γ-干擾素體外釋放試驗在結核性疾病中的診斷價值

胡金偉，張 麗，桑國耀，顧 挺

(新疆醫科大學第一附屬醫院醫學檢驗中心，新疆烏魯木齊830054)

·論著·

γ-干擾素體外釋放試驗在結核性疾病中的診斷價值

胡金偉，張 麗，桑國耀，顧 挺

(新疆醫科大學第一附屬醫院醫學檢驗中心，新疆烏魯木齊830054)

目的探討結核分枝桿菌相關γ-干擾素體外釋放試驗（Interferon Gamma Release Assays，IGRA）在結核性疾病中的診斷價值。方法采用TB-IGRA方法檢測經本院臨床證實的235例結核病患者，101例非結核性患者外周血γ-干擾素釋放水平，同時與涂片抗酸染色、結核分枝桿菌核酸檢測及結核抗體結果進行比較。結果經比較，TB-IGRA對結核性疾病診斷的靈敏度86.4%，均高于其他幾種結核病檢測方法，且具有較高的特異度，陽性預測值95.7%，陰性預測值為74.2%。結論體外γ-干擾素釋放試驗是一種輔助診斷結核病的快速、有效的方法，具有較好的臨床應用價值。

γ-干擾素；結核性疾病；診斷價值

結核性疾病是由結核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis，MTB)所致的以呼吸系統感染為主的慢性傳染病，嚴重危害著人類健康，據世界衛生組織（WHO）統計，全世界約三分之一的人群感染了結核分枝桿菌，每年約有800萬新發病例，約140萬人死于結核病。我國是結核病高負擔國家，發病率位居全球第二位[1]。對結核病的有效控制則有賴于對結核分枝桿菌的快速檢測[2]，結核感染T細胞檢測γ-干擾素體外釋放試驗（TB-IGRA）是近年來發展起來的一種快速檢測結核分枝桿菌感染的實驗室檢測技術[3]。人體感染結核分枝桿菌后能產生特異性T淋巴細胞，當外周血中的T淋巴細胞再次遇到結核抗原后被激活、增值并分泌γ-干擾素（IFN-γ）。IGRAs即采用結核分枝桿菌特異性重組抗原（卡介苗、其他分枝桿菌沒有的缺失區域RD1編碼的ESAT-6和CPF-10蛋白）在體外刺激全血標本中特異性T細胞產生免疫應答[4]，并根據特異性免疫應答的水平進行定量分析來判斷患者結核分枝桿菌感染的情況。本研究采用IGRAs對結核病患者標本進行了檢測，并與其它結核實驗室檢測方法進行比較，對此技術在臨床中的實際應用價值進行評估，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2015年6月至2016年6月我院門診及住院患者樣本336例，男215例，女121例，年齡16～55歲。根據患者臨床癥狀、痰涂片、痰培養等指標將樣本分為肺結核組178例（又分為菌陰肺結核組103例和菌陽肺結核組75例、肺外結核組57例（包括骨結核8例、脊柱結核11例、結核性胸膜炎17例、結核性腹膜炎21例）及其他非結核組101例（包括慢性阻塞性肺疾病38例、高血壓23例、糖尿病12例、腎病綜合征17例、白血病11例等）。結核病診斷依據≤中華人民共和國行業標準肺結核診斷標準（WS288-2008）≥[5]。

1.2 主要儀器與試劑主要儀器為艾德康E180酶標儀，37℃恒溫箱，低速離心機，TB-IGRA診斷試劑盒由北京萬泰藥業股份有限公司提供。涂片抗酸染色液由珠海貝索生物技術有限公司生產，結核分枝桿菌核酸檢測試劑由北京博奧有限公司生產，結核抗體試劑由珠海市銀科醫學工程有限公司生產。

1.3 方法

1.3.1 采集肝素抗凝靜脈血＞4ml，在2h之內將全血標本輕柔顛倒混勻3~5次后分裝到本底對照管（N）、測試管（T）、陽性對照管（P）三種培養管中，每管1ml新鮮全血，輕柔顛倒混勻后放入37℃恒溫箱培養22±2h，培養后的全血以3000~5000r/min離心10min，吸取血漿，以ELISA方法（雙抗體夾心法）檢測IFN-γ水平，所有操作均嚴格按照TB-IGRA診斷試劑盒說明書進行。結果判定：如果本底對照管≤400pg/ml，測試管-本底對照管≥14pg/ml且≥N/4即為陽性，如果本底對照管≤400pg/ml，陽性對照管-測試管≥20pg/ml，測試管-本底對照管＜14pg/ml或者測試管-本底對照管≥14pg/ml但＜N/4即為陰性。

1.3.2 涂片抗酸染色、結核分枝桿菌核酸檢測及結核抗體檢測嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.4 統計學分析采用SPSS 13.0軟件進行統計處理，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TB-IGRA靈敏度與特異度分析在確診178例肺結核患者中156例TB-IGRA檢測陽性，57例肺外結核中47例TB-IGRA陽性，101例非結核病的病例中92例TB-IGRA檢測陰性，TB-IGRA診斷結核的靈敏度為86.4%，特異度為91.1%，陽性預測值為95.7%，陰性預測值為74.2%，見表1。

