乳腺癌磁共振診斷表現與特異受體表達和微血管密度特征的相關性研究

曾茹雪，黃文，鄒慶，釧冬媚，劉婷，惠慶桃，鐘輝

(德陽市人民醫院 放射科，四川 德陽 618000)

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·論 著·

乳腺癌磁共振診斷表現與特異受體表達和微血管密度特征的相關性研究

曾茹雪，黃文，鄒慶，釧冬媚，劉婷，惠慶桃，鐘輝

(德陽市人民醫院 放射科，四川 德陽 618000)

目的：探討乳腺癌磁共振成像(MRI)診斷表現與特異受體表達和微血管密度(microvessel density，MVD)特征的相關性。方法:收集80例本院乳腺外科于2011年2月至2015年5月收治的經病理證實的原發性乳腺癌患者(均為單側乳腺癌病灶)的臨床資料。所有患者行MRI檢查，術后對組織標本行免疫組化檢測。觀察乳腺癌的MRI表現、特異受體表達及MVD特征。結果：80例腫瘤中40例邊緣呈毛刺狀(50.0%)，30例輪廓不規則(37.5%)，10例呈分葉狀(12.5%)；10例邊界輪廓清晰(12.5%)，6例輪廓部分模糊(7.1%)，64例邊界完全模糊、與周圍組織粘連、不清楚(80.0%)；51例(63.75%)內部呈現壞死病灶，表現為長T1長T2信號，增強掃描無顯著強化現象；乳腺癌邊緣是否毛刺狀與ER、Ki-67受體表達陽性率呈正相關，腫瘤內部是否壞死及其均勻性與C-erbB-2、P53及Her-2受體表達相關，乳腺癌患者MRI下毛刺狀和非毛刺狀以及癌不同部位之間的MVD均存在統計學差異(P<0.01)，動態增強參數早期強化率、Tmax和曲線類型與MVD具有強烈的相關性。結論：乳腺癌MRI表現可在一定程度上反映乳腺癌組織的特異受體表達情況和血管生成情況，對臨床治療方案的選擇、療效監測和預后具有指導意義。

乳腺癌；磁共振成像；特異受體；微血管密度

國內乳腺癌發病率以每年3%的速度在增長，目前已成為女性腫瘤患者死亡的第二大原因[1]。乳腺癌的發病和發展是多種遺傳學綜合作用的結果，涉及到基因異常和分子水平變化[2]。現代生物學的快速發展，為乳腺癌的醫學影像學檢測提供廣闊的前景[3]。國內學者對乳腺癌的研究主要集中在MRI的強化表現與微血管密度(MVD)的相關性[4]，而其與癌基因、抑癌基因及其受體相關性的報道尚少。本研究結合磁共振成像(MRI)技術和免疫組化技術對乳腺癌的MRI表現與特異受體表達及MVD特征的相關性進行探討，以期為乳腺癌的診斷和預后提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集80例我院乳腺外科于2011年2月至2015年5月收治的經病理證實的原發性乳腺癌患者(均為單側乳腺癌病灶)臨床資料進行分析。全部為女性，年齡28～79歲，平均(47.1±10.3)歲。所有患者術前1周均行MRI檢查，術后行病理檢查和免疫組化檢查，MRI檢查時間排在月經經期后的第2周或3周。排除標準[5]：(1) MRI前和術前進行腫瘤治療患者；(2) 合并肝、腎、心腦血管疾病患者；(3) MRI檢查禁忌證患者；(4) 體內含磁性異物患者。依據世界衛生組織于2003年提出的乳腺癌診斷標準進行病理學診斷和組織學分級[6]：80例患者中70例為浸潤性導管癌，5例為浸潤性小葉癌，2例為黏液腺癌，1例為乳頭狀腺癌，1例為神經內分泌癌，1例為腺樣囊性癌；14例Ⅰ級(高分化)患者，55例Ⅱ級(中分化)患者，11例Ⅲ級(低分化)患者。

1.2 方法

(1) MRI檢查。本研究MRI儀器型號為菲利普Achieva 1.5T超導MR掃描儀和雙側乳腺專用表面線圈。患者保持俯臥位，乳腺呈自然下垂狀，位于乳腺表面線圈之內。平掃序列包括SE-T1WI(TR=498 ms，TE=10 ms，層厚=4 mm)、脂肪抑制T2WI(TR=2 826 ms，TE=70 ms，層厚=4 mm)、DWI序列(TR=5 618 ms，TE=71 ms，b值=0和800 s·mm-2，層厚=4 mm)，動態增強掃描使用THRIVE序列(TR=7 ms，TE=3 ms，層厚=2 mm)，注射造影劑前及后即刻掃描，掃描時間70 s·期-1，重復掃描6次。造影劑采用釓噴替酸葡甲胺(Gd-DTPA)，劑量為0.1 mmol·kg-1，高壓注射器注射速率為2 ml·s-1，隨后注入20 ml生理鹽水。記錄患者MRI增強掃描參數早期強化率、Emax、Tmax及曲線類型等。所有圖像采用工作站后處理，由兩名經驗豐富的醫生分析影像學資料。觀察乳腺癌的MRI形態學特征，包括邊緣形狀(毛刺狀、分葉狀、光滑或不規則)、邊界是否模糊及腫瘤內部結構是否均勻。

