核酸檢測法對血液標本內乙肝病毒的檢測價值分析①

王志宏，李 輝

(陜西省漢中市中心血站檢驗科，陜西 漢中 723000)

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核酸檢測法對血液標本內乙肝病毒的檢測價值分析①

王志宏，李 輝

(陜西省漢中市中心血站檢驗科，陜西 漢中 723000)

目的：研究分析核酸檢測法對血液標本內乙肝病毒(HBV)的檢測價值。方法：采集中心血站無償獻血的血液標本16214份，同時進行酶聯免疫吸附法(ELISA)和核酸檢測法，以篩查HBV感染情況，并分析兩組檢測方法的診斷價值。結果：ELISA、核酸檢測HBV的一致性較好，差異無統計學意義(P>0.05)。核酸檢測法的特異性、敏感度明顯高于ELISA檢測法，而漏診率及窗口期明顯低于ELISA檢測；A組的HBV-DNA陽性率、含量均高于B組、C組。上述差異均有統計學意義(P<0.05)。結論：核酸檢測法具有高度的特異性和靈敏度，與ELISA檢測具有一定的互補性，可有效地減少漏診率，縮短窗口期，且HBV-DNA的含量能反映HBV的傳染性，對輸血安全具有重要作用。

核酸檢測； 乙肝病毒； 檢測價值

本文通過在ELISA檢測HBsAg的基礎上，同時應用核酸檢測對獻血者的血液標本進行檢測，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 篩查對象:采集2015年8月至2015年12月我院血液中心無償獻血的血液標本16214份。所有獻血者均經金標試紙法檢測HBsAg和干化學法檢測ALT結果合格。血液采集后同時留取兩樣管標本，一管用于ELISA檢測：使用分離膠促凝真空管(5mL/管)采集；另一管用于核酸檢測：使用帶分離膠EDTA-K2抗凝真空管(5mL/管)采集。所得樣本應準確記錄具體的采集日期以及樣品編碼等信息。并在4h內經離心后凍存在4℃冰箱，48h內檢測結果。若不能完成的標本則提取血漿置于-20℃環境下保存。

1.2 儀器與試劑:ELISA檢測采用FAME24/20型全自動酶免分析儀(瑞士哈密頓公司)；核酸檢測采用實時熒光定量PCR系統(美國羅氏公司)；低溫離心機(德國Thermo)。HBV常規血清學篩查試劑盒(廈門英科新創)以及配套檢測試劑。

1.3 檢測方法:所有血液標本均參照國家《獻血者健康檢查要求》[1]進行衛生部的初檢和復檢。每份標本均采用ELISA試劑進行HBV血清學標志物檢測以及PCR系統進行乙肝病毒基因(HBV-DNA)檢測。以lg(HBV-DNA)>2.7記為陽性，其中HBV血清學標志物包含HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb。

1.3 觀察指標:觀察HBsAg的陽性3種HBV感染狀態，包括大三陽(HBsAg+/HBeAg+/HBcAb+)、小三陽(HBsAg+/HBeAb+/HBcAb+)和急性感染或感染慢性期(HBsAg+/HBcAb+)。

2 結 果

2.1 兩組方法診斷陽性率對比:兩種方法檢測法的陽性率比較，一致性較好，差異無統計學意義(Kappa值=0.647，P=0.053)。見表1。

表1 兩組方法診斷陽性率對比(n)

2.2 兩組方法特異性、敏感度對比:核酸檢測法的特異性、敏感度高于ELISA檢測法，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組方法特異性以及敏感度對比n(%)

2.3 兩組方法漏診率、窗口期對比:核酸檢測法的漏診率、窗口期低于ELISA檢測，差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組方法漏診率、窗口期對比

2.4 HBV感染與HBV-DNA陽性率、含量分析：A組的HBV-DNA陽性率、含量均高于B組、C組，差異有統計學意義(P<0.05)，而B組、C組的HBV-DNA陽性率、含量差異無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 HBV感染與HBV-DNA陽性率、含量分析

