生殖道沙眼衣原體感染相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)志評估

韋絢 秦秀妹 黃靜 于路妹 李志勤

廣西桂林醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 1)婦產(chǎn)科 2)檢驗科 桂林 541001

生殖道沙眼衣原體感染相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)志評估

韋絢1)秦秀妹1)黃靜1)于路妹2)李志勤1)

廣西桂林醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 1)婦產(chǎn)科 2)檢驗科 桂林 541001

目的 探討可以評估生殖道沙眼衣原體感染相關(guān)的生物學(xué)指標(biāo)。方法 選取2014-08—2015-12間診斷為生殖道沙眼衣原體感染的32例育齡婦女為感染組。選取同期無感染的32例育齡婦女為未感染組。采用ELISA法對比2組HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α、IL-6的表達(dá)。同時利用脂多糖(LPS)刺激體外培養(yǎng)的正常宮頸上皮細(xì)胞，對比LPS刺激后細(xì)胞與正常細(xì)胞不同時間點的HD-5、TNF-α水平變化。結(jié)果 感染組HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α、IL-6表達(dá)均顯著高于未感染組。LPS刺激后細(xì)胞在感染1d、2d后的HD-5、TNF-α水平均顯著高于正常細(xì)胞，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 沙眼衣原體屬于生殖道感染的重要病菌，應(yīng)注意檢查及預(yù)防。

生殖道；沙眼；衣原體；感染；宮頸上皮細(xì)胞

沙眼衣原體是常見的人類致病菌[1]，且致病范圍十分廣泛，除生殖道疾病外甚至還可導(dǎo)致呼吸道、眼結(jié)膜等疾病[2]。近年來，隨著醫(yī)療水平的不斷進(jìn)步，沙眼衣原體與人類生殖道感染的關(guān)系備受關(guān)注。部分沙眼衣原體可從下生殖道上行進(jìn)而感染上生殖道，最終導(dǎo)致患者不孕、不育[3-5]。現(xiàn)對可以評估生殖道沙眼衣原體感染相關(guān)的生物學(xué)指標(biāo)進(jìn)行探討，以更好為臨床診斷與治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014-08—2015-12間在我院診斷為生殖道沙眼衣原體感染的32例育齡婦女為感染組，年齡22～52歲，平均33.2歲。選取同期進(jìn)行體檢的無生殖道感染的32例育齡婦女為未感染組，年齡23～53歲，平均33.3歲。2組患者的基本資料對比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。1.2 研究方法 (1)患者均使用無菌生理鹽水對陰道進(jìn)行灌洗，停留1 min后抽回液體，保存于-80℃低溫醫(yī)用冰箱中。采用ELISA試劑盒(尚柏公司生產(chǎn))統(tǒng)一檢測2組HD-5、TNF-α、IL-8水平以及IL-1α、IL-6的表達(dá)。嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。(2)LPS刺激：用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)由良性病變切除子宮患者的遠(yuǎn)離鱗柱交界部的宮頸上皮組織5 d左右，并統(tǒng)一選取第4代細(xì)胞，接種在35 mm培養(yǎng)皿中，置入100 ng/mL的LPS進(jìn)行刺激。分別收集0d、1d、2d后細(xì)胞營養(yǎng)液并分離上清液，保存于-80℃低溫醫(yī)用冰箱中，采用ELISA方法測定HD-5、TNF-α水平變化。

1.3 觀察指標(biāo) 對比2組HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α及IL-6表達(dá)。比較LPS刺激后細(xì)胞與正常細(xì)胞在不同時間段HD-5及TNF-α水平。

2 結(jié)果

2.1 2組HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α、IL-6水平對比 感染組HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α、IL-6水平均顯著高于未感染組，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 2組HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α、IL-6指標(biāo)對比(例，

注：與未感染組相比，*P<0.05

2.2 LPS刺激后的細(xì)胞與正常細(xì)胞在不同時間段HD-5水平對比 0 d時2組HD-5水平無明顯差異，而1 d后、2 d后LPS刺激后細(xì)胞的HD-5水平均顯著高于正常細(xì)胞，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 LPS刺激后細(xì)胞與正常細(xì)胞在不同時間段HD-5水平對比

