生物制劑治療病毒性心肌炎的研究現(xiàn)狀△

劉　爽劉贇娜（1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥劑科　呼和浩特　010030；.內(nèi)蒙古婦幼保健院　呼和浩特　01000）

生物制劑治療病毒性心肌炎的研究現(xiàn)狀△

劉爽1劉贇娜2（1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥劑科呼和浩特010030；2.內(nèi)蒙古婦幼保健院呼和浩特010020）

病毒性心肌炎是由于病毒侵犯心肌及由此引發(fā)的一系列心肌自身免疫反應(yīng)的結(jié)果，越來(lái)越多的生物技術(shù)應(yīng)用于VMC的治療。

病毒性心肌炎 生物制劑 治療研究

病毒性心肌炎（virus myocarditis，VMC）是由于病毒侵犯心肌引發(fā)的一系列心肌自身免疫反應(yīng)的結(jié)果。引起病毒性心肌炎的病毒以柯薩奇病毒B3型（coxsackievirus B3，CVB3）最為常見(jiàn)［1］。目前關(guān)于VMC的機(jī)制研究包括病毒的感染及損傷［2，3］，宿主的遺傳背景，氧化作用及免疫反應(yīng)［4，5］。對(duì)于VMC的治療藥物主要可分為中藥制劑、化學(xué)藥物和生物制劑，黃芪、苦參、三七提取物已經(jīng)研制成注射液廣泛應(yīng)用于臨床［6］。隨著對(duì)病毒性心肌炎的機(jī)制研究和生物技術(shù)的發(fā)展，越來(lái)越多的生物制劑被應(yīng)用于VMC的治療，其中包括：

免疫球蛋白（IVIG）：通過(guò)對(duì)6例急性病毒性心肌炎患者靜脈給予免疫球蛋白的臨床研究表明，隨訪結(jié)果4例完全恢復(fù)，兩例明顯改善，表明免疫球蛋白靜脈給藥對(duì)急性病毒性心肌炎有效［7］。莊建新等采用5周齡雄性BALB/c小鼠隨機(jī)分為8組，感染組腹腔接種CVB3制成心肌炎動(dòng)物模型，在接種病毒后3、7d分別腹腔注射IVIG5d和10d，流式細(xì)胞儀定量檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率和壞死率，與心肌病理組織學(xué)積分和病毒滴度進(jìn)行相關(guān)分析，并與中藥黃芪療效對(duì)比。結(jié)果免疫球蛋白治療組小鼠心肌內(nèi)病毒滴度、心肌病理積分和心肌細(xì)胞凋亡率與壞死率明顯低于病毒對(duì)照組，以早期（感染后3d）長(zhǎng)程（10d）治療組效果最好。由此可知靜注免疫球蛋白通過(guò)抑制柯薩奇B3病毒，降低心肌細(xì)胞凋亡率和壞死率對(duì)病毒性心肌炎發(fā)揮療效［8］。姜雪等選用57例重癥病毒性心肌炎患兒分為IVIG組和常規(guī)組，均給予抗病毒及支持療法。比較兩組患兒治療兩周后的臨床療效及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。治療后兩組患兒的免疫學(xué)指標(biāo)、心肌酶譜指標(biāo)較治療前均顯著改善，IVIG組較常規(guī)組改善顯著。治療后兩組患兒的LAD（左房?jī)?nèi)徑）、LVDD（左心室舒張期內(nèi)徑）、LVSD（左心室收縮期半徑）、LVEF（左心室功能）較治療前均顯著改善。經(jīng)過(guò)2周治療，IVIG組治療有效率顯著高于常規(guī)組。從而可知大劑量一次性靜脈滴注免疫球蛋白結(jié)合常規(guī)治療能夠顯著改善重癥病毒性心肌炎患兒的免疫、心肌酶譜水平［9］。劉徐魏等通過(guò)回顧性分析病毒性心肌炎患者60例，隨機(jī)分為對(duì)照組與研究組各30例，其中對(duì)照組采用傳統(tǒng)治療，研究組在傳統(tǒng)治療的基礎(chǔ)上采取加用靜脈滴注免疫球蛋白的方法治療，對(duì)比兩組治療效果。結(jié)果研究組療效顯著優(yōu)于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，由此可知靜脈滴注免疫球蛋白治療病毒性心肌炎有較好的臨床效果，值得推廣［10］。將64例急性VMC患兒隨機(jī)分為兩組；治療組在常規(guī)治療的基礎(chǔ)上加用IVIG，連用5d。觀察治療前后患兒肌酸激酶同工酶（CK-MB）、心肌肌鈣蛋白（cTnI）、心電圖變化及臨床療效。結(jié)果治療組CK-MB、cTnI恢復(fù)正常的時(shí)間明顯短于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；心電圖的改善及臨床療效優(yōu)于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此可知IVIG能較快改善急性VMC患兒的自覺(jué)癥狀、體征和恢復(fù)心肌酶，改善心電圖，提示IVIG對(duì)心肌細(xì)胞有保護(hù)作用，可改善急性VMC的預(yù)后［11］。

