兒童急性淋巴細胞白血病免疫分型特點分析

盧 榕，陳志奇

(廈門大學附屬第一醫院，福建 廈門 361003)

兒童急性淋巴細胞白血病免疫分型特點分析

盧 榕，陳志奇

(廈門大學附屬第一醫院，福建 廈門 361003)

目的：對45例兒童急性淋巴細胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)的各抗原表達規律進行總結分析。方法：采用流式細胞術直接或間接免疫熒光法檢測45例兒童ALL的免疫表型。結果：45例兒童ALL中，B-ALL的患兒明顯比T-ALL的患兒多，比率分別為88.8%與11.1%。 B-ALL中CD19與CD22表達率分別為100%、93.3%，敏感性最高。有51.1%的患兒為伴有髓系相關抗原表達的ALL(My+-ALL)，主要表達的髓系抗原分別為CD13(20/45)、CD15(8/45)和CD33(6/45)。結論：免疫分型是診斷ALL的重要手段，能夠協同形態學為臨床確定診斷、合理治療、判斷預后提供重要依據。

淋巴細胞白血病；免疫分型；兒童

兒童急性淋巴細胞白血病(acute leukemia，ALL)是起源于B系或T系淋巴祖細胞的惡性克隆性疾病，高居兒童腫瘤發病率榜首。FAB方案是以細胞的形態學特征和組化染色為基礎的簡便方法，由于FAB分類法不能顯示細胞來源、分化階段及預后情況，隨著科學技術進一步的發展，WHO在此基礎上提出了更為全面的MICM分型方案[1]，其中的免疫學即免疫分型。由于白血病細胞阻滯于分化發育的某個階段，根據其來源和分化階段不同，白血病細胞表面或胞漿內的抗原標志也不盡相同。采用已知的單克隆抗體來檢測這些標志，進行免疫分型，結合細胞形態學可將白血病診斷的正確率顯著提高。由于某些標志與臨床特征、疾病危險分層、治療及進展等相關，免疫分型可以為臨床正確診斷白血病，選擇適宜的治療方案并有效評估預后提供依據[2]。現對廈門大學附屬第一醫院45例兒童ALL患兒免疫分型結果進行分析，并對各抗原表達規律、分布情況進行探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2012年10月～2015年12月廈門大學附屬第一醫院收治的住院患兒45例，皆為ALL初發兒童，男25例，女20例，年齡10個月～16歲。均按照兒童急性淋巴細胞白血病診斷標準明確診斷且資料完整。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 主要儀器 Beckmam-coulter FC500 MPL流式細胞儀。

1.2.2 主要試劑 采用四色直接標記的熒光抗體，選擇單抗如下，T細胞系抗體：CD2、CD3、CD5、CD7；B細胞系抗體：CD10、CD19、CD20、CD22、CD79a；髓細胞系抗體：CD13、CD14、CD33、CD117、CD56、CD15；非特異性早期標志：CD34、HLA-DR。上述試劑均及各自陰性對照均購于Beckmam-coulter公司。

1.3 免疫分型的判斷標準

采用歐洲白血病免疫學分型協作組(EGIL)提倡的抗原積分系統[3]。

2 結果

45例急性淋巴細胞白血病患兒中，單純型19例(42.2%),以B淋巴細胞表型為主，有15例；T淋巴細胞表型較少，僅有4例。變異型26例(57.8%)，以My+-B- ALL(B-ALL伴髓系抗原表達)為主，有21例；My+-T- ALL(T-ALL伴髓系抗原表達)有3例；T淋巴細胞表型/B淋巴細胞表型(T/B)2例。各型強表達抗原分布見表1。

表1 45例兒童急性淋巴白血病患者的免疫分型

3 討論

兒童惡性腫瘤發病率最高的就是急性淋巴細胞白血病，隨著科學技術發展，特異性靶向治療及干細胞移植等技術的出現,其緩解率不斷攀升，可達90%以上，但仍有約30%的患兒由于復發而治療失敗。由于T-ALL的臨床、免疫學、細胞遺傳學和分子生物學特點以及相關信號傳導路徑異常均與B-ALL有所區別,有許多學者認為T-ALL免疫表型患兒預后較B-ALL患兒差，T-ALL是就是高危急性淋巴細胞白血病[4]，再加上特異性靶向藥的興起，精準醫療的需要，ALL免疫分型至關重要。

