn)。當(dāng)斑馬魚暴露于P4、MPA、DDG或者M(jìn)GA等多種孕激素類物質(zhì)中，上述一種或者多種基因的表達(dá)水平一般都能夠被顯著抑制[35,37,49]。因?yàn)樯鲜龌蛑饕獏⑴c魚體孕激素，雄激素和雌激素的合成和轉(zhuǎn)化過程[50]，因而孕激素的顯著抑制作用有可能進(jìn)一步改變魚體內(nèi)的類固醇激素水平，并從而影響到魚類的性腺發(fā)育和繁殖能力。

糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)對腦垂體性腺軸基因表達(dá)的影響與孕激素類似，研究表明兩者有著十分相近的作用靶點(diǎn)。長期暴露于CRL的雄性鯉魚腦垂體發(fā)育受到顯著的抑制，其sGNRH，fshβ和lhβ基因的表達(dá)水平同時(shí)存在顯著的下降[42]。類似的作用模式同樣出現(xiàn)在DEX暴露下的鯉魚腦垂體發(fā)育過程[42]。在日本鰻鱺中，CRL不僅可以顯著降低魚體雄激素11-KT濃度水平，并能夠顯著改變相應(yīng)雄激素合成酶基因hsd11b基因表達(dá)[51]。除了對腦垂體性腺軸的影響，CRL暴露同樣能夠?qū)ο∮絮L鯽腦垂體腎上腺軸產(chǎn)生作用，造成現(xiàn)腦垂體中腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRF)等發(fā)生顯著的上調(diào)[52]。總體而言，糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)對HPG軸相關(guān)基因表達(dá)研究報(bào)道相對較少，主要關(guān)注于單一物質(zhì)CRL，且相關(guān)暴露研究往往關(guān)注于高濃度水平。

2.3 魚類早期發(fā)育影響

除了對成魚的影響，環(huán)境類固醇激素同樣能夠影響幼魚激素合成調(diào)控基因的表達(dá)和干擾魚類早期性別分化和發(fā)育過程。多種環(huán)境雌激素類物質(zhì)如炔雌醇(EE2)不僅可以激活雌激素受體顯示雌激素活性，而且還能夠在魚類胚胎發(fā)育過程中影響類固醇激素合成酶基因的表達(dá)，因此能在較低的濃度下誘導(dǎo)雌雄同體的發(fā)生，甚至改變雌雄性別[53-55]。環(huán)境雄激素類物質(zhì)如甲基睪酮(MT)和群勃龍(17β-trenbolone)等對魚類早期發(fā)育的影響也被廣泛報(bào)道，如對HPG軸基因表達(dá)水平的影響以及魚類雄性化現(xiàn)象[56-57]。除了雌雄激素類物質(zhì)之外，最近的研究表明孕激素類物質(zhì)也能夠影響魚類腦垂體性腺軸基因表達(dá)及其早期發(fā)育過程。Zucchi等[58]分析了P4、NET和LNG等多種孕激素類物質(zhì)對斑馬魚早期胚胎發(fā)育的影響，發(fā)現(xiàn)3種物質(zhì)均能夠顯著改變激素受體基因PR、AR和雄激素合成酶基因hsd17b3的表達(dá)水平。其展現(xiàn)出相互類似的基因變化規(guī)律，并呈現(xiàn)出一定的時(shí)間依賴型的動態(tài)調(diào)控特征，甚至在環(huán)境濃度水平下(2 ng·L-1)就能改變相關(guān)基因的表達(dá)。同樣，Liang等[50,59]對P4和NOR暴露的斑馬魚胚胎發(fā)育過程的詳細(xì)研究也闡釋了相同的現(xiàn)象。環(huán)境濃度暴露下，斑馬魚HPG、HPA和HPT軸眾多激素合成相關(guān)基因以及激素受體基因表達(dá)水平均呈現(xiàn)顯著的動態(tài)變化規(guī)律。類似現(xiàn)象同樣發(fā)生在黑頭呆魚(fathead minnow)早期發(fā)育過程中。Overturf等[60]評估了多種暴露條件下LNG對黑頭呆魚早期胚胎發(fā)育的影響，發(fā)現(xiàn)LNG顯著抑制芳香化酶基因CYP19a1和其他多種類固醇激素合成酶基因如20β-hsd、3β-hsd等，并且能夠顯著抑制幼魚生長發(fā)育過程。目前環(huán)境孕激素對魚類早期發(fā)育的影響仍然主要集中于P4和LNG等少數(shù)物質(zhì)，人們對環(huán)境中為數(shù)眾多的人工合成孕激素類物質(zhì)的早期胚胎發(fā)育毒性仍然知之甚少。

