冠心病患者血清IL-8表達量與血小板gpⅡb/Ⅲa活性白細胞血小板聚集率之間的關系

白建蓉 閔興明 黃遠帥

(1.合江縣人民醫院輸血科，四川 合江 646200；2.西南醫科大學附屬醫院輸血科,四川 瀘州 646000)

?

冠心病患者血清IL-8表達量與血小板gpⅡb/Ⅲa活性白細胞血小板聚集率之間的關系

白建蓉1閔興明1黃遠帥2

(1.合江縣人民醫院輸血科，四川 合江 646200；2.西南醫科大學附屬醫院輸血科,四川 瀘州 646000)

目的 探討冠心病患者血清白介素-8(IL-8)表達水平與血小板糖膜蛋白(gp)Ⅱb/Ⅲa活性、白細胞血小板聚集率之間的關系。方法 選取確診的冠心病患者129例，其中穩定性心絞痛患者72例(SAP組)、不穩定性心絞痛患者57例(UAP)組，選取同期健康人群60名作為健康組，分別對比三組的血清IL-8、gpⅡb/Ⅲa活性、白細胞血小板聚集率等指標，并分析其相關性。結果 SAP組、UAP組患者的血小板中性粒細胞聚集率、血小板單核細胞聚集率顯著高于健康組(P<0.05)；SAP組與UAP組差異無統計學意義(P>0.05)；SAP組、UAP組患者的gpⅡb/Ⅲa、IL-8水平顯著高于健康組(P<0.05)；SAP組與UAP組差異無統計學意義(P>0.05)；冠心病患者的IL-8水平與gpⅡb/Ⅲa、血小板中性粒細胞聚集率、血小板單核細胞聚集率均呈顯著的正相關關系(P<0.05)。結論 冠心病患者的IL-8水平與gpⅡb/Ⅲa活性及血小板白細胞聚集率呈顯著的正相關關系，IL-8在冠心病病變過程中發揮重要作用。

冠心病； 血清白介素-8； 糖膜蛋白Ⅱb/Ⅲa活性; 血小板聚集率

冠狀動脈病變是導致老年患者心血管不良事件發生的重要因素[1]。在冠狀動脈血管內皮損傷的基礎上，血小板的局部富集以及對于中性粒細胞的趨化作用，可以進一步促進血小板的活化和血栓的形成，導致冠狀動脈的進一步損傷。IL-8是參與炎癥反應的重要中間介質，通過介導炎癥免疫反應，進而促進冠心病血瘀證的形成[2-3]。然而，迄今為止關于IL-8對于血小板的活化以及中性粒細胞的趨化作用的分析較少，本次研究探討了相關因子的表達，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取合江縣人民醫院確診的冠心病患者129例，其中穩定性心絞痛患者72例(SAP組)、不穩定性心絞痛患者57例(UAP)組，選取同期健康人群60名作為健康組。SAP組，男47例，女25例，年齡48～75歲；平均年齡(64.6±8.8)歲。UAP組，男40例，女17例；年齡50～77歲，平均年齡(63.9±9.0)歲。健康組，男41名、女19名，年齡48～77歲，平均年齡(63.3±9.0)歲。三組一般資料比較差異均無統計學意義(P>0.05)。

1.2 納入及排除標準 納入標準：(1)冠心病患者的診斷標準主要依據美國心臟病協會/心臟病學會《慢性穩定性心絞痛診療指南》、《不穩定心絞痛、非ST段抬高性心肌梗死診療指南[4]中的標準》；(2)診斷方法主要依據心電圖、心電負荷試驗、心肌核素現象或冠脈造影等檢查；(3)UAP患者主要表現為：患者靜息或輕微勞力即可發生持續時間≥20 min的心絞痛癥狀，24 h發作次數≥1次，心電圖相鄰導聯的ST段抬高或壓低超過1 mm；穩定性心絞痛患者表現為典型的勞力因素誘發，經休息可緩解；(4)本研究取得研究對象的知情同意并簽訂協議書。排除標準：(1)完全性閉塞性病變患者；(2)左室射血分數<40%的患者；(3)合并傳導阻滯、心臟瓣膜病變的患者；(4)合并急慢性感染、惡性腫瘤、免疫性疾病的患者。

1.3 檢測方法

1.3.1 IL-8檢測方法 一次性真空采血管(血液凝固實驗專用)內有3.1%檸檬酸鈉 ,日本株氏會社生產,嚴格按標準采集標本，IL-8的檢測采用Sysmex系列CA-1500全自動血凝儀檢測，試劑由 DadeBehring公司配套生產。

1.3.2 gpⅡb/Ⅲa活性以及血小板聚集率 采集患者清晨空腹血5 mL，置于肝素鈉抗凝管中，采用流式細胞儀法進行gpⅡb/Ⅲa活性以及血小板聚集率表達檢測。相關標記操作于5 mL抗凝管中進行，100 μL全血與CD14-FITC/CD45-PE以及CD42鼠抗人抗體室溫反應25 min ，對照組采用同型IG1-FITC以及IG2-PE(購自美國BD公司)混勻，采用紅細胞裂解液optiLYse C 溶血素溶解紅細胞，PBS液體洗滌三遍，5min/次，生理鹽水重新懸浮細胞，上機檢測，CD45/SS以及CD61/SS分別檢測gpⅡb/Ⅲa活性以及血小板聚集率的表達(FACS calibur流式細胞儀購自美國BD公司)。

