α-硫辛酸對(duì)高尿酸血癥大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激水平的影響

馬 玲 王 莉 于慧敏 姚 華

(新疆醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)教研室，新疆 烏魯木齊 830011)

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α-硫辛酸對(duì)高尿酸血癥大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激水平的影響

馬 玲 王 莉1于慧敏2姚 華3

(新疆醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)教研室，新疆 烏魯木齊 830011)

目的 觀察α-硫辛酸對(duì)(LA)高尿酸(UA)血癥大鼠氧化應(yīng)激水平的影響。方法 參照文獻(xiàn)建立高尿酸血癥大鼠模型，造模3 w后，分別給予10、30、90 mg·kg-1·d-1劑量的α-LA灌胃2 d，分析血清UA、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)-C和低密度脂蛋白膽固醇(LDL)-C水平，檢測(cè)血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、過(guò)氧化物(CAT)和丙二醛(MDA)水平。結(jié)果 高UA血癥大鼠血清UA、LDL-C含量高于對(duì)照組，HDL-C和TG含量較低，抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT活力下降，MDA含量增加(P<0.05)；α-LA干預(yù)2 w后，各干預(yù)組的UA水平均降低(P<0.05)；中劑量組的TC和LDL-C降低，高劑量組的TC、LDL-C和HDL-C下降(P<0.05)；高、中、低劑量組大鼠血清MDA活力降低，高、中劑量組的SOD活力升高(P<0.05)；各組GSH-Px和CAT活力的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 α-LA可提高高UA血癥大鼠SOD活力，降低脂質(zhì)過(guò)氧化物，改善氧化應(yīng)激水平。

α-硫辛酸;高尿酸血癥;氧化應(yīng)激

高尿酸(UA)血癥是痛風(fēng)、腎功能不全、心血管疾病發(fā)展過(guò)程中的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。UA對(duì)體內(nèi)自由基有一定的清除作用，但隨著UA水平的升高，體內(nèi)的抗氧化作用并未增強(qiáng)。研究發(fā)現(xiàn)高UA血癥患者的抗氧化酶活力下降，脂質(zhì)過(guò)氧化物生成增多〔1〕,血清抗氧化維生素水平下降〔2〕。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明高UA血癥大鼠的血清抗氧化酶活力下降，提示高UA血癥大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激失衡〔3〕。α-硫辛酸(LA)作為一種非酶類天然抗氧化劑，不僅可直接清除活性氧，而且還可刺激內(nèi)源性抗氧化劑的再生，被廣泛應(yīng)用于糖尿病、器官缺血再灌注等多種疾病的治療,但尚未見其對(duì)高UA血癥氧化應(yīng)激水平影響的相關(guān)報(bào)道〔4，5〕。本研究α-LA對(duì)高UA血癥大鼠血脂代謝和氧化應(yīng)激狀態(tài)的影響及其作用機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 主要儀器與藥品 LX20全自動(dòng)生化分析儀(美國(guó)Beckman)，電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，5810R型臺(tái)式冷凍離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司),UV-2550型可見光分光光度計(jì)(日本島津儀器有限公司),酶標(biāo)儀(美國(guó)BIO-RAD公司)；酵母(97%)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司,氧嗪酸鉀購(gòu)自英國(guó)OXOID公司,α-LA購(gòu)自江蘇神龍藥業(yè)有限公司,超氧歧化物酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、過(guò)氧化氫酶(CAT)和丙二醛(MDA)試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康成年雄性SPF級(jí)SD大鼠60只，體重為(200.32±34.52)g，均由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供〔動(dòng)物許可證號(hào)：SYXK(新)2003-0004〕。飼養(yǎng)溫度22℃～25℃，濕度為45%～60%，光-暗周期12 h。適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w后，隨機(jī)分為對(duì)照組(12只)和實(shí)驗(yàn)組(48只)。對(duì)照組給予普通飼料喂飼，實(shí)驗(yàn)組給予酵母飼料和腹腔注射氧嗪酸鉀。將大鼠的普通飼料與酵母干粉均勻攪拌，壓粒成型，質(zhì)量分?jǐn)?shù)控制在10%，自由攝食。同時(shí)腹腔注射100 mg·kg-1·d-1氧嗪酸鉀乳懸液〔3〕。

1.3 方法 實(shí)驗(yàn)組大鼠酵母飼養(yǎng)和腹腔注射氧嗪酸鉀乳懸液3 w后，將實(shí)驗(yàn)組分為高UA血癥模型組、α-LA低劑量組(LLA)、α-LA中劑量組(MLA)、α-LA高劑量組(HLA)。在持續(xù)造模的基礎(chǔ)上，干預(yù)組分別給予α-LA 10、30、90 mg·kg-1·d-1灌胃，連續(xù)2 w。實(shí)驗(yàn)期間，動(dòng)物自由攝食和飲水。

