星形細胞瘤中IGF2的表達及臨床意義

謝欣 褚明亮 陳祎 張著學 楊迎春 易韋△ 于燕妮

(1.貴州醫科大學，貴州 貴陽 550004，2.貴州醫科大學附屬人民醫院，貴州 貴陽 550002)

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星形細胞瘤中IGF2的表達及臨床意義

謝欣1*褚明亮2陳祎2張著學2楊迎春2易韋2△于燕妮1☆

(1.貴州醫科大學，貴州 貴陽 550004，2.貴州醫科大學附屬人民醫院，貴州 貴陽 550002)

目的 檢測人腦星形細胞瘤及瘤旁組織中IGF2的表達，并研究其與患者臨床特征關系。方法 收集貴州省人民醫院病理科星形細胞瘤組織標本143例和90例星形細胞瘤旁組織，采用免疫組化S-P二步法檢測IGF2的表達情況，并結合相關臨床因素進行統計學分析。結果 IGF2在瘤旁組織中低表達,陽性率為13.3%(12/90)；在星形細胞瘤低級別組和高級別組中均不同程度陽性表達，陽性率分別為46.8%(29/62)，64.2%(52/81)，且高級別組中表達與水平均顯著高于低級別組(χ2=4.341，P<0.05)。結論 IGF2的表達星形細胞瘤病理級別及患者預后關系密切。IGF2的檢測可能成為膠質瘤生物標記的新指標。

神經膠質瘤； 免疫組化； IGF2

星形細胞瘤被認為是中樞神經系統最常見和致命的原發性惡性腫瘤，由于其擴散性生長方式和異常的腫瘤細胞增殖能力，導致常規的手術及放療、化療技術，在臨床實踐上效果并不是很理想[1]。而分子生物學等學科的快速發展，為研究者們了解膠質瘤的發病機理，判斷膠質瘤分型和分級及患者預后判斷，甚至進行生物靶點治療等提供一定幫助[2]。胰島素樣生長因子2(insulin-like growth factor-2，IGF2 )是一種胚胎生長因子，其基因表現為雙等位基因表達，稱為印跡消失(Loss of imprinting)。IGF2的印跡異常可使其表達量成倍增加，從而促進腫瘤的發生和生長[3-5]。本研究將通過檢測星形細胞瘤中IGF2蛋白的表達，評估它和患者臨床病理特征及預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2008年1月至2013年12月貴州省人民醫院病理科星形細胞瘤石蠟組織標本143例(毛細胞星形細胞瘤4例，彌漫星形細胞瘤58例，間變星形細胞瘤41例，膠質母細胞瘤40例)。其中男85例，女58例。年齡4～75歲，中位年齡45歲。按2007年版“WHO中樞神經系統腫瘤的病理分級”，將星形細胞瘤分低級別組(Ⅰ～Ⅱ級)62例，高級別組(Ⅲ～Ⅳ級)81例。另取星形細胞瘤瘤旁組織石蠟標本共90例。

1.2 常規HE染色 對143例星形細胞瘤石蠟切片組織進行蘇木精—伊紅染色，經10%中性福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，切片厚4 μm，65 ℃烤片2 h；脫蠟，水化，蘇木精染色，自來水洗；1%鹽酸酒精中分化，自來水洗；1%碳酸鋰中反藍，自來水洗；伊紅染色，自來水洗；封片。光鏡下觀察并記錄膠質瘤組織病理形態學變化。

1.3 免疫組化染色 采用免疫組化S-P法，所有標本均經10%中性福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，切片厚4 μm，65 ℃烤片2 h。脫蠟，水化，IGF2兔抗人多克隆抗體(北京博奧森生物技術公司，稀釋度為1∶100)4 ℃孵育過夜；PBS沖洗，37 ℃孵育25 min；PBS沖洗，DAB顯色，蘇木素復染。試劑公司提供組織作為陽性對照，另外用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 IGF2蛋白陽性和陰性結果判斷 細胞的胞漿為棕黃色顆粒樣染色，即判為IGF2蛋白陽性表達。組織內細胞胞漿沒有著色，但組織內非腫瘤細胞如：血管內皮細胞、小膠質細胞、淋巴細胞等的胞漿為棕黃色顆粒樣染色，則仍判為腫瘤細胞IGF2蛋白陰性。