環(huán)境糖皮質(zhì)激素對魚類早期發(fā)育影響相關(guān)報(bào)道主要集中在CRL和DEX。目前研究主要關(guān)注于胚胎早期生長發(fā)育過程及相應(yīng)形態(tài)學(xué)變化，對性別分化發(fā)育以及相關(guān)基因表達(dá)水平的影響目前并沒有相關(guān)報(bào)道。如Hillegass等[61]發(fā)現(xiàn)將斑馬魚胚胎暴露于高濃度的CRL和DEX，其金屬蛋白酶基因表達(dá)受到顯著抑制，并造成胚胎發(fā)育異常現(xiàn)象，如顱面畸形、心包水腫和骨骼彎曲。黑頭呆魚胚胎在高濃度DEX暴露下，其生長發(fā)育過程受到顯著的抑制，幼魚體長體重明顯低于對照組水平[62]。目前尚無環(huán)境濃度水平糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)對魚類早期生長發(fā)育毒性的報(bào)道。

2.4 初步環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評估

研究進(jìn)一步整理和分析了多種典型孕激素和糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)內(nèi)分泌干擾效應(yīng)的最低有效作用濃度(LOEC)數(shù)據(jù)(包括繁殖能力損傷、體內(nèi)激素水平和性腺組織學(xué)變化以及基因轉(zhuǎn)錄水平的改變)，并與相應(yīng)環(huán)境水體濃度數(shù)據(jù)進(jìn)行了比較(圖2)。在6種孕激素類物質(zhì)中，NOR、P4和LNG的環(huán)境地表水濃度水平與其LOEC最為接近，顯示存在潛在生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)。值得注意的是盡管地表水中NOR的濃度水平并不高，通常在10 ng·L-1左右，但在與此相近濃度下，已經(jīng)能夠造成斑馬魚性別比失調(diào)，HPG軸和HPA軸基因轉(zhuǎn)錄水平的顯著變化[63]。在糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)中，目前僅有CRL和DEX兩類物質(zhì)的較系統(tǒng)的內(nèi)分泌干擾毒性研究數(shù)據(jù)，其最低有效作用濃度(LOEC)一般較高，在數(shù)百ng·L-1至數(shù)百μg·L-1左右。考慮到其地表水環(huán)境濃度一般低于10 ng·L-1，可見其目前內(nèi)分泌干擾效應(yīng)的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)相對較低 (圖2)。

圖2 孕激素和糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)初步環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評估注：E，最低有效作用濃度(LOEC)(包含繁殖、生理、組織及轉(zhuǎn)錄水平毒性效應(yīng))；S，地表水濃度水平。Fig. 2 Tentative risk assessment of progestogens and glucocorticoidsNote, E, Lowest observed effect concentrations (LOEC) in vertebrates. All effects (reproductive, physiological, histological and transcriptional effects) are included. S, Surface water concentrations.

3 新的毒性作用終點(diǎn) (Novel Endpoints)

3.1 毒性數(shù)據(jù)分析

隨著對環(huán)境類固醇激素毒理效應(yīng)研究的不斷深入，以及各種組學(xué)“omics”技術(shù)的應(yīng)用，近年來不斷有關(guān)于其新毒性作用靶點(diǎn)的相關(guān)報(bào)道，而且這些毒性作用也不再局限于內(nèi)分泌系統(tǒng)干擾效應(yīng)。本文分析整理了近10年來(2005—2015年)環(huán)境孕激素和糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)生態(tài)毒理效應(yīng)研究相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，對共計(jì)83篇報(bào)道的物質(zhì)類型和毒性作用終點(diǎn)進(jìn)行了歸納和解析。在43篇孕激素類物質(zhì)毒性相關(guān)報(bào)道中，有約77% (33/43)關(guān)注于內(nèi)分泌干擾效應(yīng) (圖3A)，其中主要包括繁殖能力損傷，激素水平和性腺組織學(xué)變化，以及HPG 軸等相關(guān)基因表達(dá)水平的改變。孕激素物質(zhì)中對P4、LNG和NET的毒理學(xué)研究最多，相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道占總報(bào)道的69.2%(圖3B)。和環(huán)境孕激素相關(guān)研究類似，在40篇糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)毒性相關(guān)報(bào)道中，有約55% (22/40)關(guān)注于內(nèi)分泌干擾效應(yīng) (圖3D)，其主要包括干擾精卵巢發(fā)育，HPG 軸基因表達(dá)變化以及雌魚雄性化效應(yīng)。其中，研究大多集中在CRL和DEX這兩類物質(zhì)，相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道占總報(bào)道的92.3%(圖3E)。

