HS-GC法同時測定尼莫地平緩釋片中乙醇和丙酮的殘留量Δ

胡曉琴，韓 春（長治學院化學系，山西長治 046011）

·藥物分析與檢定·

HS-GC法同時測定尼莫地平緩釋片中乙醇和丙酮的殘留量Δ

胡曉琴＊，韓 春#（長治學院化學系，山西長治 046011）

目的：建立同時測定尼莫地平緩釋片中乙醇和丙酮殘留量的方法。方法：采用頂空氣相色譜法。色譜柱為以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（DB-624）為固定液的毛細管柱，程序升溫，進樣口溫度為230℃，檢測器為氫火焰離子化檢測器，檢測器溫度為250℃，載氣為氮氣，流速為2.0 ml/min，分流比為5∶1，頂空加熱溫度為90℃，平衡時間為20 min，頂空進樣量為1.0 ml。結果：乙醇、丙酮檢測質量濃度線性范圍分別為1.25～500.0 μg/ml（r＝0.999 9）、0.50～202.0 μg/ml（r＝0.999 2）；定量限分別為5.01、2.02 μg/ml，檢測限分別為1.67、0.67 μg/ml；精密度、穩定性、重復性試驗的RSD＜3.0%；加樣回收率分別為96.81%～102.00%（RSD＝1.89%，n＝9）、96.64%～102.31%（RSD＝1.82%，n＝9）。結論：該方法簡便、快速、準確，可用于同時測定尼莫地平緩釋片中乙醇和丙酮的殘留量。

頂空氣相色譜法；尼莫地平；乙醇；丙酮；有機溶劑；殘留量

尼莫地平（Nimodipine，NMP）是第二代雙氫吡啶類鈣離子阻滯藥，臨床上主要用于缺血性腦血管病、阿爾茨海默病、蛛網膜下腔出血等疾病的治療[1-3]，也是近年來治療高血壓的首選藥物之一[4]。尼莫地平緩釋片較其他普通劑型具有生物穩定性高、作用時間長、不良反應少等特點，近幾年在臨床上應用廣泛[5]。由于其制備過程中用到了有機溶劑乙醇和丙酮[6]，可能會出現有機溶劑超標，長期使用會對人體造成嚴重危害[7]。該藥收載于國家新藥轉正標準WS-（X-068）-2004Z，但該標準未對有機溶劑殘留量作要求。因此，筆者根據2015年版《中國藥典》（四部）通則0861殘留溶劑測定法中對殘留溶劑的質量控制要求（乙醇和丙酮的溶劑殘留限量應＜0.5%）[8]，首次建立了采用頂空氣相色譜法（HS-GC）同時測定尼莫地平緩釋片中乙醇、丙酮殘留量的方法，以期為更好地控制該制劑的質量提供參考。

1 材料

1.1 儀器

7890A型氣相色譜儀，包括氫火焰離子化檢測器（FID）、7694E頂空自動進樣裝置、7890A色譜工作站（美國Agilent公司）；MS204TS型萬分之一電子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；KQ-100DE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率：100 W，頻率：40 kHz）。

1.2 藥品與試劑

尼莫地平緩釋片（山西振東制藥股份有限公司，批號：20150801、20150802、20150803、20150903，規格：60 mg/片）；乙醇對照品（批號：20150911，純度≥99.8%）、丙酮對照品（批號：20140611，純度≥99.7%）均購自國藥集團化學試劑有限公司；N，N-二甲基甲酰胺（DMF）為色譜純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：以6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（DB-624）為固定液的毛細管柱（30 m×0.32 mm，1.4 μm）；程序升溫：初始溫度40℃，保持2 min，以10℃/min升溫至60℃，再以30℃/min升溫至230℃，保持2 min；進樣口溫度：230℃；檢測器：FID；檢測器溫度：250℃；載氣：氮氣；流速：2.0 ml/min；分流比：5∶1；頂空加熱溫度：90℃；平衡時間：20 min；頂空進樣量：1.0 ml。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液 精密稱取乙醇對照品50.1 mg、丙酮對照品50.6 mg，置于同一100 ml量瓶中，加DMF溶解并定容，搖勻，作為混合對照品貯備液。精密量取上述混合對照品貯備液5.0 ml，置于50 ml量瓶中，加DMF定容，搖勻，經0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液1.0 ml，置于頂空瓶中，密封，作為混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取樣品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約含尼莫地平300 mg），置于10 ml量瓶中，加DMF溶解并定容，超聲處理10 min，經0.22 μm微孔濾膜濾過，取續濾液1.0 ml，置于頂空瓶中，密封，作為供試品溶液。

