咳速停膠囊中5味藥材成分的薄層色譜鑒別

羅奕，黃紅梅，姚文麗，吳琳琳，楊娟艷，茅向軍

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，貴州 貴陽 550004；2.貴州省食品藥品檢驗所食品室，貴州 貴陽 550005；3.貴陽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴州 貴陽 550002)

?

咳速停膠囊中5味藥材成分的薄層色譜鑒別

羅奕1，2，黃紅梅3，姚文麗1，吳琳琳1，楊娟艷3，茅向軍2

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，貴州 貴陽 550004；2.貴州省食品藥品檢驗所食品室，貴州 貴陽 550005；3.貴陽中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴州 貴陽 550002)

目的 為完善咳速停膠囊現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項下的薄層鑒別，對咳速停膠囊中枇杷葉、麻黃、罌粟殼、百尾參、虎耳草5味藥材進(jìn)行薄層色譜鑒別(TLC)研究。方法 采用TLC法分別對5味藥材進(jìn)行鑒別。結(jié)果 所建立的方法專屬性較強(qiáng)，各色譜斑點清晰且分離度良好，陰性均無干擾。結(jié)論 TLC可適用于咳速停膠囊中5味藥材的薄層鑒別。

咳速停膠囊；枇杷葉；麻黃；罌粟殼；百尾參；虎耳草；薄層鑒別

咳速停膠囊為貴州特色苗藥品種之一，其處方用藥包括吉祥草、百尾參、虎耳草等9味藥材，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、潤肺止咳、益胃生津功效，臨床常用于感冒及慢性支氣管炎引起的咳嗽、咽干、咯痰、氣喘。其現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)已收載入國家食品藥品監(jiān)督管理局，在該標(biāo)準(zhǔn)中薄層鑒別項下主要集中于對吉祥草、桔梗、桑白皮3味藥材的研究[1]，而對處方中其余6味藥材(黃精、枇杷葉、麻黃、罌粟殼、虎耳草、百尾參)尚未進(jìn)行系統(tǒng)的薄層鑒別研究。因中藥的真?zhèn)巍?yōu)劣與其制劑的臨床用藥安全息息相關(guān)[2]，為完善其標(biāo)準(zhǔn)、提高咳速停膠囊的質(zhì)量控制水平，保證臨床用藥的安全性及有效性，本實驗通過參考國內(nèi)外文獻(xiàn)報道現(xiàn)狀以及相應(yīng)資料和標(biāo)準(zhǔn)項下的薄層鑒別項，同時增補(bǔ)、完善了咳速停膠囊中枇杷葉、麻黃、罌粟殼、虎耳草、百尾參5味藥材的薄層鑒別，并初次對百尾參藥材進(jìn)行薄層色譜(TLC)鑒別研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 XS205型電子分析天平為梅特勒-托利多儀器上海有限公司生產(chǎn)；ZF7三用紫外分析為鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)；KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器為昆山市超聲儀器有限公司生產(chǎn)；DK-98-IIA電熱恒溫水浴鍋、101-OA型電熱鼓風(fēng)干燥箱均為天津市泰斯特儀器有限公司生產(chǎn)。

1.2 試藥及試劑 熊果酸對照品(批號110742-200202)、鹽酸麻黃堿對照品(批號171241-201508)、嗎啡對照品(批號171201-201123)均購買自中國藥品生物制品檢定所；枇杷葉對照藥材(批號121261-201303)、麻黃對照藥材(批號121051-201005)、罌粟殼對照藥材(批號120957-201507)，均購買自中國食品藥品檢定研究院；9味藥材(吉祥草、桔梗、桑白皮、黃精、枇杷葉、麻黃、罌粟殼、虎耳草、百尾參)均由貴州百靈有限公司提供及貴州省食品藥品檢驗所中藥標(biāo)本館李楊老師鑒別；所用試劑均為分析純。