除內(nèi)分泌干擾效應(yīng)這一毒性終點(diǎn)之外，近年來一些新的毒性作用終點(diǎn)不斷被發(fā)現(xiàn)，其中晝夜節(jié)律(circadian rhythm)、免疫反應(yīng)(immune response)、代謝過程(metabolism)和細(xì)胞周期(cell cycle)是目前最為關(guān)注的孕激素類物質(zhì)毒性靶點(diǎn)，占總文獻(xiàn)報(bào)道數(shù)的73.3%(11/15)(圖3C)。而免疫反應(yīng)(immune response)、代謝過程(metabolism)和離子傳遞(ion transport)則是環(huán)境糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)的主要研究的重點(diǎn)，占總文獻(xiàn)報(bào)道的83.3%(15/18)(圖3F)。

3.2 晝夜節(jié)律

有研究發(fā)現(xiàn)孕激素類物質(zhì)能夠顯著改變斑馬魚晝夜節(jié)律。Zucchi等[64]于2013年通過毒理基因組學(xué)技術(shù)最早鑒定出了一系列內(nèi)分泌系統(tǒng)之外潛在的P4毒性作用靶點(diǎn)，包括晝夜節(jié)律、細(xì)胞周期、DNA損傷修復(fù)以及細(xì)胞分化過程。其中，晝夜節(jié)律相關(guān)基因變化最大。一些典型晝夜節(jié)律分子生物標(biāo)記物基因，如per1b和nr1d1，在較高濃度P4暴露下基因表達(dá)水平的改變甚至達(dá)到十幾倍，而且這種變化也能發(fā)生在環(huán)境濃度水平之下(3.5 ng·L-1P4)。之后，在2014年對DRS以及DRS和P4聯(lián)合暴露研究中，Zucchi等[47]進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)DRS同樣可以顯著改變斑馬魚成魚的晝夜節(jié)律相關(guān)基因，且對基因表達(dá)水平的影響要較P4更為強(qiáng)烈，進(jìn)一步表明這可能是環(huán)境孕激素類物質(zhì)的潛在毒性作用靶點(diǎn)。在DRS和P4聯(lián)合暴露實(shí)驗(yàn)中，晝夜節(jié)律相關(guān)基因變化水平普遍高于單物質(zhì)暴露，顯示存在顯著的毒性加和效應(yīng)(additive effect)。