胸腺肽：李翼以60例急性病毒性心肌炎兒童患者為研究對(duì)象，采用隨機(jī)分配的原則將患兒分成試驗(yàn)組和對(duì)照組，對(duì)照組在治療方法上采用輔酶Q10和維生素C等常規(guī)治療，試驗(yàn)組在對(duì)照組的治療方法的基礎(chǔ)上增加胸腺肽注射液的治療，經(jīng)過(guò)兩周對(duì)患兒的血清心肌酶等相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，試驗(yàn)組總有效率為96.7%，對(duì)照組的總有效率為76.7%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；此次試驗(yàn)證明，胸肽腺注射液對(duì)治療小兒急性病毒性心肌炎具有顯著效果，能夠使患兒的血清CK、LDH（乳酸脫氫酶）以及CK-MB等心肌酶指標(biāo)得以下降，具有較高的醫(yī)療價(jià)值，值得推廣［12］。應(yīng)用胸腺肽注射液治療VMC患兒，可以使病毒感染導(dǎo)致的細(xì)胞免疫功能紊亂較快恢復(fù)正常，并能有效改善臨床癥狀［13］。劉天生等將54例病毒性心肌炎患兒隨機(jī)分組，對(duì)照組予以維生素C、輔酶Q10等常規(guī)治療，觀察組在對(duì)照組基礎(chǔ)上加用胸腺肽注射液治療，2周后評(píng)價(jià)臨床療效并檢測(cè)患兒血清心肌酶相關(guān)指標(biāo)，治療2周后，觀察組總有效率為96.30%，對(duì)照組總有效率為74.07%。兩組總有效率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療后，觀察組以上指標(biāo)水平明顯低于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。胸腺肽注射液治療小兒病毒性心肌炎療效確切，可顯著降低患兒血清CK、CK-MB、LDH等心肌酶指標(biāo)，值得臨床推廣［14］。將80例病毒性心肌炎患兒隨機(jī)分為常規(guī)療法組（常規(guī)組）及常規(guī)療法＋胸腺肽組（胸腺肽組），治療前、后分別測(cè)定炎性細(xì)胞因子IL（細(xì)胞介素）-18和TNF-α（腫瘤壞死因子），觀察兩組癥狀改善情況。胸腺肽治療組有效率為95%，常規(guī)治療組有效率為80%，治療組療效優(yōu)于對(duì)照組。VMC患兒治療前急性期TNF-α和IL-18水平均明顯高于恢復(fù)期與對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；胸腺肽治療組治療后恢復(fù)期TNF-α較急性期下降，但仍高于對(duì)照組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，IL-18恢復(fù)較慢；常規(guī)治療組治療后恢復(fù)期TNF-α和IL-18均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。加用胸腺肽注射液治療VMC患兒，能改善臨床癥狀降低炎性細(xì)胞因子水平［15］。