注：與正常細(xì)胞相比，*P<0.05

2.3 LPS刺激后細(xì)胞與正常細(xì)胞在不同時間段TNF-α水平對比 0 d時2組TNF-α水平無明顯差異，而1 d后、2 d后刺激后細(xì)胞的TNF-α水平均顯著高于正常細(xì)胞，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 LPS刺激后細(xì)胞與正常細(xì)胞在不同時間段TNF-α水平對比

注：與正常細(xì)胞相比，*P<0.05

3 討論

沙眼衣原體是目前全球范圍內(nèi)主要性傳播疾病之一[6]，可通過性傳播以及圍產(chǎn)期傳播，會導(dǎo)致患者出現(xiàn)宮頸炎、子宮內(nèi)膜炎、盆腔感染性疾病、新生兒肺炎、異位妊娠等[7]。沙眼衣原體會異化其他感染病原傳播，其中沙眼衣原體在女性患者中感染時的靶細(xì)胞為宮頸上皮細(xì)胞。由此，宮頸上皮細(xì)胞在作為機械屏障的同時還具有限制病原侵入黏膜下的作用[8]，還能分泌防御素5(human defensin5，HD-5)等直接在病原中產(chǎn)生作用，同時分泌IL-8、TNF-α等細(xì)胞因子對患者免疫反應(yīng)進(jìn)行調(diào)節(jié)[9]。有報道表明[10]，患者在感染沙眼衣原體后出現(xiàn)的免疫應(yīng)答反應(yīng)具干擾病原、抑制感染繼續(xù)進(jìn)展的作用。而反復(fù)以及慢性感染會導(dǎo)致出現(xiàn)炎癥相關(guān)的組織損害與疤痕形成。因此，對HD-5、TNF-α等細(xì)胞因子進(jìn)行深入探討研究，可明確沙眼衣原體感染機制，為臨床治療提供參考依據(jù)。

本次觀察發(fā)現(xiàn)：感染組HD-5、TNF-α、IL-8水平以及IL-1α、IL-6含量均顯著高于未感染組。其中HD-5屬于人類防御素之一，是先天性免疫系統(tǒng)中的重要因子。其主要位于細(xì)胞漿內(nèi)，當(dāng)外界出現(xiàn)感染后會主動釋放，從而達(dá)到抑制細(xì)菌生長的功效。IL-8屬于具有化學(xué)趨化作用的炎性因子，可通過誘導(dǎo)白細(xì)胞在感染部位進(jìn)行聚集而達(dá)到抗菌的功效。與此同時，IL-1α與IL-6可在病原體感染的早期增強黏附分子與趨化因子的表達(dá)。而TNF-α主要作用是可顯著減少L-色氨酸，而L-色氨酸屬于病原生長所必需物質(zhì)，因此能有效抑制沙眼衣原體感染以及生長[11]。此外，本文顯示感染組經(jīng)LPS刺激后細(xì)胞在感染1 d后、2 d后HD-5、TNF-α水平均顯著高于正常細(xì)胞。筆者認(rèn)為，經(jīng)LPS刺激后正常宮頸上皮細(xì)胞上清液中HD-5水平明顯增加，提示正常宮頸上皮細(xì)胞在遭受病原刺激后可持續(xù)分泌HD-5進(jìn)行抗菌。TNF-α經(jīng)LPS刺激后分泌量呈時間依賴性增加，表明宮頸上皮細(xì)胞在發(fā)生感染后可在免疫損傷方面發(fā)揮一定作用。另有研究表明[12]，沙眼衣原體感染由于血清型較多且易發(fā)生變異，因此易產(chǎn)生耐藥，且通常合并一種或幾種性傳播疾病，由于臨床大部分藥物效果有限，可將HD-5列為陰道局部給藥的備選之一。

[1] 陳曦，劉朝暉.生殖道沙眼衣原體感染的流行病學(xué)現(xiàn)狀[J].中國性科學(xué)，2016，25(1)：95-97.

