Beclin 1、p53蛋白在宮頸組織中的表達(dá)意義

張欣寧，吳海燕，姚書忠

(1.清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院婦科，廣東 清遠(yuǎn) 511500；2.中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦科，廣東 廣州 510080)

?

·論著與研究·

Beclin 1、p53蛋白在宮頸組織中的表達(dá)意義

張欣寧1，吳海燕1，姚書忠2

(1.清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院婦科，廣東 清遠(yuǎn) 511500；2.中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦科，廣東 廣州 510080)

目的：檢測自噬基因Beclin 1以及凋亡抑制基因p53在正常宮頸、宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸鱗癌中的表達(dá)，探討兩者之間及其與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系。方法：采用免疫組化法檢測正常子宮頸標(biāo)本20例，各級CIN病變各30例，子宮頸鱗癌90例。結(jié)果：(1)從正常宮頸，CINⅠ級、Ⅱ級、Ⅲ級到宮頸癌組織，Beclin 1蛋白的陽性表達(dá)率分別呈遞減趨勢，與疾病的進(jìn)展呈負(fù)相關(guān)；p53蛋白的陽性表達(dá)率呈遞增趨勢，與疾病的進(jìn)展呈正相關(guān)。(2)在宮頸癌組織各組別的比較中，Beclin 1、p53表達(dá)程度均與年齡、FIGO分期、腫瘤大小無關(guān)(P>0.05)，與腫瘤的分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。(3)在宮頸癌組織中，Beclin 1與p53的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)。結(jié)論：Beclin 1和p53的表達(dá)水平與宮頸癌發(fā)展密切相關(guān)，二者聯(lián)合檢測可以為宮頸癌的早期診斷、評估惡性程度和預(yù)后提供參考；宮頸癌中細(xì)胞自噬受到抑制，這一現(xiàn)象有望為宮頸癌的診治提供新途徑。

宮頸正常組織；CINⅠ；CINⅡ；CINⅢ；Beclin 1；p53

子宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤，雖然近年來宮頸癌的治療取得巨大進(jìn)展，但晚期患者5年存活率仍僅為50%左右[1]。目前，除了已明確高危型HPV感染是宮頸癌發(fā)生的主要危險(xiǎn)因素之外[2]，對宮頸癌的發(fā)生過程仍不完全清楚。所以，我們需要進(jìn)一步探究宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展過程，研發(fā)宮頸癌特異性的腫瘤標(biāo)志物，為防治宮頸癌提供新的途徑。

Beclin 1是近年新克隆的哺乳動(dòng)物的自噬調(diào)控基因，作為候選的腫瘤抑制基因而成為近年來的研究熱點(diǎn)[1]。Beclin 1基因的缺失性突變可導(dǎo)致自發(fā)性腫瘤的發(fā)生率提高，研究其在宮頸癌中的表達(dá)，將有助于探索通過調(diào)控自噬的表達(dá)來干預(yù)宮頸癌的發(fā)生。p53基因是第一個(gè)被證實(shí)的凋亡抑制基因，在細(xì)胞凋亡過程中起著至關(guān)重要的作用[3]。目前關(guān)于Beclin 1和p53在宮頸癌中的研究已經(jīng)分別有報(bào)道，但兩個(gè)指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行檢測并研究其相關(guān)性的報(bào)道未見。因此，本研究采用免疫組織化學(xué)方法同時(shí)檢測正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變組織以及子宮頸鱗癌(squamous cervical cancer， SCC)中的Beclin 1和p53蛋白的表達(dá)情況，探討兩者之間及其與宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系，以期進(jìn)一步揭示宮頸癌變的發(fā)展過程，為宮頸癌的診治提供新的途徑。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院病理科于2010年1月至2014年7月的宮頸石蠟包埋組織200例，包括因子宮肌瘤行子宮切除的正常子宮頸標(biāo)本(NCT)20 例，宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級各30例，子宮頸鱗癌90例(高分化41例，中低分化49例)，其中Ⅰ級40例，Ⅱa級50例，37例有盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，

