α-硫辛酸對高尿酸血癥大鼠體內氧化應激水平的影響

馬 玲 王 莉 于慧敏 姚 華

(新疆醫科大學公共衛生學院營養與食品衛生學教研室，新疆 烏魯木齊 830011)

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α-硫辛酸對高尿酸血癥大鼠體內氧化應激水平的影響

馬 玲 王 莉1于慧敏2姚 華3

(新疆醫科大學公共衛生學院營養與食品衛生學教研室，新疆 烏魯木齊 830011)

目的 觀察α-硫辛酸對(LA)高尿酸(UA)血癥大鼠氧化應激水平的影響。方法 參照文獻建立高尿酸血癥大鼠模型，造模3 w后，分別給予10、30、90 mg·kg-1·d-1劑量的α-LA灌胃2 d，分析血清UA、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)-C和低密度脂蛋白膽固醇(LDL)-C水平，檢測血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化物(CAT)和丙二醛(MDA)水平。結果 高UA血癥大鼠血清UA、LDL-C含量高于對照組，HDL-C和TG含量較低，抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT活力下降，MDA含量增加(P<0.05)；α-LA干預2 w后，各干預組的UA水平均降低(P<0.05)；中劑量組的TC和LDL-C降低，高劑量組的TC、LDL-C和HDL-C下降(P<0.05)；高、中、低劑量組大鼠血清MDA活力降低，高、中劑量組的SOD活力升高(P<0.05)；各組GSH-Px和CAT活力的差異無統計學意義(P>0.05)。結論 α-LA可提高高UA血癥大鼠SOD活力，降低脂質過氧化物，改善氧化應激水平。

α-硫辛酸;高尿酸血癥;氧化應激

高尿酸(UA)血癥是痛風、腎功能不全、心血管疾病發展過程中的獨立危險因素。UA對體內自由基有一定的清除作用，但隨著UA水平的升高，體內的抗氧化作用并未增強。研究發現高UA血癥患者的抗氧化酶活力下降，脂質過氧化物生成增多〔1〕,血清抗氧化維生素水平下降〔2〕。動物實驗表明高UA血癥大鼠的血清抗氧化酶活力下降，提示高UA血癥大鼠體內氧化應激失衡〔3〕。α-硫辛酸(LA)作為一種非酶類天然抗氧化劑，不僅可直接清除活性氧，而且還可刺激內源性抗氧化劑的再生，被廣泛應用于糖尿病、器官缺血再灌注等多種疾病的治療,但尚未見其對高UA血癥氧化應激水平影響的相關報道〔4，5〕。本研究α-LA對高UA血癥大鼠血脂代謝和氧化應激狀態的影響及其作用機制。

1 材料和方法

1.1 主要儀器與藥品 LX20全自動生化分析儀(美國Beckman)，電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統有限公司)，5810R型臺式冷凍離心機(德國Eppendorf公司),UV-2550型可見光分光光度計(日本島津儀器有限公司),酶標儀(美國BIO-RAD公司)；酵母(97%)購自美國Sigma公司,氧嗪酸鉀購自英國OXOID公司,α-LA購自江蘇神龍藥業有限公司,超氧歧化物酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)和丙二醛(MDA)試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.2 實驗動物 健康成年雄性SPF級SD大鼠60只，體重為(200.32±34.52)g，均由新疆醫科大學實驗動物中心提供〔動物許可證號：SYXK(新)2003-0004〕。飼養溫度22℃～25℃，濕度為45%～60%，光-暗周期12 h。適應性飼養1 w后，隨機分為對照組(12只)和實驗組(48只)。對照組給予普通飼料喂飼，實驗組給予酵母飼料和腹腔注射氧嗪酸鉀。將大鼠的普通飼料與酵母干粉均勻攪拌，壓粒成型，質量分數控制在10%，自由攝食。同時腹腔注射100 mg·kg-1·d-1氧嗪酸鉀乳懸液〔3〕。

1.3 方法 實驗組大鼠酵母飼養和腹腔注射氧嗪酸鉀乳懸液3 w后，將實驗組分為高UA血癥模型組、α-LA低劑量組(LLA)、α-LA中劑量組(MLA)、α-LA高劑量組(HLA)。在持續造模的基礎上，干預組分別給予α-LA 10、30、90 mg·kg-1·d-1灌胃，連續2 w。實驗期間，動物自由攝食和飲水。

1.4 標本收集與檢測 用藥2 w后，禁食、禁水12 h后，烏拉坦腹腔麻醉，開胸，經腹主動脈取血，常溫下靜置1 h，以3 000 r/min離心15 min，2 h內分離血清，分析UA、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量。血清SOD、GSH-Px、CAT酶活力分別用黃嘌呤氧化酶法、二硫對二硝基苯甲酸(DTNB)直接顯色法和可見光分光光度法檢測，MDA含量采用TBA法檢測。

1.5 統計學方法 應用SPSS17.0統計軟件行方差分析和兩兩比較。

2 結 果

2.1 干預前后各組大鼠血清UA水平比較 干預前，模型組和α-LA干預組的血清UA水平高于對照組(P<0.05)，說明造模成功。模型組與α-LA干預組的血清UA水平的差異無統計學意義(P>0.05)。干預后，模型組的血清UA水平仍然高于對照組，同時也高于α-LA干預組(P<0.05)，說明低、中、高劑量的α-LA干預后，高UA血癥大鼠的血清UA水平下降(P<0.05)，見表1。