1.3 薄層板及樣品 所用硅膠G薄層板均由青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)、咳速停膠囊(批號為分別20150613、20150701、20150702)均由貴州百靈有限公司提供，自制不同陰性對照樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 枇杷葉的薄層鑒別[3-4]稱取咳速停膠囊內(nèi)容物1.0 g，加95%乙醇溶液20 mL，超聲30 min，趁熱濾過及蒸干，殘渣加甲醇2 mL使其完全溶解，制成供試品溶液。精密稱取適量熊果酸對照品，加甲醇制成濃度為0.1 g·L-1的對照品溶液。稱取枇杷葉對照藥材1.0 g，同法制成對照藥材溶液。稱取缺枇杷葉藥材陰性樣品1.0 g，同法制成陰性對照溶液。按照《中國藥典》2015版薄層色譜法(通則0502)試驗，以丙酮-甲苯-甲酸(1∶5∶0.2)為展開劑，以硅膠G板為薄層板，供試品溶液、陰性樣品溶液、對照藥材和對照品溶液點樣量分別為10、10、5、5 μL，將4種溶液依次點于同一薄層板，以含10%硫酸的乙醇溶液為顯色劑，于紫外光燈(365 nm)下檢視。結(jié)果在薄層色譜圖上，各色譜斑點分離良好且清晰，在供試品色譜中，在與對照藥材色及對照品色譜相應(yīng)的位置處，顯相同顏色的斑點，且枇杷葉陰性對照無干擾，如圖1所示。

注：1～3.供試品溶液；4.枇杷葉對照藥材溶液；5.熊果酸對照品溶液；6.缺枇杷葉陰性對照品溶液。

圖1 枇杷葉TLC色譜圖

2.2 麻黃的薄層鑒別[5-7]稱取咳速停膠囊內(nèi)容物1.0 g，加甲醇20 mL，超聲15 min，趁熱濾過及蒸干，殘渣加甲醇4 mL使其完全溶解，制成供試品溶液。精密稱取適量鹽酸麻黃堿對照品，加甲醇制成濃度為0.1 g·L-1的對照品溶液。稱取麻黃對照藥材1.0 g，同法制成對照藥材溶液。稱取缺麻黃藥材陰性樣品1.0 g，同法制成陰性對照溶液。按照《中國藥典》2015版薄層色譜法(通則0502)試驗，以正丁醇-甲醇-三氯甲烷-氨水(8∶1∶3∶1)為展開劑，以硅膠G板為薄層板，點樣量5 μL，將4種溶液依次點于同一薄層板，以噴茚三酮溶液為顯色劑，105 ℃下加熱1 min，直接觀察。結(jié)果在薄層色譜圖上，各色譜斑點分離良好且清晰，在供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應(yīng)的位置處，顯相同顏色的斑點，且麻黃陰性對照無干擾，如圖2所示。

注：1～3.供試品溶液；4.枇杷葉對照藥材溶液；5.熊果酸對照品溶液；6.缺枇杷葉陰性對照品溶液。

圖2 麻黃TLC色譜圖

2.3 罌粟殼的薄層鑒別[8-10]稱取咳速停膠囊內(nèi)容物10.0 g，加濃氨水10 mL，加乙酸乙酯25 mL，超聲30 min，趁熱濾過及蒸干，殘渣加甲醇2 mL使其完全溶解，制成供試品溶液。精密稱取適量嗎啡對照品，加甲醇制成濃度為0.1 g·L-1的對照品溶液。稱取罌粟殼對照藥材1.0 g，同法制成對照藥材溶液。稱取缺罌粟殼藥材陰性樣品10.0 g，同法制成陰性對照溶液。按照《中國藥典》2015版薄層色譜法(通則0502)試驗，以丙酮-95%乙醇-甲苯-氨水(10∶3∶15∶1)為展開劑，以硅膠G板為薄層板，點樣量10 μL，將4種溶液依次點于同一薄層板，以噴稀碘化鉍鉀溶液為顯色劑，直接觀察。結(jié)果在薄層色譜圖上，各色譜斑點分離良好且清晰，在供試品色譜中，在與對照藥材及對照品色譜相應(yīng)的位置處，顯相同顏色的斑點，且罌粟殼陰性對照無干擾，如圖3所示。