2.2 菌陰肺結核與菌陽肺結核比較103例菌陰肺結核與75例菌陽肺結核TB-IGRA檢測結果陽性率分別為87.1%和89.3%，兩者差異無統計學意義（P＜0.05），見表2。

2.3 TB-IGRA診斷價值分析臨床確診的178例肺結核病例中，涂片抗酸染色陽性為75例，靈敏度為42.1%，結核分枝桿菌核酸檢測陽性114例，靈敏度為62.91%，結核抗體陽性為103例，靈敏度為57.9%；57例肺外結核病例中，涂片抗酸染色陽性10例，靈敏度為17.5%，結核分枝桿菌核酸檢測22例，靈敏度為38.6%，結核抗體陽性21例，靈敏度為36.8%；與TB-IGRAs檢測肺結核與肺外結核靈敏度87.6%和82.4%相比差異有統計學意義(P＜0.01)，見表3。

表1 結核組與非結核組TB-IGRA檢測結果

表2 菌陰與菌陽肺結核TB-IGRA檢測結果比較

表3 TB-IGRA試驗與涂片抗酸染色、結核分枝桿菌核酸檢測及結核抗體在患者中的比較情況[陽性例數（%）]

3 討論

結核病是一種感染結核分枝桿菌的傳染性疾病，目前臨床對結核病的實驗室檢測方法主要有涂片抗酸染色、結核分枝桿菌核酸檢測及分枝桿菌培養等，但是這些檢測方法存在敏感性低、操作復雜及檢測周期長等缺點[6]。結核菌感染的免疫反應主要是細胞介導的免疫反應，Dosanjh[7]等研究說明IFN-γ可以反映人體結核的細胞免疫情況。體外γ-干擾素釋放試驗就是近年來發展起來的一種結核分枝桿菌特異性免疫檢測方法，能夠在體外快速檢測結核效應T淋巴細胞產生的細胞因子IFN-γ，來判斷是否存在結核分枝桿菌感染。目前該方法已在歐美等發達國家得到廣泛臨床應用[8，9]。

本實驗對178例肺結核、57例肺外結核及101例非結核性疾病患者外周血進行檢測，結果顯示，TB-IGRA在結核性疾病診斷中具有較高的靈敏度（86.4%）和特異度（91.1%），且對肺結核與肺外結核的檢測差異無統計學意義，而涂片抗酸染色、結核分枝桿菌核酸檢測及結核抗體在結核診斷的靈敏度分別為35.3%、57.9%、52.7%，與TB-IGRA相比，TB-IGRA靈敏度明顯高于以上三種檢測方法，差異有統計學意義。這與國內外報道基本一致[10-12]。說明TB-IGRA明顯優于其他結核檢測方法，可作為結核病診斷的較敏感指標。我們還對菌陰肺結核與菌陽肺結核患者進行了比較，結果顯示TB-IGRA檢測的陽性率分別為87.1%和89.3%，差異無統計學意義，說明TB-IGRA可以作為菌陰肺結核診斷的方法之一。

國內許多報道應用酶聯免疫斑點試驗(Eispot)進行結核分枝桿菌特異性T細胞檢測作為結核診斷的方法[13-15]，而該方法直接進行全血培養，省去了Eispot方法中分離細胞及培養步驟，并且利用標準曲線進行定量檢測而非鏡檢，結果更容易判斷。

綜上所述，TB-IGRA作為靈敏度高、特異度高的結核分枝桿菌免疫學檢測方法，對于臨床診斷結核具有極大的推廣應用價值，但是該方法檢測結果陽性僅提示患者存在結核分枝桿菌感染，尚不能區分是活動性、潛伏性、還是陳舊性結核，需與患者其他臨床表現、影像學檢查等相結合來綜合分析。

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The diagnosis value of interferon-gamma in vitro release assay in patients with tuberculosis

HU Jinwei，ZHANG Li，SANG Guoyao，GU Ting.

Department of Clinical Laboratory，First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，China.

ObjectiveTo evaluate the diagnosis value of interferon gamma(IFN-γ)release assay(IGRA)associated with Mycobacterium tuberculosis in patients with tuberculosis(TB).MethodsThe level of IFN-γ release in peripheral blood were detected in 235 patients who were clinically diagnosed tuberculosis，101 patients with non-tuberculosis，and the results were compared with results of the sputum smear，DNA testing and tuberculosis antibody detection，respectively.ResultsThe diagnostic sensitivity and specificity of TB-IGRA were higher than other tests(P<0.05).The positive predictive value and negative predictive value were 95.7%，74.2%，respectively.ConclusionThe TB-IGRA with a higher clinical value might be a quick and effective tool for diagnosis of TB infection.

Interferon-gamma；Tuberculosis；Diagnosis value

R378.91+1，R52

A

1674-1129(2016)06-0704-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.06.002

2016-09-06；

2016-11-20)

新疆維吾爾自治區聯合基金（2016D01C293）。

胡金偉，女，1983年7月11日生，檢驗醫師，研究方向為感染免疫。

顧挺，男，1973年6月1日生，主管技師，主要從事臨床免疫檢驗。