本研究中, B-ALL主要陽性表達分別為：CD19(38/38)、CD22(35/38)、CD10(32/38)、CD20(25/38)、CD79a(19/38)、HLA-DR(33/38)。敏感性最高的為CD19，其表達率為100%，明顯高于其它B系抗原，對B系相關性白血病的診斷具有重要作用，也可為特異性靶向治療提供靶點。其次是CD22，表達率為92.1%，這是近年來靶向治療研究的新熱點。CD20的表達率也較高，由于利妥昔單克隆抗體是針對CD20的特異性靶向藥，CD20+的B-ALL采用利妥昔單克隆抗體聯合化療效果好[5]。CD3和CD7對T-ALL的診斷特異性和敏感性均較高，可用于T-ALL與和B- ALL的鑒別診斷。本研究中，T-ALL的CD2、CD3、CD5、CD7表達率達100%,但CD2、CD5、CD7在B-ALL可見交叉表達，因此CD3對T-ALL的診斷更具特異性。有研究表示CD3+T-ALL的CR率明顯比CD3-T-ALL低，提示CD3的表達影響兒童T-ALL的預后，與首次化療完全緩解有關[6]，因此，CD3也是一種預后不好的標志。

國內外研究ALL髓系抗原表達的文獻較多，多數學者認為表達髓系抗原陽性的ALL(My+-ALL)的白血病細胞同時來源于淋巴及髓系祖細胞,或者是多能淋巴造血前體細胞的轉化結果 。本研究中23例ALL伴有髓系相關抗原表達，其中表達率最高的為CD13(20/45)，其次為：CD15(8/45)、CD33(6/45)，有51.1%(23/45)的ALL患者伴有髓系相關抗原表達(My+-ALL)，略高于佟海俠等[7]的研究，其結果顯示42.5%的兒童ALL表達髓系相關抗原，明顯高于文獻報道的兒童ALL髓系相關抗原陽性率不會超過24%[8],但是國內近年來也有文獻報道超過50%[9],更有甚者如邢超等[10]的研究中兒童ALL的CD13表達率高達87.6%，明顯高于國內其他文獻的結果。國內外文獻報道的兒童ALL表達髓系相關抗原陽性率的差異較大，可能與檢測方法、陽性判斷標準有關，也可能與樣本數量、地域有關。國內外關于兒童ALL表達髓系相關抗原對預后是否有影響尚無統一結論。

CD13不僅表達于髓系祖系,也可見于各階段粒細胞上，CD33主要分布在髓系血細胞的早期階段。CD13、CD33常在ALL中有不同程度表達，本研究中CD13與CD33在ALL中表達率分別為44.4%(20/45)與13.3%(6/45),因此CD13與CD33在判斷白血病是否混合有髓系來源時具有很高的診斷價值。

近年來，相關研究表明CD34抗原選擇性地表達于造血干(祖)細胞的表面，是目前公認的，識別早期造血干(祖)細胞的最早的抗原,可以作為監測原始細胞的一個很好的標志[11]。在本研究中，CD34在ALL中的表達率為73.3%(33/45)。據報道，ALL標本中，CD34表達的白血病細胞比CD34不表達的白血病細胞更不易凋亡；在T-ALL中, CD34表達的白血病細胞顯示出更明顯的增殖活性[12]。CD34在T-ALL的高表達與預后不良相關，CD34+的T-ALL完全緩解率低于CD34-的 T-ALL 患者。有研究認為CD34抗原表達是兒童ALL的獨立高危因素，臨床特征上主要表現為肝、脾、淋巴結腫大等髓外浸潤[13]。

當ALL伴有髓系抗原表達時，可能在細胞形態及組化染色上發生一定的改變，特別是混合型急性白血病，給實驗室骨髓細胞形態學工作人員造成很大的困擾。在這些細胞形態及組化染色模棱兩可的白血病診斷中，免疫分型的作用顯得尤為為重要，尤其是診斷混合型急性白血病(T淋巴細胞表型/髓系表型、B淋巴細胞表型/髓系表型、T淋巴細胞表型/B淋巴細胞表型、T淋巴細胞表型/B淋巴細胞表型/髓系表型)時。

骨髓細胞形態學具有成本低，時間短等優點，能夠確診多數 ALL，易于在各層次醫院開展。但是傳統的FBA分型只能在細胞水平對白血病進行分類，而細胞的形態千變萬化，對工作人員要求較高，對于混合型急性白血病等形態不典型者判斷困難，有一定局限性。免疫分型是通過檢測白血病細胞表面或細胞內的抗原標志,客觀地對惡性腫瘤細胞的來源進行分析鑒別,對骨髓細胞形態學是有力的補充,不僅有助于臨床確診，其分型更為合理地制定治療方案以及判斷預后提供有力依據。

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本文編輯：周文超

盧 榕,女,主管技師,從事血液與骨髓檢驗工作

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1671-0126(2016)05-0034-03