患者年齡 30～70歲，所有患者取標(biāo)本前均未接受放、化療及免疫治療。所有的組織標(biāo)本均由2名高年資病理醫(yī)師診斷。

1.2 免疫組化結(jié)果判定 Beclin 1陽性染色主要表達(dá)在細(xì)胞膜或質(zhì)內(nèi)，出現(xiàn)棕黃色顆粒為表達(dá)陽性。p53蛋白以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顯色為表達(dá)陽性。每張病理切片通過光學(xué)顯微鏡放大400倍，隨機(jī)選取5個(gè)視野進(jìn)行陽性細(xì)胞結(jié)果判定。分別對陽性細(xì)胞數(shù)所占比例以及染色強(qiáng)度進(jìn)行評分， 分別按照著色強(qiáng)度計(jì)分(0分：不著色；1分：淡黃色；2分：棕黃色；3分：棕褐色)和陽性細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)百分比(0分：<5%；1分：5%～25%；2分：26%～50%；3分：51%～75%：4分：>75%)的標(biāo)準(zhǔn)得分，兩部分的得分之和為最后的得分：0～1分為陰性，2～3分為陽性，4分以上為強(qiáng)陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 全部數(shù)據(jù)資料用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。Beclin 1與p53在不同分組中表達(dá)的差異計(jì)算使用χ2檢驗(yàn)，表達(dá)水平的相關(guān)性采用Spearman相關(guān)性分析。

2 結(jié) 果

2.1 Beclin 1和p53在宮頸不同組織中的表達(dá)情況 結(jié)果詳見表1。

表1 Beclin 1和p53在宮頸不同組織中的表達(dá)

注：1)與SCC比較P<0.01；2) 與SCC組比較P<0.05。5組間同時(shí)比較P<0.01

在正常宮頸組織、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宮頸鱗癌中，Beclin 1的陽性表達(dá)分別為85.0%、80.0%、70.0%、63.3%、45.5%，陽性表達(dá)率逐漸下降，與宮頸病變程度呈負(fù)相關(guān)(Rs=-0.392，P<0.01)。宮頸正常組織、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ與宮頸鱗癌相比有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)，宮頸正常組織與CIN各級別組織之間兩兩比較無顯著性差異(P>0.05)。p53在正常宮頸組織、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宮頸鱗癌中的陽性表達(dá)率分別為5.0%、40.0%、66.7%、73.3%、86.7%，陽性表達(dá)率逐漸下降，與宮頸病變程度呈正相關(guān)(Rs=0.405，P<0.01)。宮頸正常組織、CINⅠ、CINⅡ與宮頸癌相比有顯著性差異(P<0.01)，宮頸正常組織與CIN各級別組織兩兩比較均有顯著性差異(P<0.01)。

2.2 Beclin 1、p53的表達(dá)與宮頸鱗癌臨床病理因素的關(guān)系 結(jié)果詳見表2。

統(tǒng)計(jì)分析顯示：Beclin 1蛋白的表達(dá)與年齡、宮頸癌臨床分期(FIGO)、肌層浸潤深度、腫瘤大小均無顯著性相關(guān)(P>0.05)，與腫瘤分化程度、是否合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.01)。Beclin 1蛋白在高分化的宮頸癌組織中的表達(dá)高于中低分化者(P<0.01)，Beclin 1在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌組織中的表達(dá)高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.01)，而p53蛋白的表達(dá)與此相反(P<0.01)。

2.3 Beclin 1與p53在早期宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)的相關(guān)性 運(yùn)用Spearman相關(guān)性分析，對上述Beclin 1與p53在90例早期宮頸鱗癌的免疫組化評分進(jìn)行相關(guān)性分析顯示：SCC組織中Beclin 1蛋白的表達(dá)與p53蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.429，P<0.01)。

表2 p53、Beclin 1的表達(dá)與宮頸鱗癌臨床病理因素的關(guān)系

注：1)與對照組比較P<0.05

3 討 論

3.1 Beclin 1蛋白在宮頸不同病變組織中的表達(dá)及意義 Beclin 1蛋白具有調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、存活和生長的作用。以往的研究提示，Beclin 1蛋白與肺癌、胃癌和肝癌等惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)[4]。在本研究中可以發(fā)現(xiàn)，在宮頸正常組織、各級CIN組織及宮頸癌組織中，Beclin 1表達(dá)的陽性率逐漸下降，在宮頸浸潤癌中的表達(dá)以陰性和弱陽性為主，提示宮頸癌中存在Beclin 1蛋白的表達(dá)缺失和下調(diào)(陰性和弱陽性表達(dá))。另外，在宮頸各級CIN組中，雖然Beclin 1的表達(dá)出現(xiàn)下調(diào)趨勢(平均陽性率71.1%)，但與正常宮頸組(85.0%)比較無顯著性差異(P>0.05)。而各級CIN組與宮頸癌組相比較，均有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。據(jù)此，我們可以推測，Beclin 1表達(dá)下調(diào)多發(fā)生在CIN向浸潤癌發(fā)展的過程中，在宮頸癌的發(fā)生中起著一定的作用。