2.4 百尾參的薄層鑒別[11]稱取咳速停膠囊內(nèi)容物10.0 g，百尾參藥材1.0 g以及缺百尾參藥材樣品10.0 g，按“罌粟殼薄層鑒別”項下供試品溶液制備方法，同法分別制成供試品溶液、對照藥材溶液以及陰性對照溶液。按照《中國藥典》2015版薄層色譜法(通則0502)試驗，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(12∶2∶2)為展開劑，以硅膠G板為薄層板，點樣量5 μL，將3種溶液依次點于同一薄層板，以三氯化鋁溶液為顯色劑，于紫外光燈(365 nm)下檢視。結(jié)果在薄層色譜圖上，各色譜斑點分離良好且清晰，在供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置處，顯相同顏色的斑點，且百尾參陰性對照無干擾，如圖4所示。

注：1～3.供試品溶液;4.罌粟殼對照藥材溶液;5.嗎啡對照品溶液;6.缺罌粟殼陰性對照品溶液。

圖3 罌粟殼TLC色譜圖

注：1～3.供試品溶液;4.罌粟殼對照藥材溶液;5.嗎啡對照品溶液。

圖4 百尾參TLC色譜圖

注：1～3.供試品溶液;4.罌粟殼對照藥材溶液;5.嗎啡對照品溶液。

圖5 虎耳草TLC色譜圖

2.5 虎耳草的薄層鑒別[12-14]稱取咳速停膠囊內(nèi)容物10.0 g，加80%甲醇溶液50 mL，水浴回流60 min，趁熱濾過及蒸干，上述殘渣加水20 mL溶解，加乙醚萃取3次，每次20 mL，靜置分層，取下層溶液，合并，加鹽酸溶液5 mL，水浴回流60 min，迅速放冷置室溫，加乙酸乙酯萃取2次，每次25 mL，靜置分層，取上層溶液合并蒸干，殘渣加甲醇2 mL使其完全溶解，制成供試品溶液。稱取虎耳草藥材4.0 g，制成對照藥材溶液。稱取缺虎耳草藥材陰性樣品10.0 g，制成陰性對照溶液。按照《中國藥典》2015版薄層色譜法(通則0502)試驗，以甲苯-甲酸-乙酸乙酯(10∶1∶2)為展開劑，以硅膠G板為薄層板，點樣量10 μL，將3種溶液依次點于同一薄層板，于紫外光燈(365 nm)下檢視。結(jié)果在薄層色譜圖上，各色譜斑點分離良好且清晰，在供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置處，顯相同顏色的斑點，且虎耳草陰性對照無干擾，如圖5所示。

3 討論

本實驗在建立黃精藥材薄層鑒別方法時發(fā)現(xiàn)2味藥材(黃精、桔梗)同時含有的有效成分均為多糖類，相互之間干擾較大，未能建立黃精藥材的專屬性薄層鑒別法。本實驗在尋找百尾參藥材合適的展開體系時，發(fā)現(xiàn)使用虎耳草的展開體系時有專屬性的色譜斑點，通過陰性樣品的排查、提取方法的優(yōu)化以及展開體系比例的調(diào)節(jié)，最終確定百尾參的展開體系為甲苯-乙酸乙酯-甲酸(12∶2∶2)，同時對顯色劑磷鉬酸、硫酸乙醇、三氯化鋁進(jìn)行比較考察，結(jié)果顯示噴以三氯化鋁溶液可找到百尾參藥材的專屬性斑點。

目前黃精、麻黃、枇杷葉、罌粟殼均已被收載于《中國藥典》2015版一部，而虎耳草及百尾參均被收載于《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》[13]2003版。本實驗通過參考標(biāo)準(zhǔn)及文獻(xiàn)資料，同時優(yōu)化各提取溶劑、提取方法、提取時間以及展開體系、顯色劑，從而找到適合各藥材的專屬性薄層鑒別法，并對各建立的方法分別進(jìn)行方法學(xué)耐用性考察(薄層板、溫度、濕度)，結(jié)果表明不同的薄層板、溫度、濕度對所建立的方法均無影響，且所建立的方法分別在不同薄層板下以及5～40 ℃、20%～80%溫濕度范圍內(nèi)，各色譜斑點均清晰，分離度良好且陰性均無干擾。因此本實驗所建方法可適用于咳速停膠囊中5味藥材的專屬性鑒別，同時為其提升質(zhì)量控制基礎(chǔ)提供參考依據(jù)。此外，本文同時彌補(bǔ)了百尾參薄層鑒別項空白。