1.4 基線資料比較 統計分析三組患者的一般資料：高血壓、糖尿病、吸煙、體質量指數(BMI)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、左室射血分數(LVEF%)的差異。

2 結 果

2.1 三組患者的一般基線資料比較 SAP組、UAP組、健康組研究對象的BMI、HDL-C、LDL-C、吸煙率、LVEF%差異無統計學意義(P>0.05)，SAP組和UAP組患者的高血壓、糖尿病、高血脂發生率及TG、TC水平顯著高于健康組(P<0.05)，見表1。

表1 三組患者一般基線資料比較

注：與SAP、UAP組比較，*P<0.05。

2.2 三組患者血小板白細胞聚集率 血小板中性粒細胞的聚集率：SAP組(24.61±2.59)%，UAP組(25.03±2.74)%，健康組(17.62±2.15)%；血小板單核細胞的聚集率：SAP組(47.36±3.79)%，UAP組(48.15±4.08)%，健康組(33.81±3.04)%。SAP組、UAP組患者的血小板中性粒細胞聚集率、血小板單核細胞聚集率顯著高于健康組(P<0.05)；SAP組與UAP組差異無統計學意義(P>0.05)。

2.3 三組患者gpⅡb/Ⅲa、IL-8水平比較 SAP組、UAP組患者的gpⅡb/Ⅲa、IL-8水平顯著高于健康組(P<0.05)；SAP組與UAP組差異無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 三組患者gpⅡb/Ⅲa、IL-8水平比較

注：與SAP、UAP組比較，*P<0.05。

2.4 冠心病患者血清IL-8水平與血小板細胞聚集率、gpⅡb/Ⅲa的相關性 冠心病患者的IL-8水平與gpⅡb/Ⅲa、血小板中性粒細胞聚集率、血小板單核細胞聚集率均呈顯著的正相關關系(r=0.621,r=0.533,r=0.429,P<0.05)

3 討 論

高血壓，血脂異常(總膽固醇過高或低密度脂蛋白膽固醇過高、甘油三酯過高、高密度脂蛋白膽固醇過低)、超重/肥胖、高血糖/糖尿病均為冠心病的獨立危險因素。長期的血脂代謝異常如低密度脂蛋白LDL-C以及甘油三酯或者膽固醇的高負荷，可以通過損傷冠狀動脈血管內皮，進而促進內皮下平滑肌層的暴露，Ⅲ型膠原纖維的暴露可以與局部血小板結合，通過正反饋機制調節血中的血小板活化，促進血小板性血栓的形成[5-6]。在粥樣斑塊的基礎上發生的斑塊破裂以及出血等，導致不穩定型心絞痛或者心肌梗死的發生[7]。但IL-8作為介導級聯式炎癥反應以及局部免疫調節的重要物質，其對于血小板的活化以及中性粒細胞的趨化效果分析較少。

不穩定型心絞痛(unstable angina pectoris，UAP)以及穩定性心絞痛組(stable angina pectoris，SAP)組患者的基礎臨床資料比較可見，體質量指數以及脂蛋白差異不明顯，但是高血壓以及糖尿病的發生率在UAP組以及SAP組患者中明顯增加，甘油三酯以及總膽固醇等血清血脂代謝指標明顯增加。IL-8介導的體內血管性內皮損傷以及局部組織炎癥反應，本次研究發現UAP組與SAP組患者的IL-8表達明顯增加，均高于60 ng/L，但ACS組以及SAP組間并無明顯差別，IL-8在觀察組患者血清中的高表達提示其可能參與到了冠狀動脈粥樣硬化的發病中。血小板則與暴露的內皮下基質發生黏附、聚集，并激活血小板，最終形成血栓。gpⅡb/Ⅲa是反應血小板活化的重要指標，gpⅡb/Ⅲa>20%時，局部血小板指數可升高15%以上，血小板明顯活化，可明顯促進血小板性血栓或者混合性血栓的形成[8]。UAP組以及SAP組的gpⅡb/Ⅲa均明顯升高，兩組均>15%，明顯高于對照組，血小板的進一步活化可促進內皮下肌層的損傷，同時血小板可誘導血管壁多種細胞分泌炎癥因子如TNF-a以及TGF-β參與動脈粥樣硬化的形成。在粥樣硬化斑塊的形成中，中性粒細胞的趨化和募集是促進冠狀動脈內皮層單核細胞浸潤、吞噬以及泡沫細胞形成的重要調節因素，血小板單核細胞聚集率>15%時，膠原纖維Ⅲ型表面受體的表達明顯增強，中性粒細胞粘附作用增強，本次研究中的中性粒細胞聚集率、血小板單核細胞聚集率均上升了25%左右，提示了IL-8可以同時通過介導中性粒細胞的趨化以及血小板的活化，進而促進冠狀動脈的損傷。然而，本次研究中并未發現UAP組以及SAP組間的相關趨化因子的差異，鑒于兩組患者的冠狀動脈的病變程度不一，且UAP并發粥樣斑塊破裂以及血栓形成的病理變化更為多見，血小板以及中性粒細胞的改變并無明顯，可能與入組患者的病程以及治療療程和用藥劑量不一有關。