對晝夜節(jié)律分子信號的干擾作用也適用于其他多種不同類型的孕激素類物質(zhì)。Zhao等[35]于2015年分析了MPA和DDG對斑馬魚成魚和胚胎發(fā)育過程晝夜節(jié)律的影響，發(fā)現(xiàn)這兩類物質(zhì)均能夠顯著改變晝夜節(jié)律相關(guān)分子標(biāo)記物基因表達(dá)。在成魚中，顯著性改變主要發(fā)生在雌雄魚腦和肝臟，而在性腺中(精巢和卵巢)中則沒有發(fā)現(xiàn)這一現(xiàn)象。在斑馬魚胚胎發(fā)育過程中，基因顯著性改變出現(xiàn)在96 h和144 h，而沒有出現(xiàn)在更早的48 h，這可能是由于胚胎發(fā)育早期感應(yīng)光線等外界環(huán)境信號節(jié)律系統(tǒng)尚未發(fā)育完全。Zhao等[36]隨后通過斑馬魚基因組數(shù)據(jù)庫檢索等方式構(gòu)建了完整的斑馬魚晝夜節(jié)律調(diào)控分子網(wǎng)絡(luò)，其中包含13組共41個(gè)相關(guān)基因。在斑馬魚成魚短期暴露P4和DRS的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，兩類物質(zhì)均能夠顯著影響斑馬魚的晝夜節(jié)律調(diào)控分子網(wǎng)絡(luò)，如per1b、cry5、rorcb和nr1d1等核心調(diào)控基因，以及ciart、dec2、dbpa和nfil3等近年來新發(fā)現(xiàn)的晝夜節(jié)律重要調(diào)控因子，并且絕大部分基因表達(dá)呈現(xiàn)出明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系。和對照組相比，暴露組中這些基因的表達(dá)水平的變化甚至高達(dá)數(shù)十倍。這些研究表明晝夜節(jié)律分子信號很可能是環(huán)境孕激素類物質(zhì)的普遍作用靶點(diǎn)。雖然目前并沒有從蛋白水平，生理學(xué)以及行為學(xué)等相關(guān)作用終點(diǎn)的詳細(xì)研究報(bào)道，但是Zhao等[36]發(fā)現(xiàn)這些晝夜節(jié)律調(diào)控基因的表達(dá)模式和腦垂體性腺軸(HPG-axis)激素合成相關(guān)基因的表達(dá)呈現(xiàn)出顯著的相關(guān)性，并有可能進(jìn)而影響魚類的繁殖能力。考慮到晝夜節(jié)律能夠調(diào)控眾多細(xì)胞和生理學(xué)過程，如細(xì)胞周期、能量代謝、糖平衡、胰島素分泌、激素合成以及繁殖過程，對晝夜節(jié)律相關(guān)研究有助于深入揭示孕激素類物質(zhì)的生態(tài)毒理效應(yīng)及其風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)過程。

3.3 免疫反應(yīng)

類固醇激素的免疫調(diào)節(jié)作用是近年來興起的一個(gè)新的研究方向。一般認(rèn)為，類固醇激素能夠通過核受體和膜受體途徑調(diào)控分子信號，影響免疫反應(yīng)相關(guān)基因表達(dá)，從而起到對免疫系統(tǒng)的調(diào)控作用[65-66]。水環(huán)境中較高濃度的類固醇激素類物質(zhì)可能會改變野生動物的體內(nèi)免疫相關(guān)細(xì)胞因子水平，從而干擾生物體正常免疫功能。2009年，Pietsch等[67]報(bào)道了P4、MPA和LNG等多種孕激素類物質(zhì)對鯉魚白細(xì)胞的免疫抑制作用。在in vitro暴露實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)MPA和P4能夠顯著抑制腦和腎臟細(xì)胞中NO的產(chǎn)生，而相同濃度下的LNG作用并不明顯；基因表達(dá)分析揭示較高濃度P4和MPA顯著抑制免疫反應(yīng)相關(guān)分子標(biāo)記物基因iNOS的表達(dá)水平。這一現(xiàn)象在MPA和LNG的in vivo鯉魚暴露實(shí)驗(yàn)中也得到進(jìn)一步證實(shí)：在21 d的暴露后，MPA和LNG均能顯著抑制NO的產(chǎn)生。并且LNG能夠顯著影響精氨酸酶活性，從而對NO產(chǎn)生以及免疫功能起到潛在干擾作用[68]。

相比于環(huán)境孕激素類物質(zhì)，糖皮質(zhì)激素對水生生物免疫系統(tǒng)干擾效應(yīng)研究更為深入。糖皮質(zhì)激素有著廣泛的臨床應(yīng)用，如在嚴(yán)重急性感染，器質(zhì)性炎癥，腎上腺皮質(zhì)機(jī)能減退以及自身免疫性疾病中用于抑制免疫應(yīng)答、抗炎、抗毒、抗休克等。鑒于糖皮質(zhì)激素的上述藥用，科學(xué)家因此推測環(huán)境中高濃度的糖皮質(zhì)激素同樣會影響水生生物的免疫應(yīng)答過程。Pietsch等[68]研究發(fā)現(xiàn)，DEX和CRL對鯉魚白細(xì)胞均有顯著免疫抑制作用，其能夠抑制腦和腎臟白細(xì)胞中NO產(chǎn)生并能夠顯著影響精氨酸酶活性。Huang等[69]在研究斑馬魚心臟損傷再生過程中的免疫應(yīng)答時(shí)發(fā)現(xiàn)，糖皮質(zhì)激素倍氯米松能夠顯著抑制斑馬魚心臟再生初期免疫應(yīng)答，干擾炎癥反應(yīng)，從而阻礙白細(xì)胞招募，抑制血管形成和細(xì)胞增殖，抑制心臟再生過程。CRL也能夠顯著抑制黃顙魚頭腎吞噬細(xì)胞的呼吸暴發(fā)功能以及血清補(bǔ)體旁路溶血活性(ACH50)，且呈現(xiàn)出顯著的劑量效應(yīng)關(guān)系[70]。在黃顙魚幼魚中，CRL能使其外周血白細(xì)胞數(shù)量顯著減少、淋巴細(xì)胞比例顯著降低，減少腸道黏膜皺褶和促進(jìn)糖異生作用從而使黃顙魚幼魚生長受到抑制[71]。與其內(nèi)分泌干擾效應(yīng)類似，目前對糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)免疫反應(yīng)研究主要關(guān)注于CRL和DEX等少數(shù)物質(zhì)的高濃度暴露研究，在環(huán)境濃度水平是否產(chǎn)生生態(tài)毒理效應(yīng)值得關(guān)注。