2.2.3 空白對照溶液 精密量取DMF 1.0 ml，置于頂空瓶中，密封，作為空白對照溶液。

2.3 系統適用性試驗

精密量取“2.2”項下混合對照品溶液、供試品溶液和空白對照溶液各適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可知，在該色譜條件下，乙醇和丙酮均能達到基線分離，分離度均＞2.0；理論板數以乙醇峰計為12 567，乙醇、丙酮的保留時間分別為3.926、4.375 min。結果表明，其他成分對測定無干擾。

圖1 氣相色譜圖A.混合對照品；B.供試品；C.空白對照；1.乙醇；2.丙酮Fig 1 GC chromatogramsA.mixed reference substance；B.test sample；C.blank control；1.ethanol；2.acetone

2.4 線性關系考察

精密稱取乙醇對照品25.0 mg、丙酮對照品10.1 mg，置于同一10 ml量瓶中，加DMF溶解并定容，搖勻，制成乙醇和丙酮質量濃度分別為2.50、1.01 mg/ml的線性溶液。精密量取上述線性溶液0.005、0.01、0.1、0.2、0.6、1.0、1.5、2.0 ml，分別置于10 ml量瓶中，加DMF定容，搖勻，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以待測成分質量濃度（x，μg/ml）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，得乙醇回歸方程為y＝1 312.4x－23.98（r＝0.999 9），丙酮回歸方程為y＝2 883.7x－4.503（r＝0.999 2）。結果表明，乙醇、丙酮檢測質量濃度線性范圍分別為1.25～500.0、0.50～202.0 μg/ml。

2.5 定量限與檢測限考察

取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，等倍逐步稀釋，按“2.1”項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。當信噪比為10∶1時，得乙醇、丙酮的定量限分別為5.01、2.02 μg/ml；當信噪比為3∶1時，得乙醇、丙酮的檢測限分別為1.67、0.67 μg/ml。

2.6 精密度試驗

精密量取“2.2.1”項下混合對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果，乙醇、丙酮峰面積的RSD分別為1.78%、1.83%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩定性試驗

取“2.2.2”項下供試品溶液（批號：20150801）適量，分別于室溫下放置0、1、2、4、6、8 h時按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，乙醇、丙酮峰面積的RSD分別為2.48%、1.88%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下8 h內穩定性良好。

2.8 重復性試驗

取同一批樣品（批號：20150801）適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，乙醇、丙酮峰面積的RSD分別為1.91%、2.99%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.9 加樣回收率試驗

取樣品（批號：20150903）適量，研細，精密稱取1.45 g（約含尼莫地平300 mg），共9份，分別置于10 ml量瓶中，再分別加入低、中、高質量濃度的乙醇、丙酮對照品，每組3份，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結果見表1。

2.10 樣品中殘留溶劑的測定

取4批樣品適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算乙醇、丙酮的殘留量，結果見表2。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

為保證待測樣品中的乙醇、丙酮完全釋放，必須選擇適合的溶劑來完全溶解待測樣品。筆者分別參考了水、二甲基亞砜（DMSO）和DMF[8]，結果尼莫地平不溶于水，不能保證乙醇、丙酮的有效溶出；但其在DMSO和DMF中均能溶解，經試驗驗證，當DMF作為溶劑時，乙醇、丙酮的分離度良好、峰形對稱、靈敏度高。故本試驗選擇DMF為溶劑。

