天麻素對高血壓大鼠血壓變化、血管保護(hù)作用及氧化應(yīng)激反應(yīng)機(jī)制研究

陳湖海 黃 濤 劉 輝

(廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院藥劑科，武漢，430070)

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天麻素對高血壓大鼠血壓變化、血管保護(hù)作用及氧化應(yīng)激反應(yīng)機(jī)制研究

陳湖海 黃 濤 劉 輝

(廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院藥劑科，武漢，430070)

目的：探討天麻素對高血壓大鼠血壓變化、血管保護(hù)作用及氧化應(yīng)激反應(yīng)機(jī)制研究。方法：50只大鼠隨機(jī)分為正常對照組、模型組、替米沙坦組、天麻素低劑量組、天麻素高劑量組，每組大鼠10只。正常對照組給予等劑量生理鹽水灌胃，模型組于造模成功后給予等劑量生理鹽水灌胃，替米沙坦組于造模成功后給予5 mg/(kg·d)灌胃，天麻素低劑量組于造模成功后給予40 mg/(kg·d)灌胃，天麻素高劑量組于造模成功后給予160 mg/(kg·d)灌胃。各組大鼠均連續(xù)灌胃8周，1次/d。結(jié)果：與模型組比較，替米沙坦組和天麻素各劑量組收縮壓均下降(P<0.05)；與替米沙坦組比較，天麻素高劑量組收縮壓下降(P<0.05)，天麻素低劑量組收縮壓上升(P<0.05)；天麻素高劑量組收縮壓明顯低于天麻素低劑量組(P<0.05)；與模型組比較，替米沙坦組和天麻素各劑量組ET-1含量均下降，而NO含量均上升(P<0.05)；與替米沙坦組比較，天麻素高劑量組ET-1含量下降及NO含量上升(P<0.05)，而天麻素低劑量組ET-1含量上升及NO含量下降(P<0.05)；天麻素高劑量組ET-1含量低于天麻素低劑量組，而NO含量高于天麻素低劑量組(P<0.05)；與模型組比較，替米沙坦組和天麻素各劑量組SOD和MDA含量均下降(P<0.05)；與替米沙坦組比較，天麻素高劑量組SOD和MDA含量下降(P<0.05)；天麻素高劑量組SOD和MDA含量低于天麻素低劑量組(P<0.05)。結(jié)論：天麻素可明顯降低高血壓大鼠血壓，且可達(dá)到血管保護(hù)作用及抗脂質(zhì)過氧化損傷，故而值得進(jìn)一步研究。

天麻素；高血壓；血壓；血管保護(hù)；氧化應(yīng)激

高血壓是常見的一種流行疾病，流行病學(xué)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)其發(fā)病率呈不斷上升趨勢，嚴(yán)重影響了人們身心健康和生活質(zhì)量[1-2]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為高血壓屬“頭痛”“眩暈”等范疇[3]，天麻以干燥塊莖入藥，歸肝經(jīng)，具有熄風(fēng)止痙功效，近年來天麻被臨床上廣泛應(yīng)用于治療高血壓，且有效成分為天麻素[4-5]。目前對天麻素有關(guān)高血壓基礎(chǔ)研究方面甚少。故而筆者本研究旨在分析天麻素對高血壓大鼠血壓變化、血管保護(hù)作用及氧化應(yīng)激反應(yīng)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 SPF級健康Wista大鼠，50只，雌雄各半，體質(zhì)量(200±20)g，自由飲食、飲水，維持室溫為23～25 ℃，相對濕度70%，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。大鼠由上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司提供，許可證號SCXK(滬)2007-009。天麻素(純度98%，購于浙江誠意藥業(yè)有限公司)，替米沙坦片(宜昌長江藥業(yè)有限公司，規(guī)格：40 mg)。