[2] 肖秀美，高爽，楊旭，等.2998例男性患者解脲脲原體、淋病奈瑟菌和沙眼衣原體感染調(diào)查分析[J].中國男科學(xué)雜志,2016,30(1):21-24.

[3] 陳煜岊，楊嵐.沙眼衣原體感染分子流行病學(xué)進(jìn)展[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2015，27(12)：1 480-1 482.

[4] 張建霞，劉芳，成凌，等.深圳市羅湖區(qū)2010-2014年生殖道沙眼衣原體感染流行特征[J].中國熱帶醫(yī)學(xué),2015,15(11):1 407-1 408.

[5] 梅韜.莫西沙星、阿奇霉素、米諾環(huán)素治療女性生殖道沙眼衣原體感染臨床療效動態(tài)觀察[J].中國婦幼保健,2015,30(18):3 019-3 021.

[6] 劉小琴，陳小平，景尉，等.生殖道支原體和沙眼衣原體感染與女性不孕關(guān)系的探討[J].中國初級衛(wèi)生保健，2014，28(3)：68-70.

[7] 龍梅，田翠蕓，王松峰，等.不孕癥患者盆腔粘連程度與陰道分泌物及腹腔液中支原體和衣原體感染的關(guān)系[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2015,38(8):988-990.

[8] 趙建宏，胡娟，陳影培，等.398例女性泌尿生殖道衣原體支原體檢測及支原體耐藥性分析[J].安徽醫(yī)學(xué),2014,35(3):356-357.

[9] 吳磊，楊陽，唐振華，等.改良免疫層析法檢測泌尿生殖道沙眼衣原體感染的評價[J].檢驗醫(yī)學(xué),2014,29(12):1 226-1 229.

[10]王振輝，楊麗霞，張春霞，等.TLR2介導(dǎo)沙眼衣原體感染早期免疫應(yīng)答的機制研究[J].標(biāo)記免疫分析與臨床,2015,22(9):921-923.

[11]王振輝，常曉彤，郝敏，等.Toll樣受體2(TLR2)和TLR4在沙眼衣原體生殖道感染介導(dǎo)的免疫應(yīng)答[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2015,31(10):1 336-1 341.

[12]鄭熠，胡權(quán).生殖道沙眼衣原體感染的分子流行病學(xué)研究進(jìn)展[J].國際流行病學(xué)傳染病學(xué)雜志,2016,43(1):58-61.

(收稿 2016-06-15)

Evaluation of biological markers associated with Chlamydia pneumoniae infection in genital tract

WeiXuan,QinXiuzhu,HuangJing,YuLumei,LiZhiqin.

DepartmentofObstetricsandGynecology,theSecondAffiliatedHospitalofGuilinMedicalCollege，Guilin541001，China

Objective To explore the biological marker of Chlamydia infection in genital tract. Methods In our hospital diagnosed as genital Chlamydia trachomatis infection of childbearing age women in 32 cases from the August 2014 to December 2015, remembered as the infection group. The other non reproductive tract infections 32 cases of women of childbearing age remember as the uninfected group. Using ELISA method and compared between the two groups HD-5, TNF-α, IL-8 level and IL-1α, IL-6 content. At the same time, the lipopolysaccharide in vitro stimulation of normal cervical epithelium under the package, compared with the LPS stimulated cells and normal cells at different time points of HD-5, TNF-α.Results The levels of HD-5, TNF-α, IL-8,IL-6 and IL-1α were significantly higher in the infection group than those in the uninfected group, and the levels of the infection group were significantly higher. After LPS stimulation, the levels of HD-5, TNF-IL-6 and 1d in LPS group were significantly higher than those in the normal group after infection with 2d.Conclusion Chlamydia pneumoniae is an important pathogen of reproductive tract infection, and should be paid attention to and prevention.

Genital tract; Chlamydia; Infection; Cervical epithelial cells

廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳科研課題(Z2014337)

R446.5

A

1077-8991(2017)01-0007-03