[1] WS-10214(ZD-0214)-2002-2012Z，國家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2012：137.

[2] 陳孟夏，尹登科，梁杰，等.紫杉醇新劑型的研究進(jìn)展[J].安徽醫(yī)藥，2014，18(4)：602-605.

[3] 國家藥典委員會.中國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2015：306-307.

[4] 費毅琴，聶晶.補(bǔ)腦安神片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升的研究[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2015，16(2)：105-108.

[5] 張紅星.祛寒止癢顆粒中的麻黃、赤芍薄層色譜鑒別研究[J].中國民族民間醫(yī)藥，2013，22(11)：14-14.

[6] 簡祖琴，李平，趙梅.補(bǔ)腦膠囊的薄層色譜鑒別[J].中國民族醫(yī)學(xué)雜志，2012，16(2)：59-60.

[7] 吳紅霞，趙歡，劉冰.肺炎合劑中四味藥材的薄層色譜鑒別[J].新疆中醫(yī)藥，2012，30(4)：73-75.

[8] 謝周濤，胡進(jìn).復(fù)方枇杷膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國藥業(yè)，2014，23(8)：26-28.

[9] 王興海，劉力，王娟，等.固腸止瀉丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].陜西中醫(yī)，2014，35(9)：1245-1247.

[10] 劉文志，張周菊，何再安.蜜煉枇杷膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中藥材，2012，35(1)：145-147.

[11] 甘秀海，周欣，梁志遠(yuǎn)，等.百尾參根的化學(xué)成分研究[J].中國實驗方劑學(xué)，2013，19(23)：140-142.

[12] 先春，龔小見，楊占南.虎耳草的薄層色譜研究[J].貴州師范大學(xué)學(xué)報，2012，30(3)：7-8.

[13] 貴州省藥品監(jiān)督管理局.貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):2003版[S].貴州：貴州科技出版社，2003：235.

[14] 辛秀，余丹，朱麗，等.復(fù)方矮地茶片定性定量方法研究[J].中南藥學(xué)，2015(4)：410-413.

TLC identification of five Chinese medicinal herbs of kesuting capsules

LUO Yi1,2,HUANG Hongmei3,YAO Wenli1,et al

(1.PharmaceuticalCollege,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang,Guizhou550004,China;2.FoodSection,GuizhouProvincialFoodandDrugInspectionInstitute,Guiyang,Guizhou550004,China;3.PharmaceuticalCollege,GuiyangCollegeofTraditionalChineseMedicine,Guiyang,Guizhou550002,China)

Objective To perfect the TLC identification of the existing quality standard of keshuting capsules,to identify the five Chinese medicinal herbs(loquat leaf,herba ephedrae,pericarpium papavers,cynanchum atratum ,saxifraga stolonifera) by TLC.Methods TLC was adopted for the respective identifications of the five Chinese medicinal herbs.Results The method had a strong specificity.The TLC spots were clear with good separation.The blank test showed no interference.Conclusion The method built can be used for the TLC identification of the five Chinese medicinal herbs of kesuting capsules.

Kesuting capsules;Platycodon root;Herba ephedrae;Pericarpium papavers;Disporum cantoniense;Saxifraga stolonifera;TLC identification

國家藥典委員會2015年度藥品標(biāo)準(zhǔn)提高工作(項目編號87)

茅向軍，男，主任藥師，碩士生導(dǎo)師，研究方向：藥物質(zhì)量控制技術(shù)，E-mail:1074459931@qq.com

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.11.012

2016-06-30，

2016-08-21)