1.4 標(biāo)本收集與檢測(cè) 用藥2 w后，禁食、禁水12 h后，烏拉坦腹腔麻醉，開胸，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血，常溫下靜置1 h，以3 000 r/min離心15 min，2 h內(nèi)分離血清，分析UA、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量。血清SOD、GSH-Px、CAT酶活力分別用黃嘌呤氧化酶法、二硫?qū)Χ趸郊姿?DTNB)直接顯色法和可見光分光光度法檢測(cè)，MDA含量采用TBA法檢測(cè)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件行方差分析和兩兩比較。

2 結(jié) 果

2.1 干預(yù)前后各組大鼠血清UA水平比較 干預(yù)前，模型組和α-LA干預(yù)組的血清UA水平高于對(duì)照組(P<0.05)，說(shuō)明造模成功。模型組與α-LA干預(yù)組的血清UA水平的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。干預(yù)后，模型組的血清UA水平仍然高于對(duì)照組，同時(shí)也高于α-LA干預(yù)組(P<0.05)，說(shuō)明低、中、高劑量的α-LA干預(yù)后，高UA血癥大鼠的血清UA水平下降(P<0.05)，見表1。

2.2 干預(yù)后各組大鼠血脂水平比較 模型組LDL-C高于對(duì)照組，TG和HDL-C低于對(duì)照組(P<0.05)。α-LA干預(yù)后，LLA組與模型組比較，各項(xiàng)血脂指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義(P>0.05)。MLA組TC和LDL-C水平均低于模型組，HLA組TC、LDL-C和HDL-C水平低于模型組(P<0.05)。中、高劑量α-LA干預(yù)降低了高UA血癥大鼠的TC、LDL-C和HDL-C水平(P<0.05)，見表2。

2.3 干預(yù)后各組大鼠血清抗氧化酶活力的比較 模型組的SOD、GSH-Px、CAT活力均低于對(duì)照組，MDA含量高于對(duì)照組(P<0.05)。α-LA干預(yù)后，LLA組MDA含量低于模型組(P<0.05)。HLA組的SOD活力高于模型組，MDA含量低于模型組(P<0.05)。HDL組的SOD活力高于模型組，MDA含量低于模型組(P<0.05)。α-LA干預(yù)降低了高UA血癥大鼠的MDA含量，中、高劑量升高了SOD活力，見表2。

組別干預(yù)前干預(yù)后對(duì)照組76.29±19.2765.03±23.27模型組127.41±17.991)123.16±29.321)LLA組124.74±25.191)59.49±29.482)MLA組123.53±24.201)47.80±18.332)HLA組151.50±26.871)31.73±21.341)2)F/P值17.00/0.00023.55/0.000

與對(duì)照組比較:1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05，下表同

組別TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)GSH-Px(U/L)SOD(U/ml)CAT(U/ml)MDA(nmol/ml)對(duì)照組1.33±0.090.94±0.240.60±0.040.26±0.032271.43±210.26519.90±60.525.69±2.543.65±0.55模型組1.27±0.120.31±0.081)0.47±0.061)0.29±0.051)1953.04±198.541)410.48±48.831)2.84±1.611)6.35±1.731)LLA組1.31±0.170.38±0.161)0.43±0.041)0.31±0.051)1787.19±221.961)433.19±56.711)2.32±0.981)4.05±1.512)MLA組1.14±0.121)2)0.32±0.091)0.38±0.051)0.25±0.032)1754.62±253.841)485.43±80.132)3.78±2.863.85±0.902)HLA組1.05±0.151)2)0.34±0,200.37±0.052)0.23±0.022)1747.19±302.441)494.70±34.502)4.12±3.162.85±0.642)F/P值11.82/0.00030.39/0.00033.75/0.0008.11/0.00011.82/0.00027.39/0.0007.75/0.0008.11/0.000

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)高UA血癥大鼠進(jìn)行α-LA干預(yù)后，各組大鼠血清UA水平均低于模型組,提示α-LA干預(yù)有效。HLA組的UA水平顯著低于對(duì)照組，可能是由于高劑量α-LA的給予使得機(jī)體對(duì)UA的代謝產(chǎn)生代償性的降低，若延長(zhǎng)給藥時(shí)間，是否會(huì)趨于穩(wěn)定，還有待進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)中高UA血癥大鼠LDL-C升高，HDL-C下降，說(shuō)明存在脂代謝紊亂,與相關(guān)研究結(jié)果一致。但同時(shí)發(fā)現(xiàn)高UA血癥大鼠的TG并未增高，反而下降，與已報(bào)道的人群調(diào)查結(jié)果不同〔6〕。文獻(xiàn)報(bào)道人群高UA血癥與高甘油三酯血癥具有相關(guān)性，有學(xué)者提出可能是由于體內(nèi)3-磷酸甘油酰脫氫酶的活性降低，使得糖酵解過(guò)程的中間產(chǎn)物向5-磷酸核糖及磷酸核糖焦磷酸轉(zhuǎn)移，可導(dǎo)致UA生成增多，造成高UA血癥，同時(shí)也使3-磷酸甘油積聚血中致血中TG增加〔7〕。但本次動(dòng)物造模原理主要通過(guò)提供酵母飼料，增加食物中嘌呤的含量，進(jìn)而導(dǎo)致UA生產(chǎn)增多，同時(shí)使用尿激酶抑制劑氧嗪酸鉀，抑制UA的進(jìn)一步分解，與3-磷酸甘油酰脫氫酶活性降低無(wú)關(guān)，所以血清甘油三酯的變化并不明顯。本研究結(jié)果提示α-LA可降低高UA血癥大鼠的TC和LDL-C，與文獻(xiàn)報(bào)道的α-LA在高血脂大鼠和糖尿病大鼠中的降脂作用效果一致〔8，9〕。