(2) 免疫組化技術[7]。術前標記乳腺，手術結束后采集新鮮的腫瘤標本。采用10%的甲醛固定、脫水、二甲苯透明及包埋后，實施免疫組化染色。免疫組化染色采用ABC法(卵白素—生物素—過氧化物酶復合物法)，一抗工作液(購自于北京中山生物科技有限公司)為孕激素受體(PR)、雌激素受體(ER)、P53單克隆抗體、C-erbB-2、Ⅷ因子相關抗原多克隆抗體和Her-2，陰性對照組采用磷酸鹽緩沖液代替一抗進行。

免疫組化判斷[8]：所有特異性受體免疫組化陽性顯色為棕黃色。其中，ER、PR、P53位于細胞核，少數在細胞質，C-erbB-2位于細胞質和細胞膜上，Her-2位于細胞膜上。每例切片使用10個以上的高倍鏡觀察，染色為棕黃色顆粒的腫瘤細胞量高于10%的染色視為特異性受體陽性表達。Ki-67陽性表達在細胞核上，計算每例切片中陽性細胞占總細胞的百分比。微血管密度陽性表達于血管內皮細胞膜和細胞質上，將任何與鄰近組織分界清楚、被Ⅷ2Rag染成棕黃或棕褐色的孤立內皮細胞或內皮細胞簇團(<40 μm)視為一個微血管單位。首先在低倍鏡下觀察切片，尋找微血管密度部位，高倍鏡下分別在癌中心、邊緣和旁邊選取3個熱點，統計微血管單位，取平均值作為MVD。

1.3 統計學處理

采用SPSS 19.0統計軟件進行數據分析，計數資料行χ2檢驗，計量資料行t檢驗，采用Spearman相關性分析，P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 乳腺癌磁共振表現

乳腺癌腫瘤邊緣輪廓采用T2脂肪抑制序列顯示，效果較好。80例腫瘤中40例邊緣呈毛刺狀(50.0%)，30例輪廓不規則(37.5%)，10例呈分葉狀(12.5%)；10例邊界輪廓清晰(12.5%)，6例輪廓部分模糊(7.1%)，64例邊界完全模糊、與周圍組織粘連、不清楚(80.0%)；76例(95.0%)內部結構不均勻，平掃T1W1表現為等或稍低信號，TSE T2WI表現為混合信號或高信號，增強掃描表現為不均勻強化或環狀強化，其中51例(63.75%)內部呈現壞死病灶，表現為長T1和長T2信號，增強掃面無顯著強化現象。因此，乳腺癌患者MRI下多表現為邊緣毛刺狀、邊界模糊，且內部壞死，見圖1。

圖1 乳腺癌磁共振表現

所有患者MRI所測病灶大小與病理學結果相接近，其中19個T1期，33個T2期，2個T3期，26個T4期間。在有無轉移方面，MRI診斷出45個淋巴結腫大轉移，術后病理學證實49個轉移，漏診率為8.16%。

2.2 MRI表現與特異受體表達相關性

特異受體表達檢測見圖2。乳腺癌邊緣是否毛刺狀與ER、PR受體、Ki-67受體表達陽性率呈正相關(P=0.00)，與C-erbB-2受體、P53受體及Her-2受體之間無相關性(P>0.05)；乳腺癌腫瘤輪廓邊緣是否清晰與ER、Ki-67、PR、C-erbB-2、P53及Her-2受體等均無相關性(P>0.05)；腫瘤內部是否壞死及其均勻性與C-erbB-2、P53及Her-2受體顯著相關(P<0.01)，但與其余受體之間無相關性(P>0.05)。

2.3 MRI表現與MVD特征相關性

乳腺癌患者MRI下毛刺狀和非毛刺狀以及癌不同部位之間的微血管密度差異均有統計學意義(P<0.01)，但腫瘤邊界是否清晰和內部結構是否均勻組間MVD差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