1.2 實驗分組 50只大鼠隨機(jī)分為正常對照組、模型組、替米沙坦組、天麻素低劑量組、天麻素高劑量組，每組大鼠10只。

1.3 方法

1.3.1 高血壓模型大鼠造模 采用雙腎-夾法手術(shù)方法造模，給予戊巴比妥鈉0.01 g/mL麻醉大鼠。取仰臥位固定大鼠，備皮后手術(shù)區(qū)域給予碘伏消毒，于大鼠腹正中線旁0.5 cm、左肋弓下緣0.5 cm處行2.0～2.5 cm縱切口，然后逐層分離皮下組織進(jìn)入腹腔，采用鈍性分離腹主動脈鞘，且剝離腹主動脈，然后于大鼠左右腎動脈分支的下方穿入1.0號手術(shù)縫線結(jié)扎，從而造成腎動脈部分狹窄?？p合傷口，消毒，包扎，且注射青霉素2～3萬單位/只，每次1次，連續(xù)5 d。造模成功判定標(biāo)準(zhǔn)：于造模2周后測量大鼠平均收縮壓(SBP)，于造模前血壓差值≥20 mmHg，且高于115 mmHg確定造模成功。所有大鼠均造模成功。

1.3.2 給藥方法 正常對照組給予等劑量生理鹽水灌胃，模型組于造模成功后給予等劑量生理鹽水灌胃，替米沙坦組于造模成功后給予5 mg/(kg·d)灌胃，天麻素低劑量組于造模成功后給予40 mg/(kg·d)灌胃，天麻素高劑量組于造模成功后給予160 mg/(kg·d)灌胃。各組大鼠均連續(xù)灌胃8周，1次/d。

1.3.3 各組大鼠血壓測定 測量各組大鼠收縮壓變化情況，均由同一人測定。

1.3.4 各組大鼠血管內(nèi)皮功能指標(biāo)測定 血管內(nèi)皮功能指標(biāo)包括內(nèi)皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)。大鼠于給藥8周末，麻醉，于大鼠眼眶取血3 mL，離心，分離血漿，于-80 ℃下保存待測。采用放射免疫法測定ET-1水平，采用硝酸還原酶比色法檢測大鼠血漿中亞硝酸鹽和硝酸鹽含量來間接反映NO水平。

1.3.5 各組大鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)測定 氧化應(yīng)激指標(biāo)包括SOD、MDA，大鼠于給藥8周末，麻醉處死大鼠，分離大鼠胸主動脈，置于-80 ℃下保存待測。采用硫代巴比妥酸比色法測定大鼠主動脈組織MDA含量。

1.3.6 各組大鼠病理組織變化 切取大鼠腎臟組織，采用4%多久甲醛固定48 h后，石蠟包埋、切片，HE染色后光鏡下觀察腎臟組織病理變化。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠收縮壓變化比較 見表1。與正常對照組比較，其余各組收縮壓均上升(P<0.05)；與模型組比較，替米沙坦組和天麻素各劑量組收縮壓均下降(P<0.05)；與替米沙坦組比較，天麻素高劑量組收縮壓下降(P<0.05)，天麻素低劑量組收縮壓上升(P<0.05)；天麻素高劑量組收縮壓明顯低于天麻素低劑量組(P<0.05)。

表1 各組大鼠收縮壓變化比較

注：與正常對照組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05；與替米沙坦組比較，▲P<0.05；與天麻素低劑量組比較，□P<0.05。

2.2 各組大鼠血漿ET-1、NO含量比較 與正常對照組比較，其余各組ET-1含量均上升，而NO含量均下降(P<0.05)；與模型組比較，替米沙坦組和天麻素各劑量組ET-1含量均下降，而NO含量均上升(P<0.05)；與替米沙坦組比較，天麻素高劑量組ET-1含量下降及NO含量上升(P<0.05)，而天麻素低劑量組ET-1含量上升及NO含量下降(P<0.05)；天麻素高劑量組ET-1含量低于天麻素低劑量組，而NO含量高于天麻素低劑量組(P<0.05)。見表2。