1.5 隨訪 收集2012年1月至2013年12月臨床星形細胞瘤病例61臨床資料并進行隨訪。共隨訪成功50例。采用電話聯系方式進行隨訪，截止時間2015年5月。隨訪內容為：一般情況，是否復發及復發后是否繼續治療，是否存活，若死亡，具體死亡病因及時間。記錄患者具體死亡日期。

1.6 統計學方法 采用SPSS19.0處理數據，計數資料差異性分析采用χ2檢驗，關聯性分析采用Spearman等級相關分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 IGF2蛋白在星形細胞瘤和瘤旁組織中的表達情況 IGF2蛋白在瘤旁組織中低表達甚至不表達，陽性率為13.3%(12/90)；在膠質瘤組織低級別組和高級別組中均不同程度陽性表達，陽性率分別為46.8%(29/62)，64.2%(52/81)，均顯著高于瘤旁組織中IGF2蛋白的表達水平(χ2=20.841，χ2=47.096，P均<0.001)，且高級別組中表達水平均顯著高于低級別組(χ2=4.341，P<0.05)。見圖1～2。

注：a.彌漫星形細胞瘤；b.間變星形細胞瘤；c.膠質母細胞瘤； d.巨細胞膠質母細胞瘤。圖1 星形細胞瘤HE染色鏡下形態(×400)

注：a.IGF2蛋白在瘤旁組織中的表達情況； b.IGF2蛋白在星形細胞瘤組織中的表達情況圖2 IGF2蛋白在瘤旁組織及星形細胞瘤中表達情況(×400)

2.2 星形細胞瘤中IGF2蛋白的表達與患者臨床病理特征及預后的關系 星形細胞瘤組織中IGF2蛋白的表達在不同性別和年齡組中，差異不大，無統計學意義(P>0.05)，但IGF2蛋白表達與星形細胞瘤病理分級關系密切，且生存時間≤12個月與>12個月組間比較，差異亦有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 星形細胞瘤中IGF2蛋白的表達與患者臨床病理特征及預后的關系

3 討 論

膠質瘤主要指從星形細胞、少突膠質細胞及室管膜細胞三種細胞來源的腫瘤，一般瘤組織以缺少膠原、網狀纖維及纖連蛋白為特點[6]。星形細胞瘤是膠質瘤組織中最常見的類型，是具有星形膠質細胞的分化特點，其與由星形膠質細胞衍化來的膠質母細胞瘤是最常見的中樞神經系統腫瘤，約占神經上皮組織腫瘤的61.4%[7]。星形細胞瘤在各年齡期均可發病，但存在高峰年齡，8～18歲之間多見小腦星形細胞瘤，35～45歲多見大腦星形細胞瘤，GFAP是星形膠質細胞的中間絲蛋白，是星形細胞瘤很好的標記物，主要表達于分化成熟的星形細胞瘤[7]。研究[8]表明，在星形細胞瘤中存在ATRX基因(α-thalassemia/mentalretardation syndrome X-linked)的突變缺失，而ATRX基因是α地中海貧血/精神發育遲滯綜合征的致病基因，可激活下游信號通路從而影響細胞的凋亡進而導致腫瘤的形成。因此，國際神經病理學學會“ISN-Haarlem”共識[9]確定將ATRX基因的突變缺失作為星形膠質細胞瘤的一個特征性分子標志物。目前星形細胞瘤的治療方案以手術治療結合放、化療為主，這使膠質瘤患者臨床預后有了一定的改善，但對于高級別神經膠質瘤的患者，其生存率仍持續低水平，給臨床醫生們帶來諸多苦惱。隨著分子生物學等學科的快速發展，為研究者得以從分子的角度進一步了解膠質瘤發病機理。判斷膠質瘤分型和分級，以及進行生物靶點治療甚至判斷膠質瘤患者預后等提供一定幫助[10]。