采用各乳腺癌患者的動態增強參數(早期強化率、Emax、Tmax及曲線類型)與患者MVD進行Spearman相關性分析，其中，早期強化率、Tmax和曲線類型與MVD具有強烈的相關性，Tmax與MVD呈顯著負相關(r=-0.328,P=0.031)，早期強化率和曲線類型與MVD呈顯著正相關(r值分別為0.363、0.383，P值分別為0.020、0.012)。

3 討 論

乳腺癌是最常見的惡性腫瘤，全球2002年有115萬乳腺癌病患，居于惡性腫瘤的第二位，死亡率居于第五位[9]。近年來，我國乳腺癌發病率逐年升高，已成為婦女腫瘤第一位腫瘤類型，嚴重危害婦女生命健康。因此，深入研究乳腺癌有利于其診斷、治療和預后，對改善患者生活質量具有重要意義。目前，乳腺癌的研究已經由宏觀進入了微觀[10]。在其發病的生物學機制研究中，大量與乳腺癌相關的特異性受體得以發現，如ER、PR、Her-2等，這些生物因子決定腫瘤的生物學行為，顯著影響乳腺癌的產生和發展，是選擇合適的乳腺癌治療方案和判斷預后的重要指標[11]。特異性受體表達狀態的監測方法為免疫組化，其依賴于乳腺癌組織的切割，且重復性較低[12]。尋求有效的反映乳腺癌患者特異性受體表達情況的影像學技術，對無創地了解患者乳腺癌發展狀態，并選擇合適的治療方案意義重大。

表1 MRI表現與特異受體表達相關性 例

ER染色陽性 PR染色陽性 Ki-67染色陽性

Her-2染色陽性 p53染色陽性 C-erbB-2染色陽性

圖2 乳腺癌特異受體免疫組化檢測

表2 乳腺癌MRI表現與MVD相關性

免疫組化結果腫瘤邊緣毛刺狀無毛刺狀腫瘤邊界清楚模糊腫瘤內部結構均勻不均勻癌部位中心邊緣癌旁MVD/(個·視野-1)54.6±4.532.1±4.735.6±5.137.1±5.236.1±4.234.8±4.754.6±4.561.3±4.611.6±6.3r值0.410.130.220.903P值0.000.060.060.00

影像學在乳腺癌的診斷和評價中具有重要地位[13]。現在最常用的手段為乳腺X線攝片，但難以顯示致密型乳腺。Abdelhafez等[14]認為，MRI在顯示乳腺癌病變方面具有高敏感性、高分辨率、無輻射等優點，其多參數成像，有利于準確判斷病灶的大小、位置、形態和范圍，在乳腺癌的檢查上具有其他技術所無法比擬的優勢。本研究采用MRI檢查乳腺癌，并嘗試采用其MRI表現描述患者癌組織的特異受體表達情況和微血管密度，旨在尋求有效的宏觀技術顯示腫瘤微觀形態的有效方法。Pais等[15]報道，毛刺狀邊緣是惡性腫瘤的典型特征，但其與癌癥惡性程度的相關性仍存爭議。組織病理學表明毛刺征是從癌組織邊緣向四周以放射狀呈現的短細線條影，多由乳腺小導管和旁邊的纖維結締組織增生演變而成，中間可能有癌細胞浸潤，也可能是單純組織增生或導管增生。毛刺狀腫瘤較邊緣規則腫瘤的ER陽性率高，毛刺征的出現標志著腫瘤具有更強的侵襲性行為，內分泌治療效果較好。但也有研究指出，瘤間質反應也會表現為毛刺征，故毛刺征與腫瘤惡性程度并不呈正相關。本研究發現，毛刺狀邊緣與ER、Ki-67受體表達陽性率呈正相關(P=0.00)，說明毛刺狀邊緣腫瘤的惡性程度低，侵襲性低，治療效果好，復發率低。乳腺癌腫瘤輪廓邊緣是否清晰與ER、Ki-67、PR、C-erbB-2、P53及Her-2受體等均無相關性，差異無統計學意義(P>0.05)。組織病理學指出，邊界清晰說明腫瘤生長呈外推式，模糊則呈浸潤式。但是，平掃乳腺時發現，病灶周圍組織的信號存在較大差別：病灶周圍是腺體組織時，邊界多模糊；病灶周圍是脂肪組織時候，邊界較為清晰。本研究中邊界模糊的病灶，顯微鏡下可見對周圍組織存在浸潤。因此，在分析MRI表現與特異受體表達相關性時，應考慮病灶位置的影響。腫瘤內部是否壞死及其均勻性與C-erbB-2、P53及Her-2受體顯著相關(P<0.01)，內部壞死腫瘤C-erbB-2、P53及Her-2受體陽性率顯著高于無壞死者。據報道，惡性程度高的癌組織生長更快，組織內部血液供給不足而容易出現內部壞死。此外，導管癌中腫瘤壞死的組織學級別更高，侵襲性亦高[16]。因此，采用MRI掃描有無壞死病灶，可評估C-erbB-2、P53及Her-2受體表達情況，有利于判斷腫瘤的生物學行為與預后狀況。