正常代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生氧自由基，包括超氧負(fù)離子、過(guò)氧化氫、羥自由基等，為維持機(jī)體氧化-抗氧化系統(tǒng)的平衡，人體主要依靠抗氧化防御系統(tǒng)的作用，該系統(tǒng)主要包括超SOD、GSH-Px、CAT等。在眾多判斷氧化應(yīng)激水平的指標(biāo)中，本實(shí)驗(yàn)選用SOD、GSH-Px、CAT和MDA四個(gè)常用指標(biāo)作為氧化應(yīng)激指標(biāo)，而外周血氧化應(yīng)激水平能夠反映全身的氧化應(yīng)激水平〔10〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示高UA血癥大鼠的抗氧化能力下降，過(guò)氧化脂質(zhì)產(chǎn)物增多，α-LA有減少活性氧簇(ROS)產(chǎn)生的作用。但α-LA干預(yù)后各組大鼠血清中CAT和GSH-Px活性無(wú)顯著變化，可能由于灌胃給藥方法的首過(guò)效應(yīng)降低了α-LA的生物利用率，另外不排除由于樣本量所造成的第二類錯(cuò)誤，有待進(jìn)一步研究。由于MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化的終產(chǎn)物，MDA的檢測(cè)可間接反映出機(jī)體組織細(xì)胞的損傷程度。本實(shí)驗(yàn)提示經(jīng)α-LA治療后，MDA含量都有不同程度的降低，表明因氧化應(yīng)激所造成的細(xì)胞損傷得到一定程度上的修復(fù)。

1 賈少丹,王顏剛,李慧鳳,等.不同尿酸濃度與氧化應(yīng)激和內(nèi)皮損傷指標(biāo)研究〔J〕.中華內(nèi)科學(xué)雜志,2008；47(8):638-41.

2 馬 玲,王 莉,周 勇,等.血清維生素A、C、E水平與尿酸水平的相關(guān)性〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志,2013；33(12):2742-4.

3 王 莉,馬 玲,姚 華,等.單純酵母喂飼和氧嗪酸聯(lián)合酵母暴露高尿酸血癥腎病大鼠模型的建立及其抗氧化活力變化的比較研究〔J〕.環(huán)境與健康雜志,2012；29(7)：612-4.

4 崔 玨,肖 瀛,王 斌,等.硫辛酸改善高脂小鼠氧化應(yīng)激和慢性炎癥的研究〔J〕.中國(guó)免疫學(xué)雜志,2010；26(7):583-6,590.

5 白星子,王國(guó)賢,李 飛,等.α-硫辛酸對(duì)2型糖尿病大鼠大腦皮質(zhì)的保護(hù)作用〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志,2013；33(3):620-2.

6 閆 婕,陶 慧,蒙健軍,等.廣西省南寧地區(qū)常規(guī)體檢人群高尿酸血癥患病率調(diào)查及與血脂相關(guān)性的研究〔J〕.中華內(nèi)分泌代謝雜志,2014；3(5):411-5.

7 Tseng CH.Independent association of uric acid levels with peripheral arterial disease in Taiwan patients with type 2 diabetes〔J〕.Diabet Med,2004；21(7):724-9.

8 楊瑞麗,施用暉,李 武,等.硫辛酸對(duì)高脂飼料小鼠氧化應(yīng)激與糖、脂代謝基因表達(dá)的影響〔J〕.衛(wèi)生研究,2008；37(5):560-2,5.

9 周 瑾,應(yīng)長(zhǎng)江,李 偉,等.α-硫辛酸對(duì)大鼠糖尿病視網(wǎng)膜病變的保護(hù)作用〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志,2013；33(22):5667-9.

10 曾憲成,馬 璟,常 艷,等.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)激后氧化應(yīng)激狀態(tài)監(jiān)測(cè)方法的進(jìn)展〔J〕.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué),2012；32(6):549-52.

〔2015-05-22修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢(mèng)園)

新疆維吾爾自治區(qū)科技廳自然科學(xué)基金(No.2015211C011)

1 北京市東城區(qū)社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)管理中心 2 烏魯木齊市疾病預(yù)防控制中心 3 新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院

姚 華(1959-)，男，教授，博士，博士生導(dǎo)師，主要從事環(huán)境-基因疾病研究。

馬 玲(1975-)，女，博士，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事營(yíng)養(yǎng)與慢性病研究。

R151.2

A

1005-9202(2016)23-5816-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.23.018