細(xì)胞因子：陳重等通過(guò)構(gòu)建小鼠IL-12基因的pBBADs-IL-12表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化雙歧桿菌，體外通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)及Western免疫印跡驗(yàn)證重組雙歧桿菌工程菌在L-阿拉伯糖誘導(dǎo)下mIL-12的表達(dá)。選取BLAB/c小鼠30只，腹腔內(nèi)注射CVB3感染劑量，14d后形成病毒性心肌炎，將感染的小鼠隨機(jī)分成IL-12組、綠熒光蛋白（GFP）組及生理鹽水組。IL-12組給予口服pBBADs-IL-12轉(zhuǎn)化雙歧桿菌（基因重組雙歧桿菌）；GFP組給予口服pBBADs-GFP轉(zhuǎn)化雙歧桿菌；生理鹽水組給予腹腔注射無(wú)菌PBS。檢測(cè)心肌病毒滴度，熒光定量PCR分析Th1細(xì)胞因子水平。治療14d后，HE染色顯示IL-12組小鼠心肌炎癥程度較GFP組和生理鹽水組明顯減輕；IL-12組小鼠心臟炎癥病變百分比，心肌的病毒滴度顯著低于GFP組及生理鹽水組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；IL-12組小鼠心臟γ-干擾素和腫瘤壞死因子-α水平顯著高于GFP組及生理鹽水組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。此次研究成功構(gòu)建了一種新型表達(dá)mIL-12的雙歧桿菌載體，口服IL-12轉(zhuǎn)化雙歧桿菌對(duì)CVB3病毒誘導(dǎo)的小鼠心肌炎具有較好療效［16］。楊帆等對(duì)BALB/c小鼠腹腔注射CVB3建立VMC小鼠模型，1周后磁珠分離脾CD4＋T淋巴細(xì)胞后進(jìn)行體外培養(yǎng)，分別加入植物血凝素（PHA）與重組小鼠IL-23（rIL-23）或PHA單獨(dú)刺激進(jìn)行體外培養(yǎng)5d。流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定培養(yǎng)后Th17細(xì)胞占CD4細(xì)胞的百分比、RT-PCR測(cè)定培養(yǎng)細(xì)胞IL-17 mRNA的表達(dá)、ELISA法測(cè)定培養(yǎng)物上清液中IL-17的水平。與單純PHA刺激比較，rIL-23刺激后Th17細(xì)胞明顯增加，且培養(yǎng)細(xì)胞IL-17 mRNA及上清液中IL-17濃度增加，兩組比較有顯著差異。外源性rIL-23可以增加并維持Th17細(xì)胞的增殖［17］。顧堅(jiān)等采用60只Balb/c雄性小鼠隨機(jī)分為3組：正常對(duì)照組、柯薩奇病毒（CVB3）感染組（感染組）和病毒感染加IGF-1干預(yù)組（治療組）。在實(shí)驗(yàn)d10處死動(dòng)物，留取心肌標(biāo)本。免疫組織化學(xué)法檢測(cè)心肌組織Fas、Fasl的變化，結(jié)果：IGF-1能顯著降低VMC小鼠心肌凋亡蛋白Fas、Fasl的表達(dá)。由此可知IGF-1對(duì)VMC小鼠的心肌細(xì)胞有保護(hù)作用［18］。伍瓊等將BALB/C小鼠原代心肌細(xì)胞分為7組，每組12孔，分別為細(xì)胞對(duì)照組、病毒對(duì)照組、藥物干預(yù)組（A組、B組、C組、D組、E組）。用不同濃度的AAP10培養(yǎng)液干預(yù)100TCID50（半數(shù)組織細(xì)胞培養(yǎng)感染劑量）CVB3感染的心肌細(xì)胞，對(duì)比每組的細(xì)胞活性。結(jié)果藥物干預(yù)組細(xì)胞活性高于病毒對(duì)照組。其細(xì)胞活性與藥物濃度及作用時(shí)間均呈正相關(guān)。AAP10具有明顯的抗病毒活性，呈劑量時(shí)間相關(guān)性，對(duì)CVB3感染的心肌細(xì)胞有保護(hù)作用［19］。

綜上所述，生物制劑治療病毒性心肌炎是今后藥學(xué)工作者研究發(fā)展的方向。

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△內(nèi)蒙古自治區(qū)自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目：黃芪皂甙對(duì)CVB3病毒所致Vero細(xì)胞凋亡的保護(hù)和保護(hù)機(jī)制研究（編號(hào)：2013MS1201）

R542.2+1

A

1672-8351（2016）02-0128-02