研究表明，乳腺癌是典型的血管依賴型病變。于韜等[17]認為，腫瘤實體生長超過2 mm3時，需要血管維持腫瘤生長。血管生成與腫瘤的生長、浸潤和轉移相關。有研究表明，MVD是影響乳腺癌預后的獨立因素，已經成為評價腫瘤血管生成的標準。本組資料表明，乳腺癌患者MRI下毛刺狀和非毛刺狀以及癌不同部位之間的微血管密度存在顯著性差異(P<0.01)，且與乳腺癌患者的動態增強參數早期強化率、Tmax和曲線類型具有強烈的相關性。乳腺癌邊緣的MVD高于內部和癌旁，從組織病理學方面分析，癌組織邊緣的腫瘤細胞增殖較為活躍，且含有大量間質，其微血管密度較高，通透性強；癌中心因繼發改變如壞死、出血等，降低了MVD；癌組織周圍多為正常組織，盡管多伴有增生、囊腫及導管擴張等，但其MVD仍低于中心和邊緣。

總之，對乳腺癌的MRI表現與特異受體和MVD特征相關性的研究結果表明，乳腺癌邊緣是否毛刺狀與ER、Ki-67受體表達陽性率呈正相關，腫瘤內部是否壞死及其均勻性與C-erbB-2、P53及Her-2受體顯著相關，乳腺癌患者MRI下毛刺狀和非毛刺狀以及癌不同部位之間的MVD存在顯著差異，動態增強參數早期強化率、Tmax和曲線類型與MVD具有強烈的相關性。乳腺癌MRI表現可在一定程度上反映乳腺癌組織的特異受體表達情況和血管生成情況，對臨床治療方案的選擇、療效監測和預后具有指導意義。

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MRI in the diagnosis of breast cancer and the correlation between expression of specific receptors and MVD

ZENG Ru-xue，HUANG Wen，ZOU Qing，CHUAN Dong-mei，LIU Ting，HUI Qing-tao，ZHONG Hui

(DepartmentofRadiology，People’sHospitalofDeyang，Deyang618000,China)

Objective:To evaluate the correlation of diagnostic performance of MRI in breast cancer with the expression of specific receptors and the characteristics of microvessel density (MVD).Methods:Records of 80 cases of patients with pathologically proven primary breast cancer，which were unilateral ones，were reviewed from February 2011 to May 2015 in our institution.All cases were evaluated by MRI preoperatively and tissue samples were collected for immunohistochemistry postoperatively.The signal of MRI，the expression of specific receptors and the characteristics of MVD were observed.Results:Of all the 80 tumors，there were 40 cases of burr-like edges (50.0%)，30 cases of irregular contours (37.5%)，10 cases of lobulated shape(12.5%); 10 cases of clear boundary contour (12.5%)，6 cases of partial fuzzy boundary(7.1%)，64 cases of completely fuzzy boundaries with the surrounding tissue adhesion (80.0%); 51 cases of presented internal necrotic lesions(63.75%)，with long T1 and T2 signal and no significant enhancement sweep surface intensification; For the correlations analysis，burr-like edge of breast cancer was found to be correlated with ER，Ki-67 receptor expression; tumor necrosis and internal uniformity were found to be correlated with C-erbB-2，P53 and Her-2 receptor expression.There was a significant difference of MVD between burr-like and smooth edge timors as well as between different parts of cancer MVD with MRI diagnosis(P<0.01); Dynamic enhancement parameters early intensive rate，Tmax and curve type showed strong correlation.Conclusion:Diagnostic performance of MRI in breast cancer may reflect the expression of specific receptors and the condition of MVD to some extent，and may provide a guide to clinical treatment options，treatment monitoring and prognosis.

breast cancer; magnetic resonance imaging; specific receptors; microvessel density

2016-02-06

2016-05-25

曾茹雪(1967-)，女，四川綿竹人，副主任醫師。E-mail:3147475430@qq.com

曾茹雪，黃文，鄒慶，等.乳腺癌磁共振診斷表現與特異受體表達和微血管密度特征的相關性研究[J].東南大學學報：醫學版，2016，35(5)：731-736.

R737.9

A

1671-6264(2016)05-0731-06

10.3969/j.issn.1671-6264.2016.05．018