2.2 干預后各組大鼠血脂水平比較 模型組LDL-C高于對照組，TG和HDL-C低于對照組(P<0.05)。α-LA干預后，LLA組與模型組比較，各項血脂指標差異無統計意義(P>0.05)。MLA組TC和LDL-C水平均低于模型組，HLA組TC、LDL-C和HDL-C水平低于模型組(P<0.05)。中、高劑量α-LA干預降低了高UA血癥大鼠的TC、LDL-C和HDL-C水平(P<0.05)，見表2。

2.3 干預后各組大鼠血清抗氧化酶活力的比較 模型組的SOD、GSH-Px、CAT活力均低于對照組，MDA含量高于對照組(P<0.05)。α-LA干預后，LLA組MDA含量低于模型組(P<0.05)。HLA組的SOD活力高于模型組，MDA含量低于模型組(P<0.05)。HDL組的SOD活力高于模型組，MDA含量低于模型組(P<0.05)。α-LA干預降低了高UA血癥大鼠的MDA含量，中、高劑量升高了SOD活力，見表2。

組別干預前干預后對照組76.29±19.2765.03±23.27模型組127.41±17.991)123.16±29.321)LLA組124.74±25.191)59.49±29.482)MLA組123.53±24.201)47.80±18.332)HLA組151.50±26.871)31.73±21.341)2)F/P值17.00/0.00023.55/0.000

與對照組比較:1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05，下表同

組別TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)GSH-Px(U/L)SOD(U/ml)CAT(U/ml)MDA(nmol/ml)對照組1.33±0.090.94±0.240.60±0.040.26±0.032271.43±210.26519.90±60.525.69±2.543.65±0.55模型組1.27±0.120.31±0.081)0.47±0.061)0.29±0.051)1953.04±198.541)410.48±48.831)2.84±1.611)6.35±1.731)LLA組1.31±0.170.38±0.161)0.43±0.041)0.31±0.051)1787.19±221.961)433.19±56.711)2.32±0.981)4.05±1.512)MLA組1.14±0.121)2)0.32±0.091)0.38±0.051)0.25±0.032)1754.62±253.841)485.43±80.132)3.78±2.863.85±0.902)HLA組1.05±0.151)2)0.34±0,200.37±0.052)0.23±0.022)1747.19±302.441)494.70±34.502)4.12±3.162.85±0.642)F/P值11.82/0.00030.39/0.00033.75/0.0008.11/0.00011.82/0.00027.39/0.0007.75/0.0008.11/0.000

3 討 論

本實驗發現高UA血癥大鼠進行α-LA干預后，各組大鼠血清UA水平均低于模型組,提示α-LA干預有效。HLA組的UA水平顯著低于對照組，可能是由于高劑量α-LA的給予使得機體對UA的代謝產生代償性的降低，若延長給藥時間，是否會趨于穩定，還有待進一步研究。本實驗中高UA血癥大鼠LDL-C升高，HDL-C下降，說明存在脂代謝紊亂,與相關研究結果一致。但同時發現高UA血癥大鼠的TG并未增高，反而下降，與已報道的人群調查結果不同〔6〕。文獻報道人群高UA血癥與高甘油三酯血癥具有相關性，有學者提出可能是由于體內3-磷酸甘油酰脫氫酶的活性降低，使得糖酵解過程的中間產物向5-磷酸核糖及磷酸核糖焦磷酸轉移，可導致UA生成增多，造成高UA血癥，同時也使3-磷酸甘油積聚血中致血中TG增加〔7〕。但本次動物造模原理主要通過提供酵母飼料，增加食物中嘌呤的含量，進而導致UA生產增多，同時使用尿激酶抑制劑氧嗪酸鉀，抑制UA的進一步分解，與3-磷酸甘油酰脫氫酶活性降低無關，所以血清甘油三酯的變化并不明顯。本研究結果提示α-LA可降低高UA血癥大鼠的TC和LDL-C，與文獻報道的α-LA在高血脂大鼠和糖尿病大鼠中的降脂作用效果一致〔8，9〕。

正常代謝過程中會產生氧自由基，包括超氧負離子、過氧化氫、羥自由基等，為維持機體氧化-抗氧化系統的平衡，人體主要依靠抗氧化防御系統的作用，該系統主要包括超SOD、GSH-Px、CAT等。在眾多判斷氧化應激水平的指標中，本實驗選用SOD、GSH-Px、CAT和MDA四個常用指標作為氧化應激指標，而外周血氧化應激水平能夠反映全身的氧化應激水平〔10〕。本實驗結果提示高UA血癥大鼠的抗氧化能力下降，過氧化脂質產物增多，α-LA有減少活性氧簇(ROS)產生的作用。但α-LA干預后各組大鼠血清中CAT和GSH-Px活性無顯著變化，可能由于灌胃給藥方法的首過效應降低了α-LA的生物利用率，另外不排除由于樣本量所造成的第二類錯誤，有待進一步研究。由于MDA是脂質過氧化的終產物，MDA的檢測可間接反映出機體組織細胞的損傷程度。本實驗提示經α-LA治療后，MDA含量都有不同程度的降低，表明因氧化應激所造成的細胞損傷得到一定程度上的修復。

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〔2015-05-22修回〕

(編輯 苑云杰/曹夢園)

新疆維吾爾自治區科技廳自然科學基金(No.2015211C011)

1 北京市東城區社區衛生服務管理中心 2 烏魯木齊市疾病預防控制中心 3 新疆醫科大學第一附屬醫院

姚 華(1959-)，男，教授，博士，博士生導師，主要從事環境-基因疾病研究。

馬 玲(1975-)，女，博士，教授，碩士生導師，主要從事營養與慢性病研究。

R151.2

A

1005-9202(2016)23-5816-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.23.018