四種不同來源精子對ICSI治療結(jié)局的影響分析

鐘安　宋革　陳瑞玲

【摘要】 目的 比較四種來源精子進(jìn)行卵胞漿內(nèi)單精子注射（ICSI）的臨床結(jié)局。方法 女方常規(guī)超排卵和取卵， 成熟卵子行ICSI注射， 比較采用睪丸精子組（A組）、附睪精子組（B組）、輸精管精子組（C組）和射出精子組（D組）的受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率和臨床妊娠率。結(jié)果 四組受精率、卵裂率及臨床妊娠率比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）， 而C組優(yōu)胚率39.40%低于A、B、D組的49.86%、53.34%、49.08%（P<0.05）。結(jié)論 射出精子、睪丸精子、附睪精子和輸精管精子可以通過ICSI技術(shù)治療各種因素的男性不育。

【關(guān)鍵詞】 卵胞漿內(nèi)單精子注射；睪丸精子；附睪精子；射出精子；輸精管精子

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.23.073

男性不育是男科疾病中的常見病， 對于各種因素造成的重度少弱畸形精子癥、無精子癥的治療一直較為困難。1992年P(guān)alermo等[1]發(fā)明了卵胞漿內(nèi)單精子注射技術(shù)（ICSI）， 為嚴(yán)重男性因素不育的治療帶來了新的突破， 但不同來源的精子行ICSI治療的結(jié)局是否有差異存在爭議， 本研究對此進(jìn)行初步的探討， 報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 收集本院2014年3月～2015年12月因男方因素行ICSI治療的不育癥患者， 共397個周期， 不育原因為重度少弱畸形精子癥、無精子癥。依據(jù)精子來源不睪丸精子組（A組）83個周期、附睪精子組（B組）107個周期、輸精管精子組（C組）18個周期和射出精子組（D組）189個周期。無精子癥患者進(jìn)入治療周期前均行附睪穿刺或睪丸活檢， 以明確附睪或睪丸內(nèi)有無精子， 其中輸精管精子組為雙側(cè)輸精管結(jié)扎術(shù)后患者。重度少弱畸形精子癥患者行ICSI治療的標(biāo)準(zhǔn)為：精子濃度<5.0×106/ml， 前向運動精子（PR）<10%或正常精子形態(tài)（N）<2%。

1. 2 方法

1. 2. 1 常規(guī)超排卵 采用促性腺激素激動劑（GnRHa）進(jìn)行降調(diào)節(jié)， 用卵泡生成激素（FSH）促超排卵， 當(dāng)卵泡發(fā)育成熟后， 肌內(nèi)注射人絨毛膜促性腺激素（HCG）誘發(fā)排卵， 36～38 h后在B超引導(dǎo)下行取卵。

1. 2. 2 經(jīng)皮附睪精子抽吸術(shù)（PESA）取精 患者取仰臥位， 常規(guī)消毒鋪巾后， 5 ml 2%利多卡因生理鹽水1：1稀釋后精索局部麻醉阻滯。用連接7號針頭的5 ml注射器抽取精子分離液約1 ml， 左手固定一側(cè)附睪， 右手持注射器經(jīng)皮穿刺附睪， 持續(xù)施加負(fù)壓抽吸， 直至有乳白色附睪液體抽出， 將抽出的附睪液放入培養(yǎng)皿中， 在倒置顯微鏡下尋找活動精子。

1. 2. 3 睪丸取精術(shù)（TESA）取精 麻醉方法同上。固定一側(cè)睪丸后用連接9號針頭的10 ml注射器經(jīng)皮穿刺睪丸抽吸， 將抽吸出的曲細(xì)精管置于培養(yǎng)皿中， 用注射器針頭撕碎曲細(xì)精管， 倒置顯微鏡下尋找活動精子。

1. 2. 4 輸精管取精 選擇輸精管較粗一側(cè)， 5 ml 2%利多卡因生理鹽水1：1稀釋后局部麻醉后， 用輸精管固定鉗固定輸精管于陰囊皮下， 用輸精管分離鉗撐開陰囊皮膚暴露輸精管， 并用輸精管固定鉗固定輸精管。用連接7號鈍針頭的5 ml注射器抽吸精子分離液約1 ml后， 插入近附睪端輸精管， 邊沖洗輸精管邊負(fù)壓抽， 將抽出的輸精管精液放入培養(yǎng)皿中， 在倒置顯微鏡下尋找活動精子。