環(huán)境孕激素和糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)的生態(tài)毒理效應(yīng)是環(huán)境雌激素和雄激素之后近年來又一研究熱點(diǎn)。除少數(shù)天然物質(zhì)外，為數(shù)眾多且不同類型的人工合成孕激素和糖皮質(zhì)激素類物質(zhì)目前廣泛存在于各種環(huán)境水體之中。考慮到目前毒理學(xué)研究主要集中于少數(shù)物質(zhì)的內(nèi)分泌干擾效應(yīng)，未來有必要在進(jìn)一步闡釋這些物質(zhì)的環(huán)境污染的基礎(chǔ)上，展開系統(tǒng)的生態(tài)毒理學(xué)研究，并進(jìn)行全面的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)。另外，目前生態(tài)毒理學(xué)研究主要關(guān)注于這兩類物質(zhì)對魚類的毒理學(xué)效應(yīng)，是否對其他類型的水生生物，如低等無脊椎動物也存在潛在的毒性風(fēng)險(xiǎn)，同樣是需要密切關(guān)注的問題。

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◆

Ecotoxicology of Environmental Progestogens and Glucocorticoids: A Short Review

Zhao Yanbin, Hu Jianying*

College of Urban and Environmental Sciences, Peking University, Beijing 100871, China

Received 27 November 2015 accepted 22 December 2015

Environmental behavior and ecotoxicological effects of progestogens and glucocorticoids are of increasing concern in recent years. They are used in a range of medical conditions, and reach aquatic ecosystem due to the incomplete removal by wastewater treatment plant (WWTP) and agricultural run-off, then cause the potential hazard to the ecological system and human health. A few ng·L-1of progestogens and glucocorticoids were widely detected in surface water while in the influents and effluents of WWTP the concentrations were up to several hundred ng·L-1. They exert toxic effects primarily via binding to nuclear hormone receptors, for instance, the progesterone receptor (PR), glucocorticoid receptor (GR) and mineralocorticoid receptor (MR). Endocrine disrupts of aquatic vertebrates are of mainly concern. They alter the transcriptional levels of genes involved in hypothalamic-pituitary-gonadal axis and blood hormone concentrations, impact gonadal histology and disrupt fish reproduction, even at environmental relevant levels. Besides, novel targets are uncovered recently by use of “Omics” technology, such as the alterations on circadian rhythm signals and immune responses. These provide us novel insights of potential ecotoxicological effects of progestogens and glucocorticoids.

progestogens; glucocorticoids; environmental behavior; ecotoxicology; endocrine disruption; circadian rhythm; immune response

10.7524/AJE.1673-5897.20151127008

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No. 41330637)

趙硯彬 (1984-)，男，博士，研究方向?yàn)榄h(huán)境毒理學(xué)，Email: zhaoyb@pku.edu.cn

*通訊作者(Corresponding author)， E-mail: hujy@urban.pku.edu.cn

2015-11-27 錄用日期：2015-12-22

1673-5897(2016)2-006-12

X171.5

A

簡介：胡建英(1965—)，女，博士，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事環(huán)境中微量有害化學(xué)物質(zhì)的環(huán)境行為研究及化學(xué)物質(zhì)的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)。

趙硯彬, 胡建英. 環(huán)境孕激素和糖皮質(zhì)激素的生態(tài)毒理效應(yīng): 進(jìn)展與展望[J]. 生態(tài)毒理學(xué)報(bào)，2016, 11(2): 6-17

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