表2 各組大鼠血漿ET-1、NO含量比較

注：與正常對照組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05；與替米沙坦組比較，▲P<0.05；與天麻素低劑量組比較，□P<0.05。

2.3 各組大鼠SOD、MDA含量比較 與正常對照組比較，其余各組SOD和MDA含量均上升(P<0.05)；與模型組比較，替米沙坦組和天麻素各劑量組SOD和MDA含量均下降(P<0.05)；與替米沙坦組比較，天麻素高劑量組SOD和MDA含量下降(P<0.05)；天麻素高劑量組SOD和MDA含量低于天麻素低劑量組(P<0.05)。見表3。

表3 各組大鼠SOD、MDA含量比較

注：與正常對照組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05；與替米沙坦組比較，▲P<0.05；與天麻素低劑量組比較，□P<0.05。

2.4 各組大鼠腎臟病理變化 HE染色結(jié)果可見，正常對照組大鼠腎組織未見明顯異常；模型組大鼠腎組織能夠腎臟入球小動脈管壁增厚，以及大鼠部分腎小球毛細(xì)血管缺血、皺縮，同時可見部分間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤；替米沙坦組及天麻素各劑量組大鼠腎臟組織結(jié)構(gòu)較模型組明顯改善。見圖1。

圖1 各組大鼠腎臟病理變化(×400)

3 討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為高血壓屬“頭痛”“眩暈”等范疇[9]。認(rèn)為高血壓與肝失疏泄和脾失健運關(guān)系密切，中醫(yī)理論主要由于肝腎不足，肝陽偏亢，生風(fēng)化熱所致。肝陽偏亢，風(fēng)陽上擾，則會出現(xiàn)眩暈、頭痛；肝陽有余，化熱擾心，則會出現(xiàn)失眠多夢、心神不安[6-9]。故應(yīng)以平肝熄風(fēng)為主。天麻具有祛風(fēng)通絡(luò)、平肝熄風(fēng)功效。目前已知的天麻主要有效成分為天麻素、天麻苷元等，其中天麻素降壓作用最為明顯。天麻素具有抗驚厥、鎮(zhèn)靜、催眠、抗癲痛的作用，且其在體內(nèi)不容易積蓄，在腎中代謝最快[9]?，F(xiàn)代藥理研究表明[10-11]，天麻素具有提高內(nèi)皮細(xì)胞活性，保持內(nèi)皮細(xì)胞的完整性，降低缺氧對內(nèi)皮細(xì)胞的受損及內(nèi)皮功能紊亂；天麻素對抗兒茶酚胺類遞質(zhì)的縮血管效應(yīng)，非競爭性拮抗PDC和ROC通道，阻止Ca2+內(nèi)流和釋放，引起血管舒張，降低血壓。筆者本研究結(jié)果表明，與模型組比較，替米沙坦組和天麻素各劑量組收縮壓均下降，與替米沙坦組比較，天麻素高劑量組收縮壓下降，天麻素低劑量組收縮壓上升，天麻素高劑量組收縮壓明顯低于天麻素低劑量組，提示天麻素可明顯降低血壓。

高血壓病與自由基損傷密切相關(guān)，自由基對人體具有較大的危害性，其中一方面主要是由于自由基血管平滑細(xì)胞膜中的不飽和脂肪酸導(dǎo)致的脂質(zhì)過氧化作用，從而致使血管平滑肌細(xì)胞損傷，進(jìn)一步使得血管硬化，加重高血壓[12]；而另外一方面主要是由于自由基的堆積導(dǎo)致高血壓患者免疫功能出現(xiàn)紊亂，故而清除體內(nèi)多余自由基抗氧化損傷也為高血壓治療的重要環(huán)節(jié)[13]。筆者本研究結(jié)果表明，與模型組比較，替米沙坦組和天麻素各劑量組SOD和MDA含量均下降，與替米沙坦組比較，天麻素高劑量組SOD和MDA含量下降，天麻素高劑量組SOD和MDA含量低于天麻素低劑量組，提示天麻素可明顯清除氧子自由基和抗氧化作用。高血壓的發(fā)病因素較為復(fù)雜，其中血管內(nèi)皮功能障礙在諸多病因之一[14]。血管內(nèi)皮功能中NO和ET間的平衡最為重要。ET是由內(nèi)皮細(xì)胞合成、分泌的一種生物活性肽，NO是作用最強的一種舒血管物質(zhì)，具有強烈的收縮血管及升高血壓的作用[15-17]。本研究結(jié)果表明，與模型組比較，替米沙坦組和天麻素各劑量組ET-1含量均下降，而NO含量均上升，與替米沙坦組比較，天麻素高劑量組ET-1含量下降及NO含量上升(P<0.05)，而天麻素低劑量組ET-1含量上升及NO含量下降，天麻素高劑量組ET-1含量低于天麻素低劑量組，而NO含量高于天麻素低劑量組，提示天麻素可明顯改善血管內(nèi)皮功能。