綜上所述，血清炎癥因子IL-8顯著參與了冠心病的發病過程，同時其機制可能與介導局部血小板活化以及中性粒細胞的趨化作用有關，希望后續研究可以進一步排除冠心病患者用藥或者治療療程的差異對于檢測結果的影響，進而進一步明確IL-8在介導粥樣硬化病變中的生物學作用。

[1] 申彥菊，劉鴻，陳青云，等. 運動對糖尿病動脈粥樣硬化大鼠Toll樣受體促炎通路的影響[J]. 中國糖尿病雜志,2015,22(10):921-926.

[2] 曹佳，徐延勇，商亮，等. 載脂蛋白E擬肽EpK對apo-/-小鼠動脈粥樣硬化的影響[J]. 生物化學與生物物理進展,2015,23(9):833-842.

[3] 陳晶晶，文美，毛華，等. IL-8及Ps在冠心病患者介入治療后不同時期變化的研究[J]. 貴州醫藥, 2006,30(10):885-887.

[4] 劉俊田. 動脈粥樣硬化發病的炎癥機制的研究進展[J]. 西安交通大學學報(醫學版),2015,30(2):141-152.

[5] 郝寶順，劉雪蓮，劉勇，等. 瑞舒伐他汀對同型半胱氨酸損傷人臍靜脈內皮細胞血管細胞間黏附分子-1表達的影響[J]. 廣東醫學,2015,23(11):1646-1648.

[6] 王竹，高永翔. 動脈粥樣硬化與巨噬細胞源性泡沫細胞的相關研究進展[J]. 細胞與分子免疫學雜志,2015,25(6):853-855.

[7] 劉瑩瑩，盧義，孫敏，等. 炎癥因子TGF-β1、IFN-γ在冠心病患者中的表達及意義[J]. 中國免疫學雜志,2015,20(3):404-405.

[8] 趙依帆，潘思京，高真真，等. 動脈粥樣硬化的炎癥信號通路研究進展[J]. 中華老年心腦血管病雜志,2014,16(12):1332-1334.

Relationship between the expression of serum IL-8 in patients with coronary heart disease and the platelet aggregation rate of platelet Ⅱb/Ⅲa

BaiJianrong1,MinXingming1,HuangYuanshuai2.

1.DepartmentofBloodTransfusionRoom,HejiangCountyPeople'sHospital,Hejiang646200,Sichuan,China. 2.DepartmentofBloodTransfusionRoom,AffiliatedofHospital,South-WestMedicalUniversity.Luzhou646200,Sichuan,China.

Objective To study relationship and clinical significance of serum interleukin 8 (IL-8) expression levels and platelet membrance glycoprotein (GP GP Ⅱb /Ⅲ A activity and leukocyte platelet aggregation rate in patients with coronary heart disease (CHD). Methods 129 cases diagnosed CHD patients were selected in our hospital, which 72 patients with stable angina pectoris (SAP group), 57 patients with unstable angina pectoris (UAP) group. And the same period 60 cases of healthy people was chose as a health group. The serum IL-8, gpⅡb / Ⅲa activity, leukocyte platelet aggregation rate and other indicators were compared and analyzed their relevance in the three groups.Results SAP group and UAP group of patients with platelet neutrophil aggregation rate, platelet monocyte aggregation rate was significantly higher than that of the healthy group (P<0.05) and there were statistical significantly differences, but there were no statistical significantly differences between SAP and UAP groups (P>0.05). SAP and UAP groups of patients with GP Ⅱb / Ⅲ A, IL-8 levels significantly higher than healthy group (P<0.05), but SAP and UAP group there were no statistical significantly differences (P>0.05). In patients with CHD levels of IL-8 and GP Ⅱb / Ⅲ A, platelet neutral granulocyte aggregation rate, platelet monocyte aggregation rate were showed significant positive correlation (P<0.05). Conclusion IL-8 levels in patients with CHD gpⅡb / Ⅲa leukocyte activity and platelet aggregation rate is a significant positive correlation, IL-8 plays an important role in the course of coronary heart disease.

Coronary heart disease； Serum interleukin-8； Sugar membrane protein Ⅱ b/ Ⅲ A activity；Platelet aggregation rate

四川省衛生廳科研課題(編號：120336)

R541.4；R446.11

A

1000-744X(2016)07-0686-03

2016-04-09)

△通信作者