胰島素生長因子(insulin-like growth factor，IGF)是一類多肽家族，包括IGF1、IGF2、IGF1R、IGF2R和IGFBPs(是一類具有高結合能力的蛋白)，對細胞的增殖分化和生長發育及組織修復等發揮一定作用。IGF2蛋白具有該家族一系列典型的生物學特性，其在胚胎時期高表達于多種組織，胎兒出生后隨即降低至消失[3]，此后其作用基本由IGF1代替[11]。有研究[12]發現，IGF2基因的印跡丟失(loss of impringting，LOI)與IGF2蛋白存在顯著的正相關性，且印記丟失促進了該蛋白的表達，從而發揮了抑制腫瘤細胞凋亡、促進腫瘤細胞增殖及惡性轉化的作用。已有研究[4,13-14]者在胃癌、肝癌、乳腺癌等諸多腫瘤組織中檢測出IGF2蛋白的高表達，并發現IGF2蛋白的表達與患者預后存在密切聯系。本研究結果顯示， IGF2蛋白在星形細胞瘤組織中較瘤旁組織顯著高表達，提示IGF2蛋白與星形細胞瘤的發生是密切相關的。進一步將星形細胞瘤分為低級別組和高級別組，分析IGF2蛋白的表達情況，發現IGF2蛋白表達水平隨腫瘤病理分級級別增高而增高，提示IGF2蛋白與星形細胞瘤的進展密切相關。鑒于此，我們進一步分析了IGF2蛋白表達水平與患者預后的關系。我們選取一年(12個月)的生存期作為時間截點，分析IGF2蛋白表達情況和生存時間的相關性，結果顯示IGF2蛋白陽性的生存時間相對較差，表明IGF2蛋白表達與患者預后關系密切。因此，我們認為，IGF2蛋白的檢測對臨床診斷和分級有一定價值，可能成為膠質瘤輔助生物標記的新指標及基因治療的潛在靶點。

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Expression of IGF2 in astrocytoma and its clinical significance

XieXin1,ChuMingliang2,ChenYi2,ZhangZhuxue2,YangYingchun2,YiWei2,YuYanni1.

1.GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China. 2.AffiliatedthePeople'sHospitalofGuizhouMedicalUniversity,Guiyang550002,Guizhou,China.

Objective To investigate the expressions and clinical significance of IGF2 in astrocytoma and study the clinical feature relationship with patients. Methods Expression of IGF2 was analyzed by S-P immunohistochemsitry in 143 cases of astrocytoma and 90 cases of adjacent nontumorous tissues. Results IGF2 was lower expression in the adjacent tumorous tissues and positive expression rate was 13.3% (12/90). There were different degree positive expression of IGF2 in the astrocytoma tissue low and high grade groups , and positive expression rate were 46.8%(29/62) and 64.2%(52/81), respectively. Positive expression rate of IGF2 in astrocytoma tissue were higher than those in adjacent nontumorous tissues(χ2=4.341，P<0.05). The expression rate of IGF2 was positively correlated with the pathological gradingand pathologic stage. Conclusions IGF2 protein may be a new marker of astrocytoma, and may be helpful in judging the prognosis of astrocytoma patients.

Astrocytoma； Immunohistochemistry； IGF2

貴州省科技廳[黔科合字LH(2014)7017號]

R739.41

A

1000-744X(2016)07-0678-03

2016-06-21)

*貴州醫科大學病理學研究生

△☆通信作者，△E-mail：yiwei6252@sina.com；☆E-mail:gyyxyb2010@163.com