3.2 色譜柱的選擇

為了使待測殘留溶劑獲得較好的分離度，筆者分別考察了非極性色譜柱Rtx?-1（50 m×0.53 mm，10 μm）、弱極性色譜柱HP-5（30 m×0.32 mm，0.50 μm）、中等極性色譜柱以DB-624為固定液的毛細管柱（30 m×0.32 mm，1.4 μm）和極性色譜柱Rtx?-wax（20 m×0.18 mm，0.4 μm）對樣品的處理。結果，采用Rtx?-1、HP-5時，乙醇、丙酮保留時間較長；采用Rtx?-wax時，分離度較差；以DB-624為固定液的毛細管柱時，保留時間短、分離度好、峰形對稱。故選擇以DB-624為固定液的毛細管柱為本試驗的色譜柱。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab 1 Results of recovery tests（n＝9）

表2 樣品中殘留溶劑測定結果（n＝3，%）Tab 2 Determination results of residual solvents in samples（n＝3，%）

3.3 樣品處理的優化

目前，殘留溶劑的檢查，只強調原料藥中有機溶劑的殘留情況，而對制劑過程中使用的有機溶劑沒有引起足夠的重視[9]，尤其是在脂質體[10-11]、緩（控）釋[12-13]、微丸包衣[14-15]等過程中使用的有機溶劑。本試驗對樣品的處理采用將藥片研細，并進行超聲處理，保證了藥片充分溶于溶劑中，使得最終測量結果能夠真實反映藥物制劑中的有機溶劑殘留量。

綜上所述，本方法簡便、快速、準確，可用于同時測定尼莫地平緩釋片中乙醇和丙酮的殘留量。

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Residual Determination of Ethanol andAcetone in Nimodipine Sustained-release Tablet by HS-GC

HU Xiaoqin，HAN Chun（Dept.of Chemistry，Changzhi College，Shanxi Changzhi 046011，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the residual determination of ethanol and acetone in Nimodipine sustained-release tablet.METHODS：Headspace GC was on the column of capillary column with fixative solution of 6%cyanopropyl phenyl-94%dimethyl polysiloxane（DB-624）by temperature programming，injector temperature was 230℃，detector was a flame ionization detector，detector temperature was 250℃，carrier gas was nitrogen gas，flow rate was 2.0 ml/min，split ratio was 5∶1，equilibrium temperature was 90℃，equilibrium time was 20 min，and volume of sample was 1.0 ml.RESULTS：The linear range was 1.25-500.0 μg/ml for ethanol（r＝0.999 9）and 0.50-202.0 μg/ml for acetone（r＝0.999 2）；limits of quantitative were 5.01，2.02 μg/ml，limits of detection were 1.67，0.67 μg/ml，respectively；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 3.0%；recoveries were 96.81%-102.00%（RSD＝1.89%，n＝9），96.64%-102.31%（RSD＝1.82%，n＝9），respectively. CONCLUSIONS：The method is simple，rapid，accurate，and can be used for simultaneous residual determination of ethanol and acetone in Nimodipine sustained-release tablet.

HS-GC；Nimodipine；Ethanol；Acetone；Organic solvent；Residue

R917

A

1001-0408（2016）33-4686-03

2016-01-08

2016-08-31）

（編輯：劉 柳）

國家自然科學基金資助項目（No.21402012）；國家自然科學項目子項目（No.GJZXM201605）

＊助教，碩士。研究方向：藥物分析。電話：0355-2178113。E-mail：244174693@qq.com

#通信作者：副教授，博士。研究方向：藥物合成與分析。電話：0355-2178113。E-mail：coldspringfibre@126.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.33.26