在以往的臨床研究中發(fā)現(xiàn)，臨床分級不同、病理學(xué)分級高低以及是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素均可預(yù)示宮頸癌惡性侵襲程度以及預(yù)后。分級越晚，分化越差，其侵襲與轉(zhuǎn)移能力越強(qiáng)，預(yù)后越差。本研究發(fā)現(xiàn)Beclin 1蛋白的表達(dá)陽性率與宮頸癌的臨床分級、病理類型以及宮頸肌層浸潤深度、腫瘤大小等無相關(guān)性(P>0.05)，而與是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及組織分化程度相關(guān)。在宮頸高中分化組Beclin 1的表達(dá)較低分化組高(P<0.01)，表明腫瘤細(xì)胞分化越差，惡性程度越高，自噬能力也逐漸減弱，提示Beclin 1表達(dá)下調(diào)可能與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。

3.2 p53在宮頸不同病變組織中的表達(dá)及意義 p53是迄今為止發(fā)現(xiàn)的與人類腫瘤相關(guān)性最高的腫瘤抑制蛋白，在多種惡性腫瘤中有異常表達(dá)。正常狀態(tài)下， p53可調(diào)節(jié)凋亡通路中多個(gè)關(guān)鍵因子調(diào)控凋亡，而缺失p53的腫瘤細(xì)胞DNA損傷后不再發(fā)生凋亡，導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生[5-7]。本試驗(yàn)的研究結(jié)果可看出，宮頸正常組織、宮頸各級別CIN組織及宮頸癌組織中，p53表達(dá)的總陽性率分別為5.0%、40.0%、66.7%、73.3%、86.7%。隨著宮頸病變程度的加重，p53表達(dá)陽性率上升。p53蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)比宮頸正常組織及CIN各級組織中的表達(dá)高，說明野生型p53蛋白的突變對宮頸癌細(xì)胞的凋亡作用減弱或消失，從而導(dǎo)致癌細(xì)胞無限制生長，腫瘤細(xì)胞的過度增殖，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生，繼而發(fā)生浸潤及轉(zhuǎn)移。

在許多惡性腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，突變型p53的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的侵襲及淋巴轉(zhuǎn)移高度相關(guān)[8]。在宮頸癌的研究中，對此類的報(bào)道不一致。在本研究中，p53蛋白表達(dá)的陽性率與年齡、分級無關(guān)，與腫瘤的分化程度及是否淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)，分化越差，p53表達(dá)陽性率越高，合并淋巴轉(zhuǎn)移比無淋巴轉(zhuǎn)移者表達(dá)陽性率高(P<0.01)。這跟宮頸癌預(yù)后不良的高危因素相符。

3.3 Beclin 1和p53在宮頸癌組織中的關(guān)系 腫瘤分化差，早期即有淋巴轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤預(yù)后不良的征兆。本研究結(jié)果顯示， 宮頸癌分化差及合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的p53蛋白表達(dá)率顯著高于分化好及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.01)。而Beclin 1蛋白的表達(dá)與之相反。該結(jié)果提示， 伴隨侵襲力的增加， 宮頸癌組織細(xì)胞中p53蛋白表達(dá)率進(jìn)一步升高，Beclin 1表達(dá)率進(jìn)一步降低。說明宮頸癌患者腫瘤組織 Beclin 1蛋白和p53蛋白，不僅和腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切，而且和腫瘤轉(zhuǎn)移也十分密切，兩者可能共同參與了宮頸鱗癌的發(fā)生、發(fā)展過程。對相關(guān)性分析結(jié)果顯示，宮頸癌組織中Beclin 1蛋白的表達(dá)與p53蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān) (r=-0.429，P<0.01)。Beclin 1和p53的相關(guān)性進(jìn)一步說明了宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素共同作用的過程，自噬減弱和抗凋亡增強(qiáng)在此過程中共同存在，宮頸癌的轉(zhuǎn)移與癌組織中p53的過表達(dá)及Beclin 1表達(dá)缺失是分不開的。二者聯(lián)合檢測可作為早期評估腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲力及判斷預(yù)后的指標(biāo)。