綜上所述，天麻素可明顯降低高血壓大鼠血壓，且可達(dá)到血管保護(hù)作用及抗脂質(zhì)過氧化損傷，故而值得進(jìn)一步研究。

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(2016-04-18收稿 責(zé)任編輯：張文婷)

Gastrodin′s Effect on Rats Blood Pressure Changes and Vascular Protective Effects of Oxidative Stress Response

Chen Huhai,Huang Tao,Liu Hui

(DepartmentofPharmacy，WuhanGeneralHospitalofGuangzhouMilitaryRegion，Wuhan430070,China)

Objective:To investigate the gastrodin′s effect on blood pressure，vascular protective effect and mechanism of oxidative stress in hypertensive rats.Methods:A total of 50 rats were randomly divided into normal control group，model group，telmisartan group，gastrodin low dose group，high dose group，10 rats in each group.The normal control group were given the same dose of normal saline，model group given dose of normal saline after modeling，telmisartan group 5 mg/(kg-D)by gavage after modeling，gastrodin low dose group 40 mg/(kg-D)by gavage，high dose group 160 mg/(kg-D)by gavage.Rats in each group were administered orally for 8 weeks，once a day.Results:Compared with the model group，systolic blood pressure of telmisartan group and gastrodin in each dose group dropped(P<0.05)； compared with telmisartan group，gastrodin high-dose group′s systolic blood pressure rose(P<0.05)，gastrodin low-dose group′s systolic blood pressure dropped(P<0.05)； gastrodin high dose group′s systolic pressure was significantly lower than that of the low dose group(P<0.05)； compared with the model group，telmisartan group and gastrodin group′s ET-1 content dropped，while the content of NO increased(P<0.05)； compared with telmisartan group，high dose group′s content of ET-1 dropped and the content of NO increased(P<0.05)，and the gastrodin low dose group ET-1 content increased and the content of NO dropped(P<0.05)； gastrodin high dose group′s ET-1 was lower than that of low dose group，and NO content was higher than the low dose group(P<0.05)； compared with the model group，SOD and MDA of telmisartan group and gastrodin each dose group dropped(P<0.05)； compared with telmisartan group，SOD and MDA dropped in high dose group(P<0.05)； the content of SOD and MDA of gastrodin in high dose group were lower than that of gastrodin low dose group(P<0.05).Conclusion:After using gastrodin，the blood pressure of hypertensive rats can be dropped obviously，and the protective effect of the blood vessel and the anti lipid peroxidation damage can be achieved，which is worth further study.

Gastrodin； High blood pressure； Hypertension； Blood pressure； Blood vessel protection； Oxidative stress

2015年湖北省自然科學(xué)基金項目(編號：2015CFB301)——天麻素調(diào)控內(nèi)皮祖細(xì)胞靶向修復(fù)動脈粥樣硬化及機(jī)制研究的階段性成果

陳湖海(1973.12—)，男，碩士,主管藥師，研究方向：藥物制劑與臨床，E-mail：chh_chh@yeah.net

R544.1；R285.5

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2016.11.047