1. 2. 5 射出精子獲取 禁欲4～7 d， 手淫法取精， 將全部精液射入取精杯中， 放入37℃ 、5% CO2培養(yǎng)箱中， 待精液液化后， 采用梯度離心法進(jìn)行處理。

1. 2. 6 受精、移植及臨床妊娠情況的判定 取卵后3～4 h行ICSI， 受精后16～18 h觀察受精情況。取卵后第3天選擇評分最高的1～3個胚胎進(jìn)行移植。移植后2周測血HCG確定有無妊娠， 5周后 B超觀察有無臨床妊娠和有無多胎妊娠。

1. 3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

A組受精率為87.33%， 卵裂率為98.31%， 優(yōu)胚率為49.86%， 妊娠率為60.24%。B組受精率為83.87%， 卵裂率為95.45%， 優(yōu)胚率為53.34%， 妊娠率為63.55%。C組受精率為80.52%， 卵裂率為95.97%， 優(yōu)胚率為39.40%， 妊娠率為55.56%。D組受精率為86.75%， 卵裂率為96.71%， 優(yōu)胚率為49.08%， 妊娠率為61.90%。四組受精率、卵裂率及臨床妊娠率比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）， C組優(yōu)胚率低于其余各組（P<0.05）。

3 討論

精子在睪丸中產(chǎn)生， 在附睪運行過程中不斷成熟， 獲得運動能力、識別卵子透明帶的有力及與卵子結(jié)合的能力。理論上睪丸精子最不成熟， 畸形率相對較高， 活動能力差， 但本研究用睪丸精子、附睪精子、輸精管精子與射出精子行ICSI進(jìn)行比較， 發(fā)現(xiàn)不同來源精子借助顯微注射技術(shù)直接進(jìn)入卵漿內(nèi)， 均能達(dá)到較好的受精能力。

Bukulmez[2]比較射出精子組、附睪精子組、睪丸精子組的ICSI結(jié)局， 結(jié)果各組間無明顯差別。李滿等[3]的研究表明， 使用射出精子、附睪精子、睪丸精子在受精率、卵裂率及臨床妊娠率方面無明顯差別。張丹等[4]報道射出精液組、經(jīng)皮附睪穿刺和經(jīng)皮睪丸穿刺取精組在受精率、優(yōu)胚率、卵裂率和臨床妊娠率比較差異無明顯差別。本研究與其結(jié)局一致， 但C組優(yōu)胚率低于其余各組（P<0.05）， 可能由于輸精管精子在輸精管環(huán)境停留時間過久， 大量精子發(fā)生老化或凋亡導(dǎo)致ICSI操作時間和卵子暴露時間延長， 也可能與輸精管結(jié)扎手術(shù)使得輸精管精子內(nèi)環(huán)境發(fā)生改變相關(guān)， 具體因素還需要進(jìn)一步探討。

綜上所述， 不論是射出的精子、還是附睪或睪丸精子、或者是輸精管精子， 不影響其ICSI的受精率、卵裂率和臨床妊娠率。

參考文獻(xiàn)

[1] Palermo G， Joris H， Devroey P， et al. Pregnancies after intracytoplasmic injection of single spermatozoon into an oocyte. Lancet， 1992 ， 340（8810）：17-18.

[2] Bukulmez O. The origin of spermatozoa does not affect intracy-toplasmic sperm injection outcome. European Journal of Obstetrics Gynecology & Reproductive Biology， 2001， 94（2）：250-255.

[3] 李滿， 莊廣倫， 張敏芳， 等.用射出精子、附睪精子、睪丸精子顯微受精治療男性不育.中華外科雜志， 2000， 38（4）：280-282.

[4] 張丹， 譚麗， 趙冬梅.三種不同來源精子行卵泡漿內(nèi)單精子注射臨床結(jié)局的比較.中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新， 2014， 32（11）：11-13.

[收稿日期：2016-04-22]