總之，在宮頸癌組織中Beclin 1和p53表達(dá)異常，二者聯(lián)合檢測可以為腫瘤的早期診斷、評估惡性程度和預(yù)后提供參考。目前，調(diào)控凋亡的基因治療已引入宮頸癌的治療中并取得一定療效，將來隨著研究的不斷深入，將自噬性細(xì)胞死亡引入宮頸癌治療，在加強(qiáng)凋亡誘導(dǎo)的同時(shí)誘導(dǎo)自噬或許會(huì)成為治療的新靶點(diǎn)。

[1]王贊宏.自噬基因Beclin 1與宮頸癌相關(guān)性的實(shí)驗(yàn)研究[D].成都：四川大學(xué)，2007：1-113.

[2]王穎.宮頸癌發(fā)病相關(guān)因素的研究分析[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2014，21(3)：345-347.

[3]LEE J J， KIM S， YEOM Y I， et al. Enhanced specificity of the p53 family proteins-based adenoviral gene therapy in uterine cervical cancer cells with E2F1-responsive promoters[J]. Cancer Biol Ther， 2006， 5(11)： 1502-1510.

[4]QIU D M， WANG G L， CHEN L， et al. The expression of Beclin 1， an autophagic gene， in hepatocellular carcinoma associated with clinical pathological and prognostic significance[J]. BMC Cancer， 2014， 14(1)： 1-13.

[5]LIVESEY K M， KANG R， VERNON P， et al. p53/HMGB1 complexes regulate autophagy and apoptosis[J]. Cancer Res， 2012， 72(8)： 1996-2005.

[6]DONG X X， WANG Y R， QIN S， et al. p53 mediates autophagy activation and mitochondria dysfunction in kainic acid-induced excitotoxicity in primary striatal neurons[J]. Neuroscience， 2012， 207(207)： 52-64.

[7]LEE C C，YAMAMOTO S， WANIBUCHI H， et al. Cyclin D1 overexpression in rat two-stage bladder carcinogenesis and its relationship with oncogenes， tumor suppressor genes， and cell proliferation[J]. Cancer Res， 1997， 57(21)： 4765-4776.

[8]劉福虹.缺氧誘導(dǎo)因子-1α、VEGF、P53在宮頸癌組織中的表達(dá)及其與微血管密度的關(guān)系[D].石家莊：河北醫(yī)科大學(xué)，2007.

Expression and Clinical Significance of Beclin 1 and p53 Proteins in Squamous Cervical Cancer

ZHANG Xinning1， WU Haiyan1， YAO Shuzhong2

(1.Department of Gynaecology，Qingyuan People's Hospital，Qingyuan， Guangdong 511500，China；2.Department of Gynaecology， First Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University， Guangzhou， Guangdong 510080，China)

Objective: To detect the protein expression of Beclin 1 and p53 gene in normal cervical tissue(NCT)，cervical intraepithelial neoplasia(CIN)and squamous cervical cancer(SCC) tissues， and explore the correlation between the two proteins and their correlations with clinical pathological parameters of cervical cancer. Methods: 20 cases of NCT， 30 cases of CIN at various degrees and 30 cases of SCC were detected by immunohistochemistry method. Results: (1)The positive expression rate of Beclin 1 protein showed a gradually downward trend from NCT， CINⅠ，CINⅡ，CINⅢ to SCC， which was negatively correlated with the progression of cervical cancer； on the contrary， the positive expression rate of p53 protein showed an upward trend， which was positively correlated with the progression of this cancer. (2)Beclin 1 and p53 expression levels had significant correlations with differentiation grade and lymph node metastasis(P<0.05) while no correlations were found with the age， FIGO stage， tumor size(P>0.05). (3) The chi-square test revealed an inverse correlation between Beclin 1 and p53 expression in SCC tissue (P<0.01). Conclusion: The expression levels of Beclin 1 and p53 are closely related to the progression of cervical cancer； combined detection can provide a reference for early diagnosis， the evaluation of malignant degree and prognosis； the cell autophagy activity in cervical cancer is down-regulated，which may contributes to the development of novel options for its diagnosis and therapy.

normal cervical tissue； CINⅠ； CINⅡ；CINⅢ；Beclin 1；p53

清遠(yuǎn)市科技局項(xiàng)目(2015B044)

姚書忠，yszlfy@163.com

R737.33

A

10.11851/j.issn.1673-1557.2016.06.004

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1688.R.20161111.1011.002.html

2016-04-07)