注：A組：大三陽，B組：小三陽，C組：急性感染或感染慢性期；A、B兩組比較，①P<0.05；A、C兩組比較，②P<0.05；B、C兩組比較，③P<0.05

3 討 論

乙肝病毒(HBV)是一種經血液傳播的病毒性傳染病。在我國HBV呈高流行發展趨勢，對獻血人群的血液進行篩查是預防HBV傳播的重要途徑。酶聯免疫吸附法(ELISA)作為檢測HBV最常用的方法，常以乙肝表面抗原(HBsAg)作為檢測指標，具有快速、便宜等優勢，在血液篩檢中占據著重要的地位。但是由于存在HBV感染的窗口期、隱匿性HBV等問題，使得HBV漏檢的風險較大。核酸檢測法作為血清學診斷方法的一種補充，是一種新型的分子生物學診斷方法[2]。此方法是通過對乙肝病毒基因(HBV-DNA)含量的測定，進而直接、有效地反映HBV的感染情況，其結果靈敏性較高，現已廣泛地應用于獻血者血液病毒感染的篩查。

本文通過對中心血站無償獻血的血液標本進行ELISA檢測法以及核酸檢測法。結果發現，核酸檢測HBV的陽性率與ELISA檢測存在著一定的差異性。8份血液標本ELISA檢測陽性但在核酸檢測中呈陰性。筆者認為，這可能是因為乙肝患者在藥物治療過程使得血液里殘留HBsAg，它并不具備病毒DNA，且傳染性及復制率均不高。而11份標本ELISA檢測為陰性但在核酸檢測中呈陽性。究其原因，這可能是因為在HBV感染早期病毒數量不多，ELISA檢測通過HBsAg指標并不能被檢測到，而DNA在血清中也存在，因此核酸檢測陽性。Chatterjee等研究表明[3]，通過核酸檢測可將輸血傳播HBV的ELISA檢測窗口期縮短43%。與本文研究結果基本一致，核酸檢測的窗口期幾乎只需ELISA檢測時間的一半。此外，本研究結果還發現，A組的HBV-DNA陽性率、含量均明顯高于B組、C組(P<0.05)。這提示，HBV感染狀態與HBV-DNA陽性率、含量相關，大三陽的陽性率以及含量明顯較高。這可能是因為急性感染或感染慢性期的HBV并無傳染性，隨著HBV-DNA陽性率、含量的增高，HBV血液標本的傳染性越強。同時也發現了可以通過對HBV-DNA的定量測定來說明HBV傳染性。

[1] 蔡杰,許紀玲,陸玉婷,等.大容量樣本病毒濃縮HCV核酸檢測方案的研究[J].臨床和實驗醫學,2014,13(13):1070～1073.

[2] Xiao X,Zhai J,Zeng J,et al.Comparative evaluation of a triplex nucleic acid test for detection of HBV DNA, HCV RNA, and HIV-1 RNA, with the Procleix Tigris System[J].Virol Methods,2013,187 (2): 357～361.

[3] Chatterjee K,Agarwal N,Coshic P,et al.Sensitivity of individual and mini-pool nucleic acidtesting assessed by dilution of hepatitis B nucleic acid testing yield samples[J].Asian Transfus Sci, 2014,8 (1): 26～28.

Value Analysis of Nucleic Acid detection Method for Detection of Hepatitis B Virus in Blood Samples

WANGZhihong,LIHui

(ClinicallaboratoryofHanzhoungBloodCenter,ShanxiHanzhong723000,China)

Objective: To analyze the nucleic acid detection method for blood samples in the detection of hepatitis B virus (HBV). Methods: 16214 blood samples were collected in our hospital blood center blood donation, and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and nucleic acid detection method in screening of HBV infection situation, diagnosis and analysis of two group detection method. Results: The positive rate of nucleic acid detection ELISA, HBV were 0.21%, 0.23%, the difference was not statistically significant (P > 0.05), the coincidence rate of the two methods for detection of specific 99.77%. nucleic acid detection method, the sensitivity was significantly higher than that of ELISA detection, and the detection rate and the detection window period was significantly lower than that of ELISA the positive rate of HBV-DNA; A group, were significantly higher than in B group, C group. The differences were statistically significant (P < 0.05). Conclusion: The nucleic acid detection method has high specificity and sensitivity, complementarities and ELISA can effectively detect. To reduce the false negative rate, shorten the window period, and the content of HBV-DNA can reflect HBV infectivity, plays an important role in the safety of blood transfusion.

Nucleic acid detection; Hepatitis B virus; Detection value

① 【基金項目】陜西省科技攻關項目，(編號：2009k13-G6(7))

1006-6233(2016)12